細(xì)胞生物學(xué)研究方法(1)(參考版)
2025-01-19 21:11本頁(yè)面
【正文】 于是英國(guó)人 Kohler和 Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù) ， 獲 1984年諾貝爾獎(jiǎng) 。 ? 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法： 生物方法 （ 仙臺(tái)病毒 、 副流感病毒和新城雞瘟病毒 ） 、 化學(xué)方法 （ 聚乙二醇 PEG） 、 物理方法 （ 電擊和激光 ） 。 ? 自發(fā)融合： 同種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象 。 ? 同核體 ：相同基因型的細(xì)胞融合而成 。 4. 單倍體培養(yǎng) ：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。 2. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng) ：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。 表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系 細(xì)胞系名稱 細(xì)胞類型 來源 3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細(xì)胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細(xì)胞 敘利亞倉(cāng)鼠 PtKl 上皮細(xì)胞 袋鼠 L6 成肌細(xì)胞 大鼠 PCI2 嗜鉻細(xì)胞 大鼠 SP2 漿細(xì)胞 小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細(xì)胞 小鼠 CHO 卵巢細(xì)胞 中國(guó)地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 （二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 1. 外植體培養(yǎng) ：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。 ? 克隆 （ clone） ：亦稱無性系 。 ? 細(xì)胞株 （ cell strain） ：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群 。 – 轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì) ， 大容量旋轉(zhuǎn)培養(yǎng) ， 使培養(yǎng)的細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中 。 ? 用途：檢測(cè)細(xì)胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài) 、 分離不同種類的細(xì)胞 ， 如分離哺乳動(dòng)物的 XY精子 。 三、細(xì)胞電泳 ? 原理：在一定 PH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷 ， 能在外加電場(chǎng)的作用下發(fā)生泳動(dòng) 。 ? 原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴 ， 形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴 ， 在激光束的照射下 ， 這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光 ， 經(jīng)探測(cè)器檢測(cè) ， 轉(zhuǎn)換為電信號(hào) ， 送入計(jì)算機(jī)處理 ， 輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果 ， 并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群 ， 分離純度可達(dá) 99%。 ? 原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處 ， 并停留在那里達(dá)到平衡 ， 從而將不同密度的成分分離 。 ? 特點(diǎn)： – 介質(zhì)密度較高 ， 陡度大 ， 介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度 。 ? 原理：介質(zhì)密度梯度平緩 ， 分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離 。 速度沉降 velocity sedimentation ? 用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器 。 ? 常用介質(zhì)：氯化銫 、 蔗糖 、 多聚蔗糖 。 Low speed High speed Differential centrifugation （二）密度梯度離心 ? 用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度 ， 將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部 ， 通過離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層 、 分離 。 ? 沉降順序：核 ——線粒體 ——溶酶體與過氧化物酶體 ——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體 ——核蛋白體 。 （一）差速離心 Differential centrifugation ? 特點(diǎn)： – 介質(zhì)密度均一； – 速度由低向高 ， 逐級(jí)離心 。 ? 轉(zhuǎn)速 25kr/min， 離心力 89Kｇ者稱為超速離心機(jī) 。 PCR原理 第三節(jié) 細(xì)胞分離技術(shù) 一、離心技術(shù) ? 是分離細(xì)胞器 （ 如細(xì)胞核 、 線粒體 、 高爾基體 ） 及各種大分子基本手段 。⑤緩沖體系和 Mg2+。 六、 PCR 技術(shù) ? PCR即： polymerase chain reaction。 （二） Southern雜交 ? 是體外分析特異 DNA序列的方法 ， 操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核 DNA或線粒體 DNA切成 DNA片段 ，經(jīng)凝膠電泳分離后 ， 轉(zhuǎn)移到醋
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