植物細胞工程復習-免費閱讀
【正文】 (1)正選擇法：細胞置于含特定物質培養(yǎng)基上，如有毒 （如抗代謝物）或有害（如低溫）培養(yǎng)基上，野生型（正常）細胞不生長，突變體能生長。 誘變劑 （1）物理誘變劑： Ｘ射線、α射線、β射線、r射線和紫外線等。直接轉化：將裸露的DNA直接導入植物細胞的轉化方法。常用復雜的天然植物提取物（胚乳提取物必不可少，椰乳、玉米胚乳和麥芽提取物等 ） ，它既含多種植物生長調節(jié)劑，又提供胚發(fā)育所需的豐富的營養(yǎng)物質。通過幼胚培養(yǎng)可克服。幼胚培養(yǎng)的關鍵技術是什么？A、取材時期：球形胚至魚雷胚時期。 如高緯度和高海拔的小麥花藥培養(yǎng)成功率 較高。通過離體培養(yǎng)獲得單倍體的途徑有哪些？以單倍體為材料的育種程序，含花粉培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)、未受精子房培養(yǎng)和胚珠培養(yǎng)等 花藥培養(yǎng)中如何選擇外植體？（1）供試材料的遺傳背景：不同種、不同品種間花藥，離體培養(yǎng)反應能力有明顯差異。（3）低光合作用效率的植物轉變成高光效植物。雜種植株具有雙親形態(tài)特征，或雙親的中間類型，或與親本有區(qū)別。目的：（1）使細胞產生輕度質壁分離； （2）保持原生質體的完整性； （3）原生質體生命活動的碳源葉片用前兩者；懸浮細胞用葡萄糖。④崩潰酶（Driselase）：含纖維素酶、果膠酶、蛋白酶和核酸酶等。誘發(fā)融合(induced fusion)質膜表面負電性，原生質體間互相排斥，一定誘導方法，促原生質體的融合。培養(yǎng)基中植物生長物質的作用： 常用2,4D、IAA、IBA、NAA和細胞分離素。（2）化學誘變或紫外線照射等篩選高產細胞系。（2）培養(yǎng)過程中加入消泡劑。取小部分的懸浮培養(yǎng)液，轉入相同新鮮培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)（約稀釋了５倍）。操作：濾膜（） 、過濾器和 抽濾瓶等高壓滅菌，無菌條件下 溶液經濾膜流入抽濾瓶中或已冷卻（＜ 40℃）的培養(yǎng)基中。配制培養(yǎng)基： 100ml大量元素 + 10ml微量元素 + 10ml鐵鹽 + 10ml有機物 + 生長物質 + 30g蔗糖 + 7g瓊脂，煮沸溶解, 調pH，定容1L，滅菌備用。組織培養(yǎng)的實驗程序和技術要點一、無菌培養(yǎng)物的建立二、莖芽的增殖三、根的誘導培養(yǎng)四、試管苗的移栽莖芽的增殖方式通過愈傷組織誘導不定芽的形成不定芽（adventitious buds ）指從非正常（葉腋和莖尖）出芽的位置上誘導而形成的芽，如從根、葉和愈傷組織中誘導的芽 。無性快繁技術：應用植物組織培養(yǎng)方法，以無性系為材料大量快速繁殖植物的技術。常見MS、White、Nitsch、B5和N6等。有機氮促進體細胞胚形成。B、愈傷組織長期培養(yǎng)細胞常發(fā)生變異，分化再生苗不同于親本，喪失應有價值。 異質性細胞：不同生理狀態(tài) 菊苣塊莖儲存時間 脫分化所需時間 ?。祩€月 ２０－２４小時 ?。保矀€月 ?。叮靶r 發(fā)現(xiàn)脫分化所需時間的長短與細胞內RNA變化有關。外植體(explant) ：指切離植物體后用以離體培養(yǎng)的各種接種材料，包括胚胎材料、各種器官、組織、細胞和原生質體等。在合適的條件下，一個細胞可以獨立發(fā)育成完整的植物體。再分化（redifferentiation）： 由脫分化狀態(tài)的細胞再度分化形成一種或幾種類型細胞的過程。異質性細胞：不同染色體倍數(shù)。 外植體在DNA復制開始后，對光線就不敏感。雙子葉用量是單子葉植物的1/10~1/20，誘導脫分化后需及時降低或去掉2,4D，胚性細胞才能正常發(fā)育。糖：誘導體細胞胚發(fā)生不可缺的組成分。2 、 化學方法:農藥，少用3 、 生物學方法： 無病毒種子繁殖：較長的童期，且不能保持親本 優(yōu)良性狀； 嫁接：，組織小成活率低；莖尖分生組織培養(yǎng)：最有效。（5）培養(yǎng)基配方：降低生產成本。增強腋芽生枝能力腋芽去頂→代頂芽發(fā)育成主干→過程多次重復→外植體成一叢新枝→新枝→相同培養(yǎng)基→重復枝條增殖。倍微量元素１００倍Fe鹽（FeSO47H2O；Na2EDTA）１００倍有機物１００倍植物生長物質～指將單個游離細胞或小細胞團在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)增殖的技術。植板率（％）＝（細胞團數(shù)/接種細胞數(shù)）100％ 細胞懸浮培養(yǎng)的類型及培養(yǎng)過程中應注意的事項？懸浮培養(yǎng)類型：成批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)（封閉式連續(xù)培養(yǎng)、開放式連續(xù)培養(yǎng)、恒化培養(yǎng)、恒濁培養(yǎng)）成批培養(yǎng)注意事項：（1） kg/cm2。 條件培養(yǎng)（conditional culture） ：加入條件培養(yǎng)液（經一定時間細胞懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)液）。紫草寧衍生物產量比僅在White培養(yǎng)基上翻一番，僅在LS培養(yǎng)基上幾乎測不出紫草寧衍生物。 溫度 ：如胡蘿卜愈傷組織低溫處理能形成花青素；植物細胞培養(yǎng)物的脂肪酸的積累在15℃下積累最多第五章原生質體融合（protoplast f
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