菌種操作規(guī)程ppt課件(參考版)
2025-01-13 10:18本頁(yè)面
【正文】 若三角瓶中的培養(yǎng)基暫時(shí)不用，可放置冰箱內(nèi)保存。 ? 倒碟： 三角瓶中的培養(yǎng)基一般冷至 40～ 50℃ ，在無(wú)菌室倒碟，每碟倒 20mL左右，凝固后倒置于 36～38℃ 恒溫室培養(yǎng) 48小時(shí)后無(wú)雜菌生長(zhǎng)方可備用。 ? 消毒：在 ， 119～ 121℃ 滅菌 30分鐘，并填寫 《 細(xì)菌培養(yǎng)基配制記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 ? 擺細(xì)菌斜面：滅菌后培養(yǎng)基冷至 40至 50℃ ，小試管要擺斜面，凝固后放置 36～ 38℃ 恒溫室培養(yǎng) 48小時(shí)后無(wú)雜菌生長(zhǎng)方可備用。瓊脂完全溶化后，趁熱裝入試管（ 18 180mm）或 500mL三角瓶中，小試管裝量每支約 10mL，三角瓶每瓶 300mL裝量，分裝必要時(shí)可用三角漏斗，以免使培養(yǎng)基溢在管口或瓶口上而造成污染。 ? PH： 待藥品完全溶解后再補(bǔ)充水定容至所需量，調(diào)整 PH，若 PH偏酸，可滴 10N的 NaOH,邊加邊攪拌 ,調(diào)節(jié) PH至 ～ ；若 PH偏堿 ,則用 10N HCl調(diào)節(jié) PH至 ～ ,應(yīng)注意 PH值不要調(diào)過(guò) ,以免回調(diào)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。 ? 消毒 在 ， 119℃ ～ 121℃ 下滅菌 30分鐘，滅菌后置 36～ 38℃ 恒溫室培養(yǎng) 24小時(shí)后檢查無(wú)雜菌生長(zhǎng)，溶液清亮無(wú)沉淀，消后 PH為 ，每批使用期不超過(guò) 7天， 《 肉湯培養(yǎng)基配制記錄 》 和《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。把燒杯放于水盆中冷卻后，慢慢加入化學(xué)純硫酸，邊加邊用玻璃棒攪拌，防止硫酸濺出，開始有沉淀析出，硫酸加到一定量沉淀可溶解，加硫酸至溶液總體積為 1000mL 細(xì)菌培養(yǎng)基 ? 肉湯培養(yǎng)基 ? 固體培養(yǎng)基 肉湯培養(yǎng)基配制 ? 配方 成分 葡萄糖 牛肉膏 氯化鈉 蛋白胨 酚紅 配 比 % 1% % % % 規(guī) 格 分析純 生物試劑 分析純 生物試劑 分析純 ? 配制 為了稱量方便，一般稱牛肉膏時(shí)放玻璃棒，其它成分分別加適量的蒸餾水溶解之，混合后加足水量，再加酚紅溶液，攪拌均勻，用 10N的氫氧化鈉調(diào) PH到 ～ 。 ? 1%～ 2%來(lái)蘇爾溶液：將 10%的來(lái)蘇爾溶液稀釋 5～ 10倍。 ? 丙二醇 50mL加熱熏煙滅菌。 ? 75%酒精： 95%酒精 79mL加蒸餾水至 100mL。 ? 碳酸品紅染色劑 堿性品紅酒精飽和液：品紅 1克、溶于 9mL 95%酒精 5%石碳酸溶液：石碳酸 ，溶于 90mL蒸餾水中 兩種溶液混合，攪勻，過(guò)濾即得。 ? 酚紅配制 方法一：稱取 1克酚紅于研缽中，用 成糊狀，研磨，再分次加入氫氧化鈉溶液（總量為57mL）研磨，充分溶解后，加蒸餾水至 100mL，過(guò)濾即成。 廢液樣處理方法 ? 菌種廢母瓶、廢懸浮液，化驗(yàn)樣余樣，菌種觀察菌絲及測(cè) PH多余發(fā)酵液等均不得直接倒入下水道，必須升溫至 100℃ 左右煮沸 30分鐘后，再放入下水道并填寫 《 廢樣液處理記錄 》 。 ? 將其放于 28℃ 177。 ? 在滅菌好的培養(yǎng)皿內(nèi)，加入約 15mL滅菌好的馬鈴薯培養(yǎng)基，置水平凝固后，一支 1mL無(wú)菌吸管從孢子懸浮液中吸取 1mL注入盛有 9mL無(wú)菌水的試管中，吹吸三次，使充分混和，然后用一支 1mL無(wú)菌吸管從此試管中吸取 1mL注入另一盛有9mL無(wú)菌水的試管中，以此類推制成 10 10 10104 、 105各種稀釋度的孢子懸浮液（注：稀釋液最好提前準(zhǔn)備，空白培養(yǎng) 1～ 2天為好）。先將菌株作分離培養(yǎng)，挑出若干個(gè)單孢子菌落，將這些菌落初篩和復(fù)試，選出比出發(fā)菌株高產(chǎn)的優(yōu)良菌株 ? 孢子懸浮液制備：取斜面孢子于適量的有玻璃珠的無(wú)菌水的三角瓶中，放置小搖床上，時(shí)間一般為 15分鐘即可。 1℃ 濕度 50%～ 70%的條件培養(yǎng)11天后，下?lián)u瓶測(cè)生物量、總油和 AA的
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