基因診斷genediagppt課件(參考版)
2025-05-01 22:02本頁(yè)面
【正文】 污染造成的假陽(yáng)性 . 二 .發(fā)展前景 結(jié)束語(yǔ) 基因診斷利用分子生物學(xué)技術(shù) ,從 DNA/RNA水平檢測(cè)基因的存在、分析基因的結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài) ,從而對(duì)疾病作出診斷 .基因診斷的基本技術(shù)是核酸分子雜交和 PCR擴(kuò)增 .前者是最直接 、最準(zhǔn)確的基因診斷技術(shù) ,后者則是應(yīng)用前景最為廣闊的診斷技術(shù) .目前 ,基因診斷技術(shù)已廣泛地應(yīng)用到遺傳病、腫瘤和感染性疾病的診斷 .隨著醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展 ,基因診斷技術(shù)將會(huì)更加廣泛 . 。 第五節(jié) 感染性疾病的基因診斷 每種病原體都有各自特異的遺傳物質(zhì) ,可以是 DNA,也可以是 基因 . 一 .病毒感染性疾病的診斷 : 目前采用免疫法檢測(cè)血清中病毒抗原 . HBV基因組包含 4個(gè)開放閱讀框 ,S、 C 、 P和 X區(qū) ,C區(qū)變異性小 ,是基因診斷采用的目標(biāo)部位 .在用 PCR檢測(cè)時(shí)可擴(kuò)增 HBV的特異核苷酸序列 ,通過 PCR產(chǎn)物的直接電泳分析 、或內(nèi)切酶譜分析、或點(diǎn)雜交、或 Southern印跡等結(jié)果作出判斷 .也可采用基因芯片技術(shù) . (SARS): 是由新型變異冠狀病毒 (SARSCoV)感染引起 . SARSCoV基因組為正鏈單股 RNA,有 11個(gè)開放閱讀框 ,基因組的特異保守序列為編碼 RNA聚合酶的序列 . 基因診斷方法 : ① 采用 RTPCR技術(shù)擴(kuò)增保守序列 ② DNA芯片 二 .診斷細(xì)菌感染性的疾病 用 PCR技術(shù)通過對(duì)致病細(xì)菌所含質(zhì)粒的特異序列 ,設(shè)計(jì)引物 ,檢測(cè)引起的疾病的細(xì)菌類型 . 第五節(jié) 基因診斷存在的問題與發(fā)展前景 一 .基因診斷技術(shù)應(yīng)用存在的問題 目前找到的致病基因不多 ,由多基因及基因 與環(huán)境互作所引發(fā)多種疾病的分子機(jī)制還不 清楚 設(shè)備條件 。 ②導(dǎo)致腫瘤標(biāo)記物產(chǎn)生或含量改變分子機(jī)制不清楚，可用 RTPCR技術(shù)檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物 mRNA的存在或含量的改變。 基因表型標(biāo)志 ：基因產(chǎn)物表達(dá)和調(diào)控異常，表現(xiàn)為所編碼的表達(dá)產(chǎn)物合成紊亂，產(chǎn)生胚胎性抗原，一般出現(xiàn)較晚。僅存在腫瘤細(xì)胞中。 基因檢測(cè)方法： ① PCRSSCP:可檢出有無(wú)突變 ② PCRRFLP:通過內(nèi)切酶位點(diǎn)的消 失或增加檢測(cè) p53的基因突變。 通過檢測(cè)癌基因和抑癌基因診斷腫瘤（續(xù)） 2 .P53基因與腫瘤 ： p53基因是最常被失活的抑癌基 因，失活的分子機(jī)制主要是基因突變，也有因?yàn)榛? 因表達(dá)異常而使 p53失活，約 50%以上的惡性腫瘤有 p53基因突變。 ： 根據(jù) PCR擴(kuò)增的目標(biāo) DNA片段在非變性凝膠電泳中遷移率，將突變基因檢測(cè)出來。 DMD患兒在 5歲前發(fā)病， 20歲左右由于心力衰竭和呼吸衰竭而死亡，發(fā)病率在男性活嬰中約 1/3500 。 ② PCR+RFLP連鎖分析法 檢測(cè)與 β 珠蛋白基因連 鎖的遺傳標(biāo)記進(jìn)行基因診斷 ,如 β 珠蛋白 5’端 有一限制內(nèi)切酶 HgiAI的多態(tài)性位點(diǎn) ,在中國(guó)人 群的頻率為 ③ DNA芯片技術(shù) ： RTPCR定量分析 mRNA的量以助診 斷 二 .杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥 (Duchenne muscular dystrophy,DMD) ? DMD： 是性連鎖隱性遺傳病 ,是由 抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因突變 (突變或缺失 ). 其突出特點(diǎn)為橫紋肌進(jìn)行性萎縮，引起無(wú)力和攣縮。 ⑤ 易于進(jìn)行自動(dòng)化分析，縮短了研究時(shí)間 . 一 . 血紅蛋白病的基因診斷 分為異常血紅蛋白病和地中海貧血 ,前者是由于珠蛋白的基因突變；后者是由于珠蛋白合成速率降低，a鏈和 b鏈合成不平衡。 ③ 與串聯(lián)重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn) (STR)相比， SNP是高度穩(wěn)定的 .尤其是處于編碼區(qū)的 SNP(cSNP),而前者的高突變率容易引起對(duì)人群的遺傳分析出現(xiàn)困難。 單核苷酸多態(tài)性 （ single nucleotid polymorphism， SNP） SNP用作遺傳標(biāo)記具有以下優(yōu)點(diǎn)： ① SNP在人群中是二等位基因性的，在任何人群中其等位基因頻率都可估計(jì)出來。有 300多萬(wàn)個(gè)單核苷酸多態(tài)性 ,SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每 500～
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