《菌種操作規(guī)程》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 10mL，三角瓶每瓶 300mL裝量，分裝必要時可用三角漏斗，以免使培養(yǎng)基溢在管口或瓶口上而造成污染。 ? 消毒 在 ， 119℃ ～ 121℃ 下滅菌 30分鐘，滅菌后置 36～ 38℃ 恒溫室培養(yǎng) 24小時后檢查無雜菌生長，溶液清亮無沉淀，消后 PH為 ，每批使用期不超過 7天， 《 肉湯培養(yǎng)基配制記錄 》 和《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。 ? 1%～ 2%來蘇爾溶液：將 10%的來蘇爾溶液稀釋 5～ 10倍。 ? 75%酒精： 95%酒精 79mL加蒸餾水至 100mL。 ? 酚紅配制 方法一：稱取 1克酚紅于研缽中，用 成糊狀，研磨，再分次加入氫氧化鈉溶液（總量為57mL）研磨，充分溶解后，加蒸餾水至 100mL，過濾即成。 ? 將其放于 28℃ 177。先將菌株作分離培養(yǎng)，挑出若干個單孢子菌落，將這些菌落初篩和復(fù)試，選出比出發(fā)菌株高產(chǎn)的優(yōu)良菌株 ? 孢子懸浮液制備：取斜面孢子于適量的有玻璃珠的無菌水的三角瓶中，放置小搖床上，時間一般為 15分鐘即可。 ? 將準(zhǔn)備好的不銹鋼筐放在消毒車上推入消毒柜內(nèi)，按蒸汽消毒柜使用方法用蒸汽消毒， 119～ 121℃ ，保溫 30分鐘，接種用具保溫 60分鐘并填寫 《 搖瓶配制記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。首先準(zhǔn)備好無菌石棉手套、白工作服和帽，再準(zhǔn)備好工業(yè)酒精、火焰圈和打火機。 PH ～ 。 ? 在發(fā)酵水平出現(xiàn)連續(xù)異常時，應(yīng)對母瓶搖瓶進行跟蹤實驗。 ? 并瓶前應(yīng)按 5%的比例對母瓶進行抽查，觀察菌絲的外觀，測定菌濃和 PH，并進行鏡檢，合格后才可并瓶。 ? 將準(zhǔn)備好的不銹鋼筐放在消毒車上推入消毒柜內(nèi)，按蒸汽消毒柜使用方法用蒸汽消毒， 119～ 121℃ ，保溫 30分鐘，接種用具保溫 60分鐘并填寫 《 母瓶配制記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。 ? 將接種后的子斜面放置培養(yǎng)間，溫度 28℃ ，濕度 50～70%，培養(yǎng) 7～ 9天，觀察生長情況，并填寫 《 子斜面生長記錄 》 和 《 溫度濕度原始記錄 》 。首先將子斜面和母斜面的雙層紗布解去，將繩子和紗布放在超凈臺左邊待用。 ? 用無菌鏟將種液在斜面上劃線，使之均勻分布，然后塞上棉塞，用雙層紗布扎口，并將接種鏟在肉湯培養(yǎng)基中蘸一下做無菌試驗，將肉湯放置 37℃ 培養(yǎng)間培養(yǎng)。 ? 消毒結(jié)束后，取出斜面待溫度降至 40～ 50℃ 時，將大試管或茄子瓶擺成斜面，空白斜面培養(yǎng) 1～ 2天，觀察無雜菌生長后，包裝好備用，并填寫 《 PDA斜面配制記錄 》 和 《 培養(yǎng)基接種用具消毒記錄 》 。 ? 用雙層紗布濾出馬鈴薯原液，然后按照配方將稱量好的葡萄糖加入溶解，再用吸管吸取 KH2PO MgSO4溶液加入，用量筒定容至所需體積， PH自然。 ? 生產(chǎn)能力試驗： 原則上每批斜面孢子應(yīng)作生產(chǎn)能力試驗，尤其在大生產(chǎn)不正常情況下，為配合發(fā)酵工藝尋找異常原因，每批斜面應(yīng)作搖瓶考察。 砂土孢子的制備 ? 斜面孢子的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 取經(jīng)選育的單菌落制備的大試管斜面孢子或生產(chǎn)良好的茄氏瓶斜面孢子，具以下條件：孢子層生長豐滿，較均勻，孢子數(shù)量較多，少水，孢子呈淡黃色。 砂土管的制備 ? 砂的處理 普通黃沙用稀酸（ 1N的 HCL或 H2SO4）或稀堿（ 1NNaOH）浸泡 12小時后 ,倒去酸水，用自來水充分沖洗至 PH中性，烘干后用磁鐵吸去鐵屑，經(jīng) 60目篩過篩后備用。 ? 安瓿管的泄漏測定 用高頻火花測定儀進行測定。 孢子懸浮液的制備 ? 將經(jīng)過搖瓶考察指標(biāo)符合要求對照的斜面孢子，制成高濃度的孢子懸浮液，用無菌的毛細(xì)吸管或注射器將菌液分裝于安瓿管底部，每管裝 ～ 預(yù)凍及速凍 ? 灌裝好的安瓿管置 2～ 5℃ 冰箱預(yù)凍 1h，然后置 30℃ 溫度下速凍 1
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