【正文】 根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列預(yù)測(cè)其三維空間結(jié)構(gòu) ?通過(guò)對(duì)已知空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析 ， 找出一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系 ， 總結(jié)出規(guī)律 ，用于新的蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè) 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 129 ?三級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定 X射線衍射法 (Xray diffraction)和核磁共振技術(shù) (nuclear magic resonance, NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 124 Edman降解法測(cè)定氨基酸序列 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 125 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 126 通過(guò)核酸序列推演蛋白質(zhì)中的氨基酸序列 按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列 分離編碼蛋白質(zhì)的基因 測(cè)定 DNA序列 排列出 mRNA序列 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 127 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 128 五、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測(cè)定 ?二級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定 通常采用 圓二色光譜 (circular dichroism，CD)測(cè)定溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)含量 。 (2DE) 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 120 雙向電泳的原理及結(jié)果 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 121 三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定與純度鑒定 （一）蛋白質(zhì)含量測(cè)定 1．凱氏定氮法 2． Folin酚試劑法 3．紫外線吸收法 4．考馬斯亮藍(lán)染色法 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 122 （二）蛋白質(zhì)的純度鑒定 ? 蛋白質(zhì)純度常用某一特定成分與總蛋白之比來(lái)表示，如每毫克蛋白質(zhì)含多少活性單位 。 ? 第二步是將 IEF的膠條取出，橫放在另一平板上，進(jìn)行SDSPAGE。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 118 等電聚焦的原理 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 119 ? 雙向電泳（ twodimensional electrophoresis,2DE） 是利用不同蛋白質(zhì)所帶電荷和質(zhì)量的差異，用兩種方法、分兩步進(jìn)行的蛋白質(zhì)電泳。 *雙向凝膠電泳 (2DE)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 114 幾種重要的蛋白質(zhì)電泳 *SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDSPAGE)，常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。 這種通過(guò)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù) , 稱(chēng)為 電泳 (elctrophoresis) 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 109 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 110 （三）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)的分離方法 常用的方法有 ： 離子交換層析 電泳 等電聚焦 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 111 1．離子交換層析 離子交換層析（ ion exchange chromatography） 是利用蛋白質(zhì)兩性解離特性和等電點(diǎn)作為分離依據(jù)的一種方法。 ? 超濾法 利用超濾膜在一定壓力下截取一定蛋白質(zhì)的方法。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 106 因?yàn)槌两迪禂?shù) S大體上和分子量成正比關(guān)系 ， 故可應(yīng)用超速離心法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量 ， 但對(duì)分子形狀的高度不對(duì)稱(chēng)的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 105 超速離心 ?超速離心法 (ultracentrifugation)既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 。 除了丙酮以外 ， 也可用乙醇沉淀 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 102 ?丙酮沉淀 使用 丙酮沉淀 時(shí) ， 必須在 0～ 4℃ 低溫下進(jìn)行 ，丙酮用量一般 10倍于蛋白質(zhì)溶液體積 。 ?雙縮脲反應(yīng) (biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱(chēng)為 雙縮脲反應(yīng) ，雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。 蛋白質(zhì)的 OD280與其濃度呈正比關(guān)系 ， 因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定 。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 95 蛋白質(zhì)的 凝固作用 (protein coagulation) 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。 蛋白質(zhì)的復(fù)性 (renaturation) 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 93 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 94 蛋白質(zhì)沉淀 蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象稱(chēng)為蛋白質(zhì)沉淀 。 ?防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 ?變性的本質(zhì) —— 破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素 顆粒表面電荷 水化膜 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 88 + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì) 水化膜 + + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒 酸 堿 酸 堿 酸 堿 脫水作用 脫水作用 脫水作用 溶液中蛋白質(zhì)的聚沉 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 89 （三）蛋白質(zhì)的變性與沉淀 蛋白質(zhì)的變性 (denaturation) 在某些理化因素的作用下，蛋白質(zhì)中維系其空間結(jié)構(gòu)的次級(jí)鍵（甚至二硫鍵）斷裂，使其空間結(jié)構(gòu)遭受破壞，造成其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失。 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) ( isoelectric point, pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時(shí) ， 蛋白質(zhì)解離成正 、 負(fù)離子的趨勢(shì)相等 ， 即成為兼性離子 ， 凈電荷為零 ， 此時(shí)溶液的 pH稱(chēng)為 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 。 與朊病毒蛋白構(gòu)象相關(guān)的疾病統(tǒng)稱(chēng)為朊病毒病。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 84 朊病毒病 已發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)朊病毒病有： 庫(kù)魯病（ kuru disease）、腦軟化病（ GSS）、紋狀體脊髓變性病或克 雅氏?。?CreutzfeldtJakob disease,CJD）、新變異型 CJD（ new variant CJD,nvCJD）或稱(chēng)人類(lèi)瘋牛病和致死性家族性失眠癥（ fatal familial insomnia,FFI）。 PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為 β折疊的 PrPsc，從而致病。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能 科學(xué)出版社案例式教材《生物化學(xué)》課件 82 案例：克 雅氏 (CJD) 瘋牛病是由朊病毒蛋白 (prion protein, PrP) 引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。 目 錄 第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能