抗體的制備與應(yīng)用ppt課件(參考版)
2025-03-25 06:09本頁面
【正文】 （四）自身免疫性疾病 ? 美國已用抗腫瘤壞死因子的嵌合抗體治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，療效顯著。對術(shù)后殘留灶、術(shù)后復(fù)發(fā)、晚期腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移灶的診斷治療具有重要的意義。其高效催化活性及位點(diǎn)特異性蛋白降解作用為臨床疾病的治療提供新的途徑，有可能成為腫瘤導(dǎo)向治療的新方法。 5．催化抗體（ catalytic antibody） ? 根據(jù)免疫學(xué)及有機(jī)化學(xué)的基本原理，利用基因工程技術(shù)制備的具有催化活性的抗體，不僅能與抗原特異性結(jié)合，還能促使其發(fā)生化學(xué)轉(zhuǎn)變。 4．免疫黏連素（ immunoadhesin） ? 抗體 C區(qū)和細(xì)胞膜表面受體或細(xì)胞黏附分子等細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)通過一定的方式連接后，在真核細(xì)胞表達(dá)出的抗體樣融合蛋白，稱為免疫黏連素。 ? 通過對配體的修飾使其功能喪失。而 C端信號序列可使抗體滯留在該細(xì)胞特定部位。 ?胞內(nèi)抗體的構(gòu)建 ? 首先獲得 ScFv基因，再通過 PCR技術(shù)在其 N或 C端插入胞內(nèi)定位信號序列。具有小分子抗體低副作用，又能有效促進(jìn)細(xì)胞或分子聚合，介導(dǎo)高效生物學(xué)效應(yīng)，在腫瘤、病毒感染治療中具有較大優(yōu)勢。通過抗體發(fā)揮導(dǎo)向或載體效應(yīng)，使抗體攜帶物靶向結(jié)合于特異細(xì)胞上，發(fā)揮抗體攜帶物的效應(yīng)功能。 VH和 VL直接連接構(gòu)成無連接肽（ ScFv0）三聚體的親和力高，其與抗原結(jié)合比較牢固，解離速度慢。此抗體具有（ Fab’） 2的類似性質(zhì)，但沒有（ Fab’） 2需對完整抗體進(jìn)行酶切消化及二次純化的繁瑣過程，是一種較為理想的基因工程抗體形式。該抗體合成后通過 CH3功能區(qū)形成穩(wěn)定的二聚體，發(fā)揮其雙價(jià)抗體的作用。具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值。具有穿透力強(qiáng)的優(yōu)勢，易于通過血管壁進(jìn)入實(shí)體瘤。 （三）單域抗體 ?只有一個 VH或 VL的抗體，通常為 VH （四）分子識別單位 ?只有一個 CDR，通常為 CDR3 三、其它基因工程抗體 ? 多價(jià)微型抗體 ? 雙鏈抗體（ diabody） ? 微型抗體 (minibody) ? 三鏈抗體 (triabody) ? 新型抗體分子 ? 新效能抗體 ? 雙特異性抗體（ bispecific antibody,BsAb） ? 胞內(nèi)抗體（ intrabody） ? 免疫黏連素（ immunoadhesin） ? 催化抗體（ catalytic antibody） （一）多價(jià)微型抗體 ? 1．雙鏈抗體（ diabody） ? 2．微型抗體 (minibody) ? 3．三鏈抗體 (triabody) 1．雙鏈抗體（ diabody） ? 雙鏈抗體是通過化學(xué)鉸鏈、黏性蛋白結(jié)構(gòu)域融合法和接頭長度控制三種主要手段將兩個 ScFv通過非共價(jià)鍵結(jié)合形成剛性、穩(wěn)定的二聚體結(jié)構(gòu)。接頭中盡量不含疏水氨基酸。 ScFv（由連接肽連接的單鏈抗體） ? Linker的設(shè)計(jì)原則 長度和性質(zhì)以不干擾 VH和 VL的折疊和不影響抗原結(jié)合部位的功能為標(biāo)準(zhǔn)。 ? 優(yōu)點(diǎn)： ? 克服了 HAMAR的問題 ? 分子量小、滲透性高，靶向性增加 ? ScFv可保留較高活性 ? 在體內(nèi)半衰期長、穩(wěn)定性高 ? 沒有 Fc段，非特異結(jié)合減少，在腫瘤導(dǎo)向治療及成像診斷中有特別的意義 ?類型 ? （ 1）二硫鍵穩(wěn)定的單鏈抗體 (dsFv） ? （ 2）由連接肽連接的單鏈抗體（ ScFv） dsFv（ 二硫鍵穩(wěn)定的單鏈抗體 ） ? 利用基因突變技術(shù)在 VH和 VL上加入半胱氨酸，利用兩者形成的二硫鍵將 VH和 VL連接在一起。 通過同源蛋白三維結(jié)構(gòu)模建技術(shù)預(yù)測抗體可變區(qū)三維結(jié)構(gòu)后，對鼠及人 VH、 VL表面容易引起較強(qiáng)免疫反應(yīng)的氨基酸進(jìn)行比較分析，進(jìn)行人源化分子設(shè)計(jì)。通過分子模擬技術(shù)鑒別出與抗原結(jié)合位點(diǎn)密切相關(guān)的鼠單抗 FR上氨基酸殘基，將這些殘基與 CDR重組并一同移植到人 FR上。 原理 首先利用計(jì)算機(jī)模建技術(shù)，模擬抗體立體結(jié)構(gòu)。 嵌合抗體 嵌和抗體的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)： ? 特異性強(qiáng) ? 親和性高 ? 具有全抗體的所有功能 ? 半衰期長、療效顯著 缺點(diǎn)： ? 有 10－ 50%發(fā)生 HAMA ? 靶向性差 （二）人源化抗體（ humanized antibody） 概念 指利用基因工程技術(shù)，在嵌合抗體基礎(chǔ)上，針對嵌合抗體仍然具有較高的 HAMA反應(yīng)的問題，進(jìn)一步對抗體進(jìn)行CDR及 FR區(qū)域置換。 ?基因工程抗體的分類 ? 全抗體 ?（ 1）嵌和抗體（ chimeric antibody） ?（ 2）人源化抗體（ humanized antibody） ? 小分子抗體 ?（ 1） Fab ?（ 2） ScFv ?（ 3）單域抗體 ?（ 4）分子識別單位 其它抗體 ? 多價(jià)微型抗
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