菌種操作規(guī)程ppt課件-閱讀頁
2025-01-25 10:18本頁面
【正文】 ，一人拆開種瓶包扎的牛皮紙和紗布，待消毒人員通知后點(diǎn)燃火焰圈，燃燒一分鐘左右，當(dāng)接種帽旋下后，在火焰圈內(nèi)迅速打開種瓶棉塞，將種液傾倒入小罐內(nèi)，殘余種液在超凈臺接種肉湯培養(yǎng)基，作無菌監(jiān)測，接種完畢后填寫《 種瓶生產(chǎn)進(jìn)罐記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。 ? 定容后用 10N的 NaOH調(diào)節(jié) PH至 ～ ，按每瓶100mL的量分裝于 500mL翻口三角瓶內(nèi)，塞好專用夾心紗布，用牛皮紙?jiān)?，放置在不銹鋼筐中，蓋上牛皮紙，準(zhǔn)備消毒。 發(fā)酵搖瓶接種操作 ? 發(fā)酵搖瓶接種由兩人操作，一人為主操作子斜面，一人為輔操作搖瓶，主操作用接種鏟取孢子于茄氏瓶中，一支鏟子只能用于一只子斜面，將 3～ 5支子斜面的孢子接入裝有 80mL無菌水的帶玻璃珠三角瓶中，放置搖床上搖 10～ 15分鐘制成 ? 接種后將搖瓶瓶口紗布扯平扎緊，置 180～ 220轉(zhuǎn) /分搖床上， 28℃ 177。 菌種選育和復(fù)壯 ? 自然分離 ? 初篩、復(fù)篩 自然分離 每年進(jìn)行一次。 ? 分離培養(yǎng)基為馬鈴薯培養(yǎng)基（ PDA）。 ? 將上述各種稀釋度的溶液按照 10 10 10 104 、105的順序，用無菌的涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻。 1℃ ，溫度 50%～ 70%的恒溫間培養(yǎng) 48小時(shí)左右，待菌落長好后挑出若干個(gè)單孢子菌落接于斜面上，待斜面長好后，要進(jìn)行搖瓶考察，初篩結(jié)果好的斜面用于生產(chǎn)埋砂土管，若初篩不好，需復(fù)篩，直到選出比出發(fā)菌株高產(chǎn)的菌株 初篩、復(fù)篩 ? 由單孢子菌落接種的斜面孢子 → 搖瓶發(fā)酵 →下?lián)u瓶測試 DW、 TL、 AA、（以母株作對照）→ 選出較高菌落將其斜面埋砂土 → 復(fù)篩（每株用三個(gè)搖瓶、重復(fù)三次） → 最后選出比出發(fā)菌株高的菌株作生產(chǎn)菌種，或是選出一個(gè)較高的新變種作進(jìn)一步選育之用。 染色劑的配制 ? 美蘭（亞甲苯基蘭，一種堿性染料） 取 30mL 95%酒精中，再加蒸餾水至100mL過濾即得。 方法二：稱取 1克酚紅于研缽中，用 43mL的 95%的酒精溶解后，再次加入總量為 57mL的 ，待其充分溶解后，過濾即成。 消毒劑配制 ? ～ %來蘇爾溶液： 150～ 200mL來蘇爾加蒸餾水至10000mL。 ? 甲醛熏煙： 40%甲醛 50mL，高錳酸鉀 20克盛于牛皮紙中包好，帶入無菌室混合，緊閉無菌室經(jīng) 1～ 2天后，借送風(fēng)設(shè)備將甲醛 — 高錳酸鉀氣體排出。 ? %新潔爾滅菌溶液： 1mL新潔爾溶液加蒸餾水至 1000mL。 ? 重鉻酸鉀 — 濃硫酸（ 100g/mL）（洗液）配制：稱取化學(xué)純重鉻酸鉀 100g于燒杯中，加入 100mL蒸餾水，微加熱，使其溶解。 ? 分裝 將配制好的肉湯培養(yǎng)基分裝于 18 180mL試管中，裝量每支約為 8mL，塞棉塞，裝入有牛皮紙的不銹鋼筐中。 固體培養(yǎng)基配制 ? 配方 成分 蛋白胨 牛肉膏 酵母膏 氯化鈉 葡萄糖 瓊脂 配 比 1% 1% % % % 2% 規(guī) 格 生物試劑 生物試劑 生化試劑 分析純 分析純 生物試劑 ? 配制：按實(shí)際用量計(jì)算后，按配方稱取多種藥品放入燒杯中，瓊脂需單獨(dú)稱量，稱牛肉和酵母膏時(shí)一般放玻璃棒，蛋白胨極易吸潮，稱量時(shí)要迅速，然后用加熱的蒸餾水溶解之。 ? 溶解及分裝：將上述的培養(yǎng)基放在有石棉網(wǎng)的電爐上加熱，把稱好的瓊脂放入其中，其間用玻璃棒不停攪拌，以防瓊脂糊底或溢出。裝好后塞上棉塞，三角瓶一般包紗布和牛皮紙。使用期不超過 7天。使用期不超過 7天，倒碟前應(yīng)將洗凈之平碟在 ，119～ 121℃ 蒸汽壓力下滅菌 1小時(shí)，取出放烘箱105℃ 左右烘干。
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