【正文】 。 ? 微生物在碳源利用上有何不同 ？ ? 什么叫氮源 ？ 列出微生物常用的氮源 。 ? 微生物需要的大量元素包括哪幾種 ？ ? 什么叫營養(yǎng) ？ 什么叫營養(yǎng)物 ？ 營養(yǎng)物有那些生理功能 ？ ? 試列表比較動(dòng)物 、 植物 、 微生物對營養(yǎng)要素和營養(yǎng)方式的異同 。 ? 培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物是需要的，在微生物鑒定，水質(zhì)鑒定，食品的分析中都需要分離特定的微生物，因此，為了不同的目的常需要不同的培養(yǎng)基。 ? 所有微生物根據(jù)它們對碳源 、 能量或氫原子或電子的要求都可以在營養(yǎng)上被歸類 。 Better EMB培養(yǎng)基的組成 EMB培養(yǎng)基的成分 / g 蛋白胨： 10 乳糖： 5 蔗糖： 5 K2HPO4： 2 伊紅 Y： 美藍(lán)： 蒸餾水： 1000 最終 pH： Better Better Escherichia coli Growing on EMB Agar Only gramnegative bacteria grow on EMB agar.(Grampositive bacteria are inhibited by the dyeseosin and methylene blue added to the agar.)Based on its rate of lactose fermentation, Escherichia coli produces dark, blueblack colonies with a metallic green sheen on EMB agar. Better Better Better Better 常用的一些鑒別培養(yǎng)基 Better 同時(shí)具有鑒別和選擇作用的培養(yǎng)基 金黃色葡萄球菌的分離－ Mannitol Salt Agar ％ NaCl： Salt resistant 甘露糖醇： Acid Formation from Manitol 酸堿指示劑： Indicator of Acid Formation phenol red Better Better 培養(yǎng)基中常用的指示劑 酸堿指示劑 酚紅 溴甲酚紫 溴蔭香草酚藍(lán) 中性紅 中國藍(lán) 甲基紅 酸性復(fù)紅 氧化還原指示劑： 美藍(lán)和刃天青 TTC、 MTT和 Alamar blue Better （四）配制培養(yǎng)基應(yīng)注意的問題 營養(yǎng)成分的溶解 ? 緩沖性組分；易沉淀組分；微量組分；合成培養(yǎng)基的組分 pH值及水活度 瓊脂 滅菌 Better 營養(yǎng)成分的溶解 緩沖性物質(zhì) 高溫易破壞組分 易沉淀的組分 高溫發(fā)生反應(yīng)的組分 微量物質(zhì) 溶解容器的選擇：鐵、銅 Better pH值及水分活度 Aw 培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌以后其 pH會(huì)下降一些。 選擇培養(yǎng)基 Better 選擇培養(yǎng)基 一類根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具有使混合菌群中的劣勢菌成為優(yōu)勢菌的功能，可用來進(jìn)行菌種篩選 選擇性培養(yǎng)基的實(shí)例 ⒈紅曲霉耐高溫耐酸 ⒉泡菜 加富性選擇培養(yǎng)基 加富營養(yǎng)物：特殊碳源和氮源 甘露醇、纖維素、石蠟油、濃糖 抑制性選擇培養(yǎng)基 其他選擇性的理化因素 ：溫度、氧氣、 pH和滲透壓 Better 選擇性抑制物質(zhì) 另一類 加入某些化學(xué)物質(zhì)以抑制不需要的菌生長，而促使目的菌生長的培養(yǎng)基 選擇性抑菌劑：染料、抗生素、脫氧膽酸鈉 ⒈抗生素 — 抑制細(xì)菌、放線菌 ⒉苯酚 — 抑細(xì)菌、霉菌 ⒊制霉菌素 — 抑真菌 ⒋結(jié)晶紫、牛膽酸鹽 — 抑 G+細(xì)菌 ⒌亞硫酸鉍 抑制革蘭氏陽性菌和絕大多數(shù)革蘭氏陰性菌 ⒍煌綠、玫瑰紅酸、亞硫酸鈉、去氧膽酸鈉、某些 ⒎染料、月桂酸鹽、十六烷三甲基溴化銨 Better 選擇性培養(yǎng)基舉例 酵母菌富集培養(yǎng)基 Glucose 5％、尿素 ％、硫酸銨 ％、 KH2PO4 ％、 Na2HPO4 ％、 Ashby無氮培養(yǎng)基 Martin培養(yǎng)基 含糖酵母膏培養(yǎng)基 Better Better 鑒別培養(yǎng)基 （ Differential Media） 添加能夠與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而可以用肉眼就能容易地辨別目的菌菌落的培養(yǎng)基；添加特定試劑或化學(xué)藥品對特定微生物鑒別、區(qū)分的培養(yǎng)基 伊紅美藍(lán)（ EMB）平板 用于檢查飲水和乳品中是否含腸道致病菌 E. coli呈紫綠色金屬光澤，沙門氏菌菌落無色透明 Better 檢查乳品和飲用水中是否含有腸道致病菌 ，所用的伊紅美蘭培養(yǎng)基 ， 也是一種鑒別培養(yǎng)基 。 （ 6）繁殖和保藏培養(yǎng)基 細(xì) 菌：營養(yǎng)瓊脂、 LB培養(yǎng)基 放線菌：馬鈴薯培養(yǎng)基，高氏一號培養(yǎng)基 酵 母：麥汁培養(yǎng)基， YEPD培養(yǎng)基 霉 菌：麥汁培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基 （ 7）基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ： 幾種相似培養(yǎng)基的共同部分 Better 培養(yǎng)基種類 Better ? 在培養(yǎng)基中加入染料亮綠 (brilliant green)或結(jié)晶紫(crystalviolet)，可以抑制革蘭氏陽性細(xì)苗的生長，從而達(dá)到分離革蘭氏陰性細(xì)菌的目的 ? 在培養(yǎng)基中加入青霉素、四環(huán)衰或鏈霉素，可以抑制細(xì)菌和放線菌生長，而將酵母菌和霉菌分離出來。 Better 一些鑒別培養(yǎng)基 Better （ 4）種子培養(yǎng)基 seed medium 培養(yǎng)發(fā)酵用的健壯的種子的培養(yǎng)基。 （ 2）選擇培養(yǎng)基 selected medium 加入了某種化學(xué)物質(zhì)以抑制不需要的菌的生長 , 從而促進(jìn)目的菌生長的培養(yǎng)基。 （ 4）脫水培養(yǎng)基 dehydrated medium 含有除水以外的一切成分的商品培養(yǎng)基，使用時(shí)只要加入適量水分并加以滅菌即可，是一類既有成分精確又有使用方便等優(yōu)點(diǎn)的現(xiàn)代化培養(yǎng)基。 Better （ 3）半固體培養(yǎng)基 semisolid medium 呈當(dāng)容器倒放時(shí)不致流下、但在劇烈振蕩后則能破散狀態(tài)的凝固性固體培養(yǎng)基。 有意思的是， Koch一名助手的妻子 Farnnie Eilshernius Hesse,具有豐富的廚房經(jīng)驗(yàn)．當(dāng)她聽說明膠作為凝固劑遇到的問題后，提議以廚房中用來做果胨的瓊脂代替明腔： 1882年．瓊脂就開始作為凝固劑用于固體培養(yǎng)基的配制，這樣，瓊脂從餐桌走向丁實(shí)驗(yàn)臺(tái)，為微生物學(xué)置晨起到重要作用．一百多年來，一直延用至今，是培養(yǎng)基量好的凝固劑。作為一名知識淵博的杰出科學(xué)家， Kueh將其制備腔片方面的知識應(yīng)用到微生物學(xué)研究方面，他將明膠和肉膏蛋白胨培養(yǎng)基混合后鋪在玻璃平板上，讓其凝固，然后采取在土豆片表面劃線接種的同樣方法在其表面接種擻生物，獲得純培養(yǎng)。 Better 幾乎在同時(shí)， Koch的助手 Prederick Loeffler發(fā)展了利用肉膏蛋白胨堵養(yǎng)基培養(yǎng)病原細(xì)菌的方法， Koch決定采取方法固化此培養(yǎng)基。 1881年，Koch發(fā)表論文介紹利用土豆片分離微生物的方法，其作法是：用灼燒滅苗的刀片將煮熟的土豆切成片，然后用針尖挑取微生物樣品在土豆片表面劃線接種，經(jīng)培養(yǎng)后可獲得微生物的純培養(yǎng)。因此，在早期微生物學(xué)研究中，分離病原微生物的進(jìn)展相當(dāng)緩慢。 Better 瓊脂和明膠的區(qū)別 比較內(nèi)容 瓊脂 明膠常用濃度 1 . 5 2 . 0 % 5 1 2 %熔點(diǎn)℃ 9 8 1 0 0 25凝固點(diǎn)℃ 4 0 4 2 20PH 微酸 酸性灰分 % 16 1 4 1 5C a O % 1 . 1 5 0M g O % 0 . 7 7 0氮 % 0 . 4 1 8 . 3微生物的可利用能力絕大多數(shù)微生物不能利用不少微生物能利用Better 瓊脂 —— 從餐桌到實(shí)驗(yàn)臺(tái) 最早用來培養(yǎng)微生物的人工配制的培養(yǎng)基是液體狀態(tài)的，但是，用液體培養(yǎng)基分離并獲得微生物純培養(yǎng)非常困難；將棍雜的微生物樣品進(jìn)行系列稀釋．直到平均每個(gè)培養(yǎng)管中只有一個(gè)微生物個(gè)體，進(jìn)而獲得微生物純培養(yǎng)物。例如培養(yǎng)各種真菌用的由麩皮、米糠、木屑、纖維、稻草粉等配制成的固體培養(yǎng)基；由馬鈴薯片、胡蘿卜條、大米、麥粒、面包、動(dòng)物或植物組織制備的固體培養(yǎng)基等 ④ 濾膜 （ membrane filter） ：是一種堅(jiān)韌且?guī)в袩o數(shù)微孔的醋酸纖維薄膜，如果把它制成圓片狀覆蓋在營養(yǎng)瓊脂或浸有培養(yǎng)液的纖維素襯墊上，就形成了具有固體培養(yǎng)基性質(zhì)的培養(yǎng)條件。它在各種微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)工作中有極其廣泛的用途 ②非可逆性凝固培養(yǎng)基： 當(dāng)凝固后就不能再融化的固體培養(yǎng)基。遇熱可融化、冷卻后則凝固的培養(yǎng)基。7H2O , 蔗糖 30, 瓊脂 20, pH 自然 ?優(yōu)點(diǎn)： 成分精確、重演性高 ?缺點(diǎn)： 價(jià)格較貴、配制麻煩，微生物生長較一般 ?適用： 營養(yǎng)、代謝、生理、生化、遺傳、育種、菌種鑒定或生物測定等定量要求較高的研究工作 Better ? 半合成培養(yǎng)基 semi synthetic medium 由部分天然有機(jī)物和部分化學(xué)試劑制成的培養(yǎng)基。 如：培養(yǎng)霉菌用的察氏培養(yǎng)基（ g/L) NaNo3 2, K2HPO4 1, KCl , MgSO4 （ 4） 培養(yǎng)基的物理狀態(tài) （ 5） 滅菌方法 Better （三）培養(yǎng)基的種類 按對培養(yǎng)基成分的了解分類 ? 天然培養(yǎng)基 plex medium； undefined medium 利用動(dòng)植物或微生物體包括其提取物，化學(xué)成分還不清楚或不恒定的天然有機(jī)物質(zhì)制成的培養(yǎng)基。 （ 2） 水活度 ：實(shí)際上是控制好培養(yǎng)基中可溶物質(zhì)的濃度 。 pH↓或 [O2]↑， Eh↑ 通入 0 H空氣，加抗壞血酸、巰基乙酸、葡萄糖等可改變環(huán)境的 Eh Eh影響微生物的機(jī)理 細(xì)胞內(nèi)許多酶類活性，細(xì)胞呼吸作用 Better 微生物對培養(yǎng)基氧化還原電位的要求 一般好氧菌： +300～ +400 mv 兼性厭氧菌 +100 mv以上有氧呼吸； +100 mv以下發(fā)酵產(chǎn)能 厭氧菌： +100