生物分離工程第八章沉析(參考版)
2025-01-19 11:56本頁(yè)面
【正文】 。 影響鹽析的主要因素有哪些？ 簡(jiǎn)述有機(jī)溶劑沉析的原理。應(yīng)用此方法要慎重，避免醇溶性有效成分因水溶性差而被一起沉淀除去 。 水提醇沉法與醇提水沉法 ? 醇提水沉法（醇水法）系指先以適宜濃度的乙醇提取藥材成分，將提取液回收乙醇后，加適量水?dāng)噭?，靜置冷藏一定時(shí)間，沉淀完全后濾除的方法。⑥洗滌沉淀。⑤密閉冷藏。④慢加快攪。③選擇適宜的醇沉濃度。但應(yīng)控制濃縮程度，若過(guò)濃，有效成分易包裹于沉淀中而造成損失。一般操作過(guò)程是：將中藥水提液濃縮至 1︰ 11︰ 2（ mL︰ g）， 藥液放冷后，邊攪拌邊緩慢加入乙醇使達(dá)規(guī)定含醇量，密閉冷藏 2448h，濾過(guò)，濾液回收乙醇，得到精制液。 ? 加入變性劑 ? 選擇性熱變性 ? 選擇性酸堿變性 使用時(shí)需慎重?。。?！ 親和沉析 ? 原理： 利用蛋白質(zhì)和特定分子（配基、基質(zhì)、輔酶等）之間高度專一而設(shè)計(jì)的一種特殊選擇性的分離技術(shù)，所以沉淀原理不是依據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異，是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與特定分子結(jié)合，形成固相從而與雜質(zhì)分離 ? 分類： 根據(jù)親和沉淀的機(jī)理，分為 一次作用親和沉淀 （水溶性分子偶聯(lián) 2個(gè)或 2個(gè)以上的親和配基，雙配基和多配基可與含有 2個(gè)以上的親和結(jié)合部位的多價(jià)蛋白質(zhì)交聯(lián)，進(jìn)而產(chǎn)生較大的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)而沉淀）和 二次作用親和沉淀 （先使目標(biāo)物質(zhì)和帶有配基（基質(zhì)、輔酶）的載體結(jié)合，然后改變 pH或其它條件使目標(biāo)物 配基 載體形成可逆性沉淀，從而使目標(biāo)物與雜質(zhì)分離 (CE p356)。 分離核酸用沉析劑 ? 酚、氯仿、十二烷基磺酸鈉等 ? 目的是使核酸和蛋白質(zhì)分離，蛋白質(zhì)變性沉淀，核酸則存在于水溶液中。 ? 由于在等電點(diǎn)附近，溶質(zhì)仍然有一定的溶解度，等電點(diǎn)沉淀法往往不能獲得高的回收率，因此等電點(diǎn)沉淀法通常與鹽析、有機(jī)溶劑沉淀法聯(lián)合使用 ? 操作時(shí)的注意事項(xiàng)： （ 1）由于無(wú)機(jī)離子的影響，蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)通常會(huì)發(fā)生“漂移”，陽(yáng) 高，陰 低 （ 2）溶質(zhì)的穩(wěn)定性 （ 3）鹽析效應(yīng) 其它沉淀法 ? 水溶性非離子型聚合物沉淀劑 ? 成鹽類復(fù)合物沉析劑 ? 離子型表面活性劑 ? 離子型多聚物沉析劑 ? 氨基酸類沉析劑 ? 分離核酸用沉析劑 ? 分離粘多糖用沉析劑 ? 選擇性變性沉析法 ? 親和沉析 水溶性非離子型聚合物沉淀劑 ? PEG ? This form of precipitation involves the addition of a nonionic polymer to the protein solution. This works because the addition of the polymer reduces the amount of water available to interact with the protein. The polymers that have received the mos
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