植物細(xì)胞工程復(fù)習(xí)(參考版)
2025-04-20 04:35本頁(yè)面
【正文】 間接選擇法：無(wú)直接可供選擇的表型指標(biāo)，借助與突變表型有某種相關(guān)的特征作為間接選擇指標(biāo)。（2） 負(fù)選擇法：選擇培養(yǎng)基，正常生長(zhǎng)細(xì)胞因吸收培養(yǎng)基中外加選擇劑而死亡，突變體不生長(zhǎng)但也不死亡。分正選擇法和負(fù)選擇法 。2． 體細(xì)胞無(wú)性系變異的誘導(dǎo)和選擇方法。（1）細(xì)胞快速增殖時(shí)誘變處理，產(chǎn)生突變率最高；（2）游離的原生質(zhì)體對(duì)誘變劑的敏感性高于愈傷組 織細(xì)胞，但比葉肉細(xì)胞??；（3）化學(xué)誘變劑對(duì)原生質(zhì)體的毒性比物理因素大；（4）單倍體細(xì)胞比二倍體細(xì)胞更敏感等。 （2） 化學(xué)誘變劑：甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ），乙烯亞胺（ＥＬ），５－溴尿嘧啶（ＢＵＤＲ），吖啶橙。3）培養(yǎng)基物理狀態(tài)的影響： 懸浮培養(yǎng)→二倍體；半固化培養(yǎng)→四倍體。）培養(yǎng)條件引起新的異常：（1）培養(yǎng)基成分對(duì)染色體倍性變異的影響：如plopapus gracilis 培養(yǎng)物16條染色體的3個(gè)體細(xì)胞系，2，4－D的Ｂ５培養(yǎng)基，16條染色體的體細(xì)胞系逐步丟失染色體形成穩(wěn)定的 13 條染色體。1．哪些因素會(huì)影響培養(yǎng)物的遺傳變異？（1）植物種類(lèi)，或稱遺傳背景；（2） 材料來(lái)源，組織或器官； （3）繼代培養(yǎng)次數(shù)，次數(shù)增多則變異率增高。裸露的DNA可以是全部或部分染色體，分離的DNA，也可以是基因工程質(zhì)粒。第七章遺傳轉(zhuǎn)化：是指同源或異源的游離DNA分子(質(zhì)粒和染色體DNA)被自然或人工感受態(tài)細(xì)胞攝取，并得到表達(dá)的水平方向的基因轉(zhuǎn)移過(guò)程。芥菜實(shí)驗(yàn)，早期光照 不利胚根的發(fā)育，但胚芽發(fā)育需一定的光照。黑暗時(shí)間與胚 發(fā)育時(shí)期有關(guān)，早期胚暗期長(zhǎng)。 活性炭：通常加入培養(yǎng)基，吸收胚培養(yǎng)中釋放的有毒物或過(guò)量抑制胚生長(zhǎng)的物質(zhì)，使胚順利發(fā)育成熟、成苗。附加物：幼胚培養(yǎng)多處于異養(yǎng)階段，需胚乳和周?chē)哪阁w組織提供營(yíng)養(yǎng)。激素水平：為控制胚性生長(zhǎng)，促進(jìn)胚發(fā)育成熟，要求生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配合使用。因原胚“浸沒(méi)”在高滲透壓的胚乳液中，若處低滲中，幼胚生長(zhǎng)停頓或死亡。③理論研究領(lǐng)域的應(yīng)用，如研究胚發(fā)育中胚乳的作用等。珠心胚干擾雜種胚的確定，珠心胚造成雜種胚夭折。②克服珠心胚干擾，提高育種效率 自然界中有些植物種子存在多胚現(xiàn)象如柑橘、芒果等。 C、接種培養(yǎng)：立即接種培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 B、幼胚剝離：一個(gè)胚為一個(gè)植株，剝離成功與否是幼胚培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。 花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性有何關(guān)系？①胚狀體途徑；②愈傷組織途徑。 花藥培養(yǎng)時(shí)為什么要用較高濃度蔗糖和較低濃度的激素？高濃度2,4D主要誘導(dǎo)花藥形成愈傷組織，增加二倍體細(xì)胞發(fā)育的機(jī)會(huì)?；ㄋ幣囵B(yǎng)與花粉培養(yǎng)有什么不同？花藥培養(yǎng)過(guò)程中花藥為何要經(jīng)過(guò)低溫處理？（1）低溫預(yù)處理明顯提高花粉胚的誘導(dǎo)頻率。逆境有利于花藥中的小孢子在培 養(yǎng)條件下表達(dá)細(xì)胞全能性。 C、一定程度的逆境下有利于花藥萌發(fā)。B、草本植物生長(zhǎng)健壯和生殖生長(zhǎng)高峰期的 花藥誘導(dǎo)頻率高。已證明花藥培養(yǎng)力與一些基因的表達(dá)有關(guān)。如馬鈴薯tuberosum種的80多個(gè)品種花藥培養(yǎng)中，只12個(gè)品種被啟動(dòng)，其中只2個(gè)品種得到單倍體植株。幼胚(immature embryo)培養(yǎng) 指發(fā)育未成熟的胚培養(yǎng)，要求較好的培養(yǎng)條件和較復(fù)雜的操作技術(shù)（胚剝離），越早期的胚，培養(yǎng)越困難?；ㄋ幣囵B(yǎng)（anther culture） ：對(duì)花粉發(fā)育到一定階段的花藥進(jìn)行培養(yǎng)，改變花藥內(nèi)花粉粒的發(fā)育途徑，形成花粉胚或花粉愈傷組織，后由胚狀體直接發(fā)育為植株，或使愈傷組織分化成植株的過(guò)程。（5） 得到高含量次生代謝產(chǎn)物（生物堿等）的植物。 如： C3C4。馬鈴薯野生種抗多種病毒。體細(xì)胞融合的意義是什么?（1）合成新的物種， 多種利用價(jià)值的新經(jīng)濟(jì)植物。（3）生化鑒定：同功酶譜分析法：酯酶、過(guò)氧化物酶和6磷酸 葡萄糖脫氫酶等。種間趨雙親間； 屬間則偏向某一方。白化（aB）+白化（Ab）→綠(AaBb)營(yíng)養(yǎng)缺陷(aB)+營(yíng)養(yǎng)缺陷(Ab) →自養(yǎng)(AaBb)體細(xì)胞雜種的鑒定（1）形態(tài)學(xué)觀察： 株高、葉形、花形和花色等。熒光顯微鏡，選擇雜種細(xì)胞。C、酶混合液：酶制劑滲透壓穩(wěn)定劑原生質(zhì)膜穩(wěn)定劑pH值一般為 ～貯存于冰箱，使用時(shí)化凍即可，可保存數(shù)月。濃度450800 mmol/L原生質(zhì)膜穩(wěn)定劑——無(wú)機(jī)鹽類(lèi)或其它化合物如：CaCl KH2PO葡聚糖硫酸鉀等。滲透壓穩(wěn)定劑：——甘露醇、山梨醇、葡萄糖等。在酶溶液、原生質(zhì)體清洗介質(zhì)和原生質(zhì)體培養(yǎng) 基中加入適當(dāng)?shù)臐B透壓穩(wěn)定劑。纖維素酶和果膠酶為必需酶。⑤蝸牛酶：含多種解離酶，分解孢粉素和木質(zhì)素，用花粉母細(xì)胞和四分體的小孢子等。溶解細(xì)胞間由果膠質(zhì)組成的胞間層。消化細(xì)胞壁的半纖維素。消化細(xì)胞壁的纖維素。不同來(lái)源的原生質(zhì)體融合形成的雜種原生質(zhì)體稱異核體（heterokaryon） 影響植物原生質(zhì)體的制備的因素
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