重組人促紅細胞生成素的分離純化工藝(參考版)
2025-01-24 16:00本頁面
【正文】 促紅細胞生成素的體內生物活性測定，采用網織紅細胞計數法 26 重組藥物 。靜脈注射或肌肉、皮下給藥。 （三）重組人促紅細胞生成素的分離純化工藝： （四）重組人促紅細胞生成素的制劑加工方法： Epogen和Procrit目前主要是做成氯化鈉 /等滲緩沖液，無色。 ，收集活性洗脫峰。用。 ，在 10mmol/L Tris透析液中透析過夜。 ，濾膜過濾，上 CM親和色譜柱，平衡緩沖液平衡。溶解氧應控制在30%～ 80%的范圍內。動物細胞培養(yǎng)對溫度、 pH等波動的敏感性很大。 種子細胞制備 （ 1）復蘇 （ 2）培養(yǎng) （ 3）消化細胞 連續(xù)培養(yǎng)工藝過程 （ 1）反應器滅菌 （ 2）接種 （ 3）貼壁培養(yǎng) （ 4）擴增培養(yǎng) （ 5）灌流培養(yǎng)（ 6）收獲培養(yǎng)物 培養(yǎng)工藝條件控制要點 在剛接種后細胞稀少時，攪拌速度緩慢，使細胞牢固地貼附于載體上。 （二） CHO細胞培養(yǎng)工藝： 在獲得了能夠高效表達 EPO的工程細胞系以后，需要解決的問題就是通過培養(yǎng)而大量生產 rhEPO。另一種是提取人胎肝 mRNA，逆轉錄合成 cDNA文庫，進行文庫篩選，得到人促紅細胞生成素基因。一種是提取胎肝染色體 DNA，然后以特異性寡核苷酸為引物，經 PCR擴增出人促紅細胞生成素的基因片段，體外拼接，然后與克隆載體連接。 促促紅細胞生成素的臨床應用 重組促紅細胞生成素是目前臨床上治療慢性腎衰性貧血療效最顯著的生物技術藥物。 促紅細胞生成素的種類 (1) 天然促紅細胞生成素：天然促紅細胞生成素是以人或動物的尿、血等為材料，經生化技術分離純化制備。促紅細胞生成素是一種糖蛋白，在胎兒體內由腎臟及肝臟產生，而在成人體內主要由腎臟產生，占 90%。 重組人生長激素凍干制劑，含重組人生長激素應為標示量的 %%。 種子培養(yǎng)過夜，然后進行發(fā)酵，發(fā)酵時間一般為 1618h,培養(yǎng)溫度為 37℃ ，期間發(fā)酵液的pH值維持在 ，溶解氧不能低于 20%。 第一代重組人生長激素是采用包含體技術生產的，含有甲硫氨酸，由 192個氨基酸殘基組成。生長激素具有種屬特異性，人生長激素（ human growth hormone, hGH）為一鏈狀多肽的球形蛋白質。 常規(guī)胰島素注射液應增加高分子蛋白檢查，其含量不超過相應標準 。 現(xiàn)采用國際通用方法 RPHPLC測定效價，此法具有高專屬性，其結果與生物活性測定法一致。 可用反相 HPLC方法分析胰島素供試品和對照品，二者保留時間一致（相對保留時間為177。其缺點是表達量低，發(fā)酵時間長。其缺點是表達出的胰島素尚沒有生物活性，需要變性和復性過程。 重組人胰島素生產技術及工藝 重組人胰島素的生產主要采用兩種宿主表達系統(tǒng)，即大腸桿菌和酵母表達系統(tǒng)。 一系列的研究表明，重組人胰島素在結構與功能上與天然胰島素均相同。缺乏胰島素時，導致人消瘦，高血糖和丙酮酸中毒， Ⅰ 型糖尿病（ diabetes）就是缺乏胰島素引起的。 4. 其它上市制劑：①栓劑 ②外用凝膠制劑 ③眼用制劑 5. 研發(fā)中的干擾素制劑①緩釋制劑②靶向制劑③口含制劑 重組人胰島素概述 胰島素（ insulin）是多肽激素，由胰臟 β細胞合成。 2. 長效 干擾素制劑：將聚乙二醇（ PEG）分子結合到干擾素上，使其半衰期延長，顯著增加了藥物在體內保持活性狀態(tài)的時間，因而患者每周只需要注射一次即可。 四、重組人干擾素的制劑類型 干擾素的劑型也在早期的注射劑的基礎上增加了鼻腔內給藥系統(tǒng)、軟膏劑、栓劑、口含制劑、外用凝膠制劑、長效制劑及緩釋制劑等。②如果一級結構沒被破壞，三級和四級結構的變化也可能導致失活。蛋白質失活的機理概括起來有兩點。 α2b的分離工藝過程： α2b純化工藝過程： α2b分離工藝控制： α2b的純化工藝控制： 三、分離純化工藝及過程控制 干擾素的分離與純化分為兩個階段，初級分離階段和純化精制階段。 (6)隨著菌體繁殖，使整個發(fā)酵過程形成過多和穩(wěn)定持久的泡沫。穩(wěn)定而適中的溫度既能保證菌體細胞膜的完整和細胞中酶的催化活性，又有利于提高干擾素的產量。 (3)發(fā)酵要求培養(yǎng)液中有足夠的溶解氧，為了提高發(fā)酵罐的供養(yǎng)能力，往往需要增大攪
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