【正文】 學(xué)習(xí)資料。什么時(shí)候離光明最近？那就是你覺(jué)得黑暗太黑的時(shí)候。我不知道年少輕狂，我只知道勝者為王。歡迎您的光臨，！希望您提出您寶貴的意見(jiàn)，你的意見(jiàn)是我進(jìn)步的動(dòng)力。一方面在低流行區(qū)或低危人群中，建立增補(bǔ)試驗(yàn)或聯(lián)合檢測(cè)方法，對(duì)初篩試驗(yàn)中呈反應(yīng)性的樣本進(jìn)行確證，以控制假陽(yáng)性率；另一方面，在目前情況下，設(shè)置合適的“灰區(qū)范圍”，將處于“灰區(qū)范圍”的樣本作為可疑樣本（被技術(shù)認(rèn)為陰性卻含有較高OD值讀數(shù)的樣本）進(jìn)行復(fù)檢，能減少假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。用于HCV感染診斷的試驗(yàn)結(jié)果必須盡可能準(zhǔn)確，因?yàn)檫@牽涉到伴隨HCV感染而產(chǎn)生的醫(yī)學(xué)倫理、法律以及社會(huì)學(xué)等方面的問(wèn)題，特別對(duì)于血站系統(tǒng)，該檢測(cè)結(jié)果直接決定該份血液是否能夠安全用于臨床。另外，初、復(fù)檢同時(shí)為反應(yīng)性的樣本也不一定為真陽(yáng)性，文中由于方法的局限性，無(wú)法對(duì)這些樣本進(jìn)行確證，只能暫時(shí)依據(jù)HCV RNA檢測(cè)結(jié)果來(lái)區(qū)分這些樣本。在臨床上也會(huì)發(fā)現(xiàn)抗HCV陽(yáng)性，但HCV RNA為陰性的背離現(xiàn)象。所以，設(shè)置1個(gè)適當(dāng)?shù)摹盎覅^(qū)范圍”，對(duì)處于該范圍的樣本做進(jìn)一步的檢測(cè)，采用多種試劑聯(lián)合檢測(cè)，只有當(dāng)結(jié)果均為陰性時(shí)方可發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，必要時(shí)需再次取樣隨訪調(diào)查，以避免漏檢現(xiàn)象的發(fā)生。另外，結(jié)果不一致的樣本，Cov平均值、s和Cov平均值+2s分別為2107367，從而表明結(jié)果不一致的樣本多為弱陽(yáng)性樣本，一般情況下Cov值＜40。由此表明確實(shí)存在灰區(qū)樣本漏檢情況發(fā)生，故而有必要對(duì)這些樣本進(jìn)行確認(rèn)。對(duì)該區(qū)樣本需要增補(bǔ)試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)，以防漏檢。統(tǒng)計(jì)表4中Cov均值＜20的數(shù)據(jù)，Cov平均值=073s=04平均值+2s=1552。由結(jié)果可知，陽(yáng)性樣本，經(jīng)過(guò)稀釋，最終使篩查實(shí)驗(yàn)無(wú)法檢出。 2．4 陽(yáng)性結(jié)果確證 采用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心1 Ncu/ml定值質(zhì)控血清以及經(jīng)確證結(jié)果呈陽(yáng)性的12份血清分別用陰性血清稀釋，同時(shí)用2種初篩試劑檢測(cè)，平均值Cov≥1為陽(yáng)性，結(jié)果見(jiàn)表4。（080）15+（203）（063）30（068）+（223） 表2 抗HCV陰性樣本Cov值頻數(shù) Covn累計(jì)頻數(shù)累計(jì)頻率(%)Covn累計(jì)頻數(shù)累計(jì)頻率(%)005—2472471772085513389598010—3025493938090—513439634015—2588075789095—413479663020—21010177296100—413519692025—8110987877105—613579735030—7611748422110—313609756035—4312178730115—513659792040—4812659075120—613719835045—1212779161125—413759864050—1012879232130—313789885055—1413019333135—513849928060—813099390140—213869943065—813179448145—313899964070—613239491150—413939993075—613299534155—113941000080—413339562 圖1 抗HCV陰性樣本Cov值頻數(shù) 圖2 抗HCV陽(yáng)性樣本Cov值頻數(shù) 處在Co定值域中的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑，也即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”。（073）13+（354）（055）28（058）+（198）43+（319）177。（079）+（224）11+（153）（057）26（055）+（301）41177。（081）+（254）9+（142）（052）24（054）+（104）39177。（072）+（127）7+（186）（064）22（052）+（159）37+（135）177。表1 抗HCV初、復(fù)檢結(jié)果不一致樣本Cov值 樣本初檢復(fù)檢樣本初檢復(fù)檢樣本初檢復(fù)檢1+（284）（053）16+（246）（061）31（058）+（124）2+（235）（061）17（059）+（128）32（056）+（295）3+（186）（051）18（052）+（134）33（065）+（185）4+（367）（056）19（053）+（152）34（067）+（249）5+（174）（057）20（068）+（237）35177。由表3頻數(shù)表數(shù)據(jù)，計(jì)算百分位數(shù)，P5=058P25=162P50=2780、P75=516P95=19488。根據(jù)表2結(jié)果，以各組段樣本數(shù)量為縱坐標(biāo)，以Cov值為橫坐標(biāo)作圖可見(jiàn)陰性樣本Cov值呈偏態(tài)分布，見(jiàn)圖1。 2．2 1394份常規(guī)檢測(cè)初、復(fù)檢抗HCV結(jié)果 結(jié)果不一致而復(fù)試結(jié)果陰性的樣本，Cov值波動(dòng)范圍為000—155，按Cov值大小順序排列，以005為組距，統(tǒng)計(jì)各組段的樣本數(shù)量，計(jì)算累計(jì)頻數(shù)和累計(jì)頻率，制作抗HCV陰性樣本Cov值頻數(shù)表，結(jié)果見(jiàn)表2?？侰ov平均值、s和Cov平均值+2s分別為2107367。 由表1結(jié)果可知，處于“灰區(qū)范圍”內(nèi)的樣本共10份，占本項(xiàng)研究全部樣本的049%（10/2037），這些樣本經(jīng)文中方法鑒定后的真陽(yáng)性和真陰性比例分別為100%（1/10）和900%（9/10）。對(duì)這些樣本采用FQPCR方法和COBAS AmpliScreen HCV Test (V20)測(cè)試系統(tǒng)再次檢測(cè)，其中1份HCV RNA陽(yáng)性樣本，而ELISA抗HCV結(jié)果不確定，Cov值為085—135。 1．4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 初、復(fù)檢2遍檢測(cè)均陽(yáng)性的樣本測(cè)試結(jié)果納入陽(yáng)性樣本數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，對(duì)初、復(fù)檢2遍檢測(cè)結(jié)果不一致的，以HCV RNA檢測(cè)結(jié)果和復(fù)核試劑結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，如復(fù)核結(jié)果為陽(yáng)性，ELISA結(jié)果數(shù)據(jù)均歸入陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)，否則歸入陰性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。對(duì)于初、復(fù)檢結(jié)果不一致的樣本用FQPCR方法和COBAS AmpliScreen HCV Test (V20)測(cè)試系統(tǒng)檢測(cè)。核酸擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光基因分析儀（達(dá)安基因股份有限公司，DA7600）、核酸自動(dòng)提取系統(tǒng)（Chemagen公司，Magnetic Separation Module I型）、核酸提取儀（TBG公司，EZ Beads32）、PCR核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（ABI公司，7500實(shí)時(shí)PCR分析系統(tǒng)）、全自動(dòng)樣品處理機(jī)（TECAN公司，RSP200/8型）、全自動(dòng)酶免分析儀（Microlab公司，F(xiàn)AME 24/20型）。20℃下保存期為3個(gè)月、70℃下保存期為1年，運(yùn)輸采用干冰。1 NCU/ml抗HCV定值血清(批號(hào)0802)由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。1 材料與方法 1．1 樣本 2007年5月—9月，本中心初、復(fù)檢抗HCV結(jié)果不一致但復(fù)核結(jié)果為陰性的樣本1 394份。根據(jù)ELISA測(cè)定的Co值來(lái)判斷結(jié)果，假陽(yáng)/陰性不可能完全避免，其只不過(guò)是將假陽(yáng)/陰性降低到較低的比例而已。處于陽(yáng)性判斷值定值域中的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑，即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”。處于陽(yáng)性判斷值定值域中的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑，即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”。十、免疫檢驗(yàn)存在的問(wèn)題HB基因組變異對(duì)病毒HBsAg和HBeAg測(cè)定影響問(wèn)題，以及如何評(píng)價(jià)試劑盒對(duì)這些變異株的檢測(cè)效能；HBcAb檢測(cè)在保證輸血安全中的意義；HBeAb、HBcAb溯源性問(wèn)題；HBcAb檢測(cè)模式的問(wèn)題等均困擾著臨床檢測(cè)者。作為臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)積極參與各級(jí)室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃，其要點(diǎn)是保證同病人標(biāo)本一樣對(duì)待室間質(zhì)評(píng)物。）；③陰陽(yáng)性對(duì)照正