【正文】 在植物組織培養(yǎng)過程中，向培養(yǎng)基內(nèi)添加磷。而磷脂又是原生質(zhì)、細(xì)胞核的重要組成部分。有時，也添加氨基酸來補充氮素。NH4N對植物生長較為有利。在制備培養(yǎng)基時以N03N和NH4N兩種形式供應(yīng)。2．無機元素(inorganicelement)大量元素，指濃度大于0．5mmol／L的元素，有N，P，K，Ca，Mg，S等。大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。它是生命活動過程中不可缺少的物質(zhì)。一、培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機鹽、有機物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。在植物組織培養(yǎng)歷史進(jìn)程中，事實上也緊密地伴隨著培養(yǎng)基的研制史。在離體培養(yǎng)條件下，不同種植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相同，只有滿足了它們各自的特殊要求，它們才能很好地生長。第三節(jié) 培養(yǎng)基目的要求：(1)一般掌握培養(yǎng)基的種類、特點；(2)掌握基本培養(yǎng)基的配方；(3)一般掌握培養(yǎng)基的組成成分和適宜的劑量；(4)掌握培養(yǎng)基母液和常用培養(yǎng)基的配制方法和步驟；(5)熟練掌握培養(yǎng)基的滅菌方法；(6)一般掌握培養(yǎng)基的篩選辦法?？趶接懈鞣N規(guī)格。 5．接種工具包括接種針、接種鉤及接種鏟，由白金絲或鎳絲制成6．鉆孔器用于取肉質(zhì)莖、塊莖、肉質(zhì)根內(nèi)部的組織時采用。4．解剖針解剖針可深入到培養(yǎng)瓶中，轉(zhuǎn)移細(xì)胞或愈傷組織。3．解剖刀切割較小材料和分離莖尖分生組織時，可用解剖刀。主要用于切斷莖段、葉片等。如在分離莖尖幼葉時，則用鐘表鑷子。鑷子過短．容易使手接觸瓶口，造成污染。（三）器械用具1．鑷子類（forceps）常應(yīng)用醫(yī)療上的鑷子。包括濾頭，注射器或采用抽濾裝置：真空泵、吸濾瓶、濾氣玻璃管等。應(yīng)多準(zhǔn)備幾支，分開使用。4．刻度移液管，、2ml、5ml、10ml。更大規(guī)模或要求更高效率時，可考慮采用液體自動定量灌注設(shè)備。2．分注器，小型操作時可采用燒杯直接分裝。這樣經(jīng)濟(jì)方便，且通氣好?，F(xiàn)在多采用聚丙烯塑料薄膜作為封口，以線繩結(jié)扎或橡皮圈箍扎。以前封口常用棉塞。一次性塑料容器或帶螺絲帽的玻璃瓶，無須另外配蓋，使用時比較方便。這類塑料制品多是采用聚丙烯材料制成，能耐高溫，可進(jìn)行高壓滅菌。目前，培養(yǎng)容器和制備培養(yǎng)基所需的玻璃器皿逐漸被塑料器皿所代替。工廠化生產(chǎn)可采用廣口的200ml罐頭瓶，加蓋半透明的塑料蓋，由于瓶口大，所以大量繁殖時操作方便、工作效率高，也減少了培養(yǎng)材料的損傷?？捎糜谂囵B(yǎng)較高的試管苗，另外也不易污染。這在游離細(xì)胞、原生質(zhì)體、花粉等的靜置培養(yǎng)、看護(hù)培養(yǎng)、無菌種子的發(fā)芽、植物材料的分離等都需采用。由于瓶口較小，亦不易污染。最常使用的是三角瓶，規(guī)格有l(wèi)00ml，250ml，500ml等，一般使用l00ml三角瓶，無論靜止或振蕩培養(yǎng)皆適用。要求由堿性溶解度小的硬質(zhì)玻璃制成，以保證長期貯存藥品及培養(yǎng)的效果；培養(yǎng)用的還要求透光度好，能耐高壓高溫，能方便放人培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料的器皿，根據(jù)培養(yǎng)的目的和要求，可以采用不同種類、規(guī)格的玻璃器皿。一般為1000～4000rpm即可。注意保護(hù)好玻璃電極，用后電極應(yīng)用蒸餾水沖洗凈，蓋上電極帽。測量pH值時，待測液必須充分?jǐn)嚢杈鶆颉?5．酸度計，組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基pH值的準(zhǔn)確度是十分重要的，應(yīng)當(dāng)使用酸度計，若無酸度計，也可使用pH試紙進(jìn)行粗測。14．電蒸餾水器，電蒸餾水器，采用硬質(zhì)玻璃或金屬制成。13．磁力攪拌器，磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質(zhì)，如各種化學(xué)物質(zhì)、瓊脂粉等。11．水浴鍋，用于溶解難溶藥品和熔化瓊脂條12．搖床與轉(zhuǎn)床、用于改善液體培養(yǎng)材料的通氣狀況及促進(jìn)酶解原生質(zhì)體的解離。為進(jìn)行操作，要有照明裝置。雙筒解剖鏡在分離莖尖等較小組織時，便于觀察、操作，通常放大580倍。天平應(yīng)放置在干燥、不受震動的天平操作臺上。8．冰箱，主要用于貯存母液、各種易變質(zhì)、易分解的化學(xué)藥品以及植物材料等。如果是連續(xù)的大規(guī)模生產(chǎn)，應(yīng)選用大型立式的或臥式的高壓滅菌鍋。7．高壓滅菌鍋，用于進(jìn)行培養(yǎng)基和器械用具的滅菌。6．烘箱，用于干燥洗凈的玻璃器皿，也可用于干熱滅菌和測定干物重。4．除濕機，培養(yǎng)室的濕度應(yīng)為70～80%，濕度過高易長雜菌，濕度過低培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)基會失水變干，影響培養(yǎng)物的生長。2℃，應(yīng)安置在室內(nèi)較高的位置。但操作活動受限制，準(zhǔn)備時間長，工作效率低。2．無菌箱，在投資少的情況下，可以用接種箱來代替超凈臺。在這樣的無菌條件下操作，就可以保證無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。超凈臺功率在145～260W左右，它裝有小型鼓風(fēng)機，使空氣穿過一個前置過濾器，在這里把大部分空氣塵埃先過濾掉，然后再使空氣穿過一個細(xì)致的高效過濾器，、細(xì)菌和真菌孢子等，最后以較潔凈的氣流吹到工作臺面。開機10分鐘即可操作，可進(jìn)行長時間使用。（七）溫室應(yīng)配有空調(diào)機、通風(fēng)口、加濕器、恒溫恒濕控制裝置、噴霧裝置、光照調(diào)節(jié)裝置以及必要的殺菌殺蟲裝置及相應(yīng)藥劑。在陰雨天可用燈光作補充。短日照植物需要短日照條件，長日照 植物需要長日照條件。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對濕度以保持在70％～80％為好，可安裝加濕器。培養(yǎng)室最重要的因子是溫度，一般保持在20～27℃左右，具備產(chǎn)熱裝置，并安裝窗式或立式空調(diào)機。培養(yǎng)架大多由金屬制成，一般 設(shè)5層，最低一層離地高約l0cm，其他每層間隔30cm左右。高度比培養(yǎng)架略高為宜，周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。 （五)培養(yǎng)室（culturing room）在適當(dāng)位置吊裝12盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。配置拉動門，以減少開關(guān)門時的空氣擾動。其無菌條件的好壞對組織培養(yǎng)成功與否起重要作用?？刂茻o菌室及培養(yǎng)室的配電板等。 （三）緩沖室進(jìn)入無菌室前要在緩沖室里換上經(jīng)過滅菌的衛(wèi)生服、拖鞋，戴上口罩。如果房間較多，可將準(zhǔn)備室分為洗滌室和配置室兩部分。（二）準(zhǔn)備室(repairing room)準(zhǔn)備室要求明亮、通風(fēng)。備有塑料筐，用于運輸培養(yǎng)器皿。為防止碰壞玻璃器皿，可鋪墊橡膠。（一）洗滌室(cleaning room)洗滌室用于完成玻璃器皿等儀器的清洗、干燥和貯存。4．pH5．CO2四、植物的再生分化類型無菌短枝姓 芽增殖性 器官發(fā)生型 胚狀體發(fā)生型 原球菌型第二節(jié)，植物組織培養(yǎng)的設(shè)施設(shè)備一、設(shè)計一個標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)實驗室應(yīng)當(dāng)包括：洗滌室、配置室、無菌室、培養(yǎng)室、觀察室等。3．生長物質(zhì)生長激素加1種細(xì)胞分裂素和幾種氨基酸。初始植板密度應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的營養(yǎng)狀況而改變，培養(yǎng)基越復(fù)雜則植板細(xì)胞的臨界密度越低，反之則相反。低倍顯微鏡觀察， 記數(shù)單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)，計算置板效率（也稱植板率）。用封口膜封嚴(yán)培養(yǎng)皿。（3）瓊脂培養(yǎng)基配制 % 瓊脂基本培養(yǎng)基+等量細(xì)胞培養(yǎng)液= % 瓊脂條件培養(yǎng)基。 50010 179。初始植板密度：單細(xì)胞固體平板培養(yǎng)時，細(xì)胞懸浮液接種到瓊脂培養(yǎng)基上最初細(xì)胞密度。～10010 179。該法的特點為：可以定點觀察；分離單細(xì)胞系容易；但培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。用于分離單細(xì)胞無性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計的一種單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。（三）平板培養(yǎng)法是將單個細(xì)胞與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合后平鋪一薄層在培養(yǎng)皿底上的培養(yǎng)方法。（2）最好微室的厚度不要超過20微米，蓋玻片 ～。在培養(yǎng)過程中可以連續(xù)進(jìn)行顯微觀察，將一個細(xì)胞的生長、分裂和形成細(xì)胞團(tuán)的全部過程記錄下來。但是不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長過程。（4）恒溫培養(yǎng)。）已滅菌的濾紙，然后放置一個晚上?；静僮鞑襟E為：（1）在一個培養(yǎng)瓶中加入一定量厚的固體培養(yǎng)基，滅菌后備用。Muir(1954)首先用此法培養(yǎng)出煙草單細(xì)胞株。二、單細(xì)胞培養(yǎng)的方法（一）看護(hù)培養(yǎng)法指用一塊活躍生長的愈傷組織來看護(hù)單個細(xì)胞，并使其生長和增殖的方法。愈傷組織反復(fù)繼代，使組織不斷增殖，提高愈傷組織的松散性。在組織培養(yǎng)中，是指在人工培養(yǎng)基上由外植體形成的一團(tuán)無序生長的薄壁細(xì)胞。初代培養(yǎng)：外植體的第一次培養(yǎng)。 第六章 植物組織培養(yǎng)技術(shù)一、植物組織培養(yǎng)的概念和意義 植物組織培養(yǎng)(Plant tissue cultre)： 在無菌條件下，把植物的外植體(器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等)接種到培養(yǎng)基(medium)上，在人為控制的條件下，使其長成完整的植株。多存在混倍現(xiàn)象。而裸子植物胚乳在受精前形成，為單倍體。 1980年成功培養(yǎng)了未授粉的非洲菊、煙草的胚珠，獲得了單倍體植株。 影響幼胚培養(yǎng)成功的因素主要包括幼胚發(fā)育時期、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件等胚珠和子房培養(yǎng)： 胚珠培養(yǎng)： 包括授粉胚珠和未授粉胚珠的培養(yǎng)。幼胚培養(yǎng)： 幼胚（心形胚階段）對培養(yǎng)條件和營養(yǎng)的要求都較高。對營養(yǎng)條件要求不嚴(yán)格。 胚培養(yǎng)技術(shù)（一）離體胚培養(yǎng)：包括成熟胚及幼胚的培養(yǎng)。五、植物胚胎培養(yǎng)包括成熟胚培養(yǎng)、幼胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、試管受精等類型。最常見的植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有愈傷組織培養(yǎng)、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、基尖分生組織培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)和固體化細(xì)胞培養(yǎng)幾大類型。對促進(jìn)基因重組、遺傳育種、選育優(yōu)良品系，以達(dá)到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)具有重要實踐意義。216。2．細(xì)胞融合技術(shù)216。216。二、植物原生質(zhì)體的培養(yǎng)與融合1．細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)216。近年來細(xì)胞工程的開發(fā)和應(yīng)用主要集中在細(xì)胞雜交，快速無性繁殖和細(xì)胞育種等方面。就學(xué)科而言，它是涉及細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和遺傳學(xué)等多門學(xué)科的綜合科學(xué)。80年代初，認(rèn)為：任何植物的離體細(xì)胞在人工培養(yǎng)下都具有它們母體植株的那種合成藥用成分的能力，即培養(yǎng)細(xì)胞的藥物生物合成的能力。1934年，White首次定義為: 每個植物活細(xì)胞在合適的條件下，都有發(fā)育為胚的能力。（2） 處理方法：用微吸管把一個細(xì)胞中的細(xì)胞核吸出后直接轉(zhuǎn)移到另一個去除細(xì)胞核的細(xì)胞中（3） 供體細(xì)胞：提供細(xì)胞核（常用體細(xì)胞）（4） 受體細(xì)胞：提供細(xì)胞質(zhì)（5） 操作儀器：顯微操作儀（拓展：移植后的細(xì)胞發(fā)育成的個體的基因型與表現(xiàn)型與提供細(xì)胞核的個體一致，但也可能受到基因突變、染色體變異及細(xì)胞質(zhì)遺傳的影響） 染色體工程（1） 處理方法：消減、添加或替換同種或異種染色體（2） 目的：定向改變遺傳性狀和選育新品種（3） 應(yīng)用：用于培育抗病新品種（如多倍體育種）；也是基因定位和染色體轉(zhuǎn)移等基礎(chǔ)研究的有效手段【當(dāng)堂訓(xùn)練二】一、 細(xì)胞工程的概念應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法，借助工程學(xué)的試驗方法或技術(shù)，在細(xì)胞水平上研究改造生物遺傳特性和生物學(xué)特性，以獲得特定的細(xì)胞、細(xì)胞產(chǎn)品或新生物體的有關(guān)理論和技術(shù)方法的學(xué)科。常用的促融合方法有哪些？促融合因子有哪些？分別有什么優(yōu)缺點？動物細(xì)胞融合與植物細(xì)胞融合有什么差異？ 為什么？后教環(huán)節(jié)： 植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)（1） 依據(jù)原理：植物細(xì)胞的全能性（全能性的概念學(xué)生在必修1第五章第二節(jié)已經(jīng)學(xué)習(xí)過，且在第二節(jié)中也有介紹，此處可簡單回憶）（2） 培養(yǎng)對象：離體的植物組織或細(xì)胞（3） 培養(yǎng)條件：體外無菌條件和必要的生長條件（4） 培養(yǎng)目的：使離體植物細(xì)胞或組織生長、增值、分化，形成新的組織、器官和個體的技術(shù) 細(xì)胞融合技術(shù)（1） 融合原理：細(xì)胞膜的流動性（結(jié)構(gòu)特性）（2） 融合對象：2個或多個不同細(xì)胞（3） 促融合方法：生物法（病毒誘導(dǎo)融合法）；化學(xué)法（聚乙二醇誘導(dǎo)融合法、高濃度鈣離子等）；物理法（電場誘導(dǎo)融合法）（4） 融合結(jié)果：形成雜種細(xì)胞（5） 融合過程：2個或多個不同細(xì)胞的質(zhì)膜發(fā)生粘連、破裂→細(xì)胞質(zhì)發(fā)生融合→發(fā)生核融合→形成雜種細(xì)胞（拓展：融合后的細(xì)胞為異源多倍體，具有原融合細(xì)胞的全部遺傳物質(zhì)，其染色體數(shù)目為原融合細(xì)胞染色體數(shù)目之和，且原融合細(xì)胞的性狀在雜交細(xì)胞培育的后代中均可顯現(xiàn)）【自學(xué)指導(dǎo)語四】閱讀教材P41 3分鐘，說出細(xì)胞核移植技術(shù)的概念和染色體工程的概念。）【自學(xué)指導(dǎo)語三】閱讀教材P40第34段及知識海洋5分鐘，回答下列問題：簡述植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)的過程?！井?dāng)堂訓(xùn)練一】名師18頁例即講即練1（這一知識點較簡單，學(xué)生閱讀完后即可掌握，且課本中每個例子配有相應(yīng)圖片，可提高學(xué)生學(xué)習(xí)興趣）【自學(xué)指導(dǎo)二】閱讀教材P40第12段內(nèi)容3分鐘，嘗試?yán)斫獠⒆R記細(xì)胞工程的概念和分類。另外，學(xué)生在閱讀時要對應(yīng)教師所提出的問題有目的的去分析，將教材內(nèi)容細(xì)化。學(xué)法通過必修1到必修3的學(xué)習(xí)，學(xué)生已具備了細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、動植物細(xì)胞的比較、花藥離體培養(yǎng)技術(shù)、克隆及染色體的結(jié)構(gòu)與功能等相關(guān)知識，為本節(jié)的學(xué)習(xí)打下了基礎(chǔ)。，根據(jù)預(yù)習(xí)情況提出問題，在教師的誘導(dǎo)下，分析問題，最終得出結(jié)論，培養(yǎng)學(xué)生勤于思考的習(xí)慣，掌握善于思考的方法。四、教法、學(xué)法在本節(jié)的學(xué)習(xí)中仍遵循“先學(xué)后教，當(dāng)堂訓(xùn)練”的教學(xué)方法。落實方案重點簡述細(xì)胞工程的基本技術(shù)；舉例說出細(xì)胞工程的應(yīng)用難點難點簡述細(xì)胞工程的基本技術(shù)突破方法：以問題作為引導(dǎo)，使學(xué)生對相關(guān)的概念進(jìn)行小知識點的分解，加強理解與記憶。舉例說出細(xì)胞工程在遺傳育種、生產(chǎn)藥品、食品等方面的應(yīng)用。二、教學(xué)目標(biāo)掌握植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞核移植技術(shù)、染色體工程等。第四章 細(xì)胞工程一、 教材分析 本節(jié)是高中生物選修3第二章第一節(jié)，是本章的一個概述。藥用蛋白是一類十分昂貴的藥品，荷蘭科學(xué)家把編碼人的人乳鐵蛋白基因轉(zhuǎn)移到牛的身上，并從牛奶里提取出了大量的人乳鐵蛋白，大大降低了該藥物的生產(chǎn)成本，一頭牛就如同一個制藥廠。現(xiàn)在人們利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)育成的轉(zhuǎn)基因植物可說是多種多樣，如抗除草劑的水稻、大豆、棉花、煙草、油菜、番茄、馬鈴薯、甜菜、花椰菜，轉(zhuǎn)基因的雄性不育油菜，高氨基酸含量的馬鈴薯，抗寒番茄等等。轉(zhuǎn)基因的耐貯番茄：乙烯是一種植物激素，它可以促進(jìn)植物的果實成熟，科學(xué)家們通過