【正文】 ③ 口服吸收 納米乳 服用后藥物吸收較快，引起表面張力低易于通過(guò)胃腸壁的水化層，可克服腸壁上皮細(xì)胞膜的障礙，從而加速吸收，且可減少或避。給兔作皮下注射，并用藥物水溶液注射作對(duì)照，不同時(shí)間在注射部位用 ?照相機(jī)取相，發(fā)現(xiàn)水溶液圖象的消失比納米乳快 10倍。水量的增加使疏水藥物的溶解度降低，從而使納米乳成為過(guò)飽和，可以起促進(jìn)經(jīng)皮給藥的吸收。熱力學(xué)活度與飽和度直接有關(guān)，過(guò)飽和系統(tǒng)可增大藥物的擴(kuò)散壓和吸收速率。納米乳中藥物的吸收系數(shù)可以比其它經(jīng)皮制劑高好幾倍。對(duì)納米乳中親脂性強(qiáng)的藥物的體內(nèi)釋放，體內(nèi)的脂解代謝也對(duì)藥物的釋放有促進(jìn)作用，通常無(wú)法把體外結(jié)果推廣用于體內(nèi)。如果藥物的親脂性弱，擴(kuò)散將起支配作用，因而藥物的釋放與納米乳的代謝無(wú)關(guān)；相反，如藥物的親脂性很強(qiáng)，如碳?xì)浠衔锏?，則甘油三 酯等脂類的代謝可能起關(guān)鍵作用。整個(gè)動(dòng)力學(xué)過(guò)程是受油水間的分配速率所控制，而不是受透過(guò)界面膜擴(kuò)散的控制。由每次測(cè)得的藥物在透析袋內(nèi)外的濃度及體積，即可算得該時(shí)間的釋藥百分率。這時(shí)藥物從油滴中釋放入釋放介質(zhì)，僅受到油滴和新的外水相之間 的真實(shí)的濃度梯度的控制，符合無(wú)限稀釋的條件。袋內(nèi)外的藥物濃度梯度較小，本法測(cè)得的釋藥速率往往顯著偏小，且不是真實(shí)的釋放速率。 以下 體外釋藥的動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)方法 ，不僅適用于納米乳，也適用于其它給藥系統(tǒng) ： ① 透析袋擴(kuò)散法 在透析袋中放置一定體積的載藥 O/W型納米乳，扎緊后置入釋放介質(zhì)中， 37℃ 恒溫并連續(xù)電磁攪拌，定時(shí)從釋放介質(zhì)中取樣分析藥物含量并加入新鮮介質(zhì)?？刹捎眉尤肭宓鞍椎姆椒ㄌ岣呷芙舛?，由于親脂性藥物與血蛋白 （ 主要是清蛋白 ）有強(qiáng)的親和力，這比用其他的潛溶劑優(yōu)越，因?yàn)樗求w內(nèi)的成分。靜脈給藥的納米乳用作 親脂性藥物的載體，這些藥物的水溶性不高。通常，結(jié)合在納米乳油相中的藥物都是脂溶性的，在水中的溶解度有限，這就使得漏槽條件不能占優(yōu)勢(shì)。從水相釋放的藥物形成突釋，藥物從油相中釋放形成緩釋。但是，在納米乳中，由于有乳化劑和助乳化劑的存在，其分配系數(shù)不一定與上面求得的值完全相同。了解藥物的分配對(duì)其制備和藥物的釋放，均有一定意義。制得的納米乳粒徑 ≤100 nm, 且粒徑呈 Gauss分布。再制備納米乳 : 15 mg玉米油、 1 mg EPC及不同量的 PEG2022PE在 CHCl3中混合。通過(guò) ?m壓濾器壓濾。先制備脂質(zhì)體： 卵磷脂酰膽堿（ EPC） 、或膽固醇（ CHOL）與 EPC（摩爾比 45:55）混合物、或 CHOL與二硬脂酰磷脂酰膽堿（ DSPC）（摩爾比 45:55）混合物溶于 CHCl3，通 N2干燥成膜，抽真空 2 h。 制備納米乳時(shí) 有時(shí) 可能步驟更復(fù)雜。納米乳中的油、水僅在一定比例范圍內(nèi)混溶，在水較多 的某一范圍內(nèi)形成 O/W型納米乳，在油較多的某一范圍內(nèi)形成 W/O型納米乳。通常制備 W/O型納米乳比 O/W型納米乳容易。特別是當(dāng)助乳化劑乙醇含量高（靠近水 /乙醇的頂點(diǎn)），或油量很大（靠近油的頂點(diǎn)）時(shí)，乳化劑的用量明顯降低，有利于降低乳化劑帶來(lái)的毒性 [17]。再用改良的 準(zhǔn) 三元相圖研究，即以水 /乙醇為一個(gè)組分（水 /乙醇 =），乳化劑和油各作一個(gè)組分，可制作 準(zhǔn) 三 元 相圖，得圖 210，計(jì)算得其納米乳范圍內(nèi)的乳化劑（磷脂）量分別為 6%~28%。以磷脂 /乙醇 = 為一個(gè)組分，得相圖 29。要先確定 Km，以油相（油酸乙酯） =50%，其余組分共 50%，得相圖 28，可見(jiàn)在 Km=附近可得納米乳（圖中 M區(qū) ）。 由于納米乳需要較大量的乳化劑而帶來(lái)毒性。但溫度對(duì)納米乳的制備影響較大，通常需要在恒溫下測(cè)定繪制相圖的數(shù)據(jù)，并 在該溫度下應(yīng)用相圖。 制作的方法是，將一定組成的油、乳化劑、助乳化劑混合溶液用水滴定，每次加水后達(dá)到平衡時(shí)，用肉眼觀察是否是基本透明的納米乳，或是渾濁的乳狀液（油多時(shí)為 W/O型，水多時(shí)為 O/W型），或是半固態(tài)凝膠。當(dāng)油、乳化劑和助乳化劑確定了之后，可通過(guò) 準(zhǔn)三元相圖 找出納米乳區(qū)域，從而確定它們的用量。制備 W/O型納米乳時(shí)，大體要求乳化劑的 HLB值為 3～ 6，制備 O/W型納米乳則需用 HLB值為 8～ 18的乳化劑，參看表 23。 29 助乳化劑可調(diào)節(jié)乳化劑的 HLB值，使符合油相的要求。達(dá)到臨界值的納米乳乳滴多為球形。助乳化劑使乳化劑的溶解度增大， ? 進(jìn)一步降低，甚至可出現(xiàn)負(fù)值（可以理解為增大界面不僅不需要能量，而且會(huì)自動(dòng)進(jìn)行并釋放能量），乳滴易于進(jìn)一步分散，乳化劑及助乳化劑在油水界面進(jìn)一步大量吸附，使二者在連續(xù)相內(nèi)的濃度降低，界面張力重新成為正值，于是形成納米乳。納米乳的超低界面張力（ ?）對(duì)穩(wěn)定性起著重要作用，通常其 ?≤10 － 2 mN/m（大于這個(gè)數(shù)值則成普通乳，該值稱為臨界值）。因納米乳的乳滴小界面積大，需要更多的乳化劑才能成乳，同時(shí)才能得到低的界面張力。 ② 助乳化劑 用于增加膜的柔順性與牢固性，通常助乳化劑是鏈長(zhǎng)約為乳化劑的一半左右的醇類，如乙醇、丙醇、丙二醇、甘油等。 Shinoda等用卵磷脂作乳化劑，丙醇作助乳化劑的油、水系統(tǒng)中，濃度較低的卵磷脂亦可得到納米乳。 2 納米乳的制備 (1) 乳化劑和助乳化劑 ① 乳化劑 納米乳需要的乳 化劑量較大。 事實(shí)上，在普通乳中增加乳化劑并加入助乳化劑可以得到納米乳，其每個(gè)小的乳滴都有乳化劑及助乳化劑形成的膜，故增大了乳化劑的用量，助乳化劑則增 28 大膜的柔順性，促進(jìn)曲率半徑很小的膜的形成；而在濃的膠束溶液中加入一定量的油及助乳化劑也可以得到納米乳，即油被膠束增溶，同時(shí)膠束粒徑變大。如 Shah等（ 1972）通過(guò)各種實(shí)驗(yàn)證明，在油、乳化劑和助乳化劑中逐漸加入水，當(dāng)水量很少時(shí)形成油包球形水滴的納米乳，此后系統(tǒng)按以下順序變化：對(duì)稱性球形水滴 ?不對(duì)稱性水柱形體 ?層狀結(jié)構(gòu) ?水為外相的各種結(jié)構(gòu) ?對(duì)稱性球形油滴。有人將環(huán)磷酰胺作成 O/W型納米乳， 可 提高抗癌活性。 納米乳由 Schulman開始從 20世 紀(jì) 40年代進(jìn)行系統(tǒng)研究，直到 20世紀(jì) 90年代才有藥用納米乳的商品問(wèn)世。文獻(xiàn)中對(duì)膠束和納米乳的區(qū)別不是很嚴(yán)格的，有的作者認(rèn)為它們根本沒(méi)有嚴(yán)格的區(qū)別，即核心的油較少時(shí)為膠束，油較多時(shí)為納米乳。 納米乳 納米乳（ nanoemulsion）通常是粒徑為 10~100 nm的乳滴分散在另一種液體中形成的膠體分散系統(tǒng)，呈透明或半透明，其乳滴多為球形，大小比較均勻，經(jīng)熱壓滅菌或離心也不能使之分層，通常屬熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)。這樣制得的載藥膠束更穩(wěn)定，可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬和腎排泄，提 27 高生物利用度。 (4) 化學(xué)結(jié)合法 利用藥物與聚合物疏水鏈上的活性基團(tuán)反應(yīng)，將藥物共價(jià)結(jié)合到聚合物分子中。 (3) 乳化 凍干法 將難溶性藥物溶于有機(jī)溶劑，聚合物以適當(dāng)方法制成澄清水溶液，在劇烈攪拌下將有機(jī)溶液溶液倒入水溶液制成 O/W型乳狀液，繼續(xù)攪拌使有 機(jī)溶劑揮發(fā)，除去游離藥物等小分子，冷凍干燥即得。 (1) 自組裝溶劑蒸發(fā)法 將材料與藥物溶于有機(jī)溶劑，逐漸加到攪拌的水中，形成膠束后，加熱除去有機(jī)溶劑，即得。 2 聚合物膠束載藥的方法 一般包載疏水性藥物的包封率比較高，包 載 親水性或兩親性藥物的包封率較低。也有用聚氨酯類兩親性聚合物（如聚乙內(nèi)酯、聚醚）或膽鹽和卵磷脂的 [15]。此外，有的聚合物帶電，還可以借助靜電引力。由于合成時(shí)可以控制親水段和疏水段的長(zhǎng)度及摩爾比，可制得不同相對(duì)分子質(zhì)量和不同親水 疏水平衡的共聚物。能形成比較穩(wěn)定的膠束 PEG 段的相對(duì)分子質(zhì)量在 1 000~15 000 范圍，二疏水段的相對(duì)分子質(zhì)量可稍小和相當(dāng)。 目前應(yīng)用作為聚合物膠束材料的是兩親性嵌段共聚物。共聚物又分為嵌段共聚物與接枝共聚物兩類。以聚合物膠束為抗癌藥物載體的例見(jiàn)表 22。藥物在聚合物膠束中的毒副作用也大大降低，如阿霉素 B的中毒劑量，對(duì)荷 P388白血病大鼠游離藥物為 30mg/kg，而用阿霉素的共聚物膠束則為 600mg/kg [11]。由于其外殼親水， 還 可以降低血液粘度和血管阻力。如聚乙二醇 /聚酯酰乙醇胺膠束，粒徑 7~35 nm，與血漿無(wú)明顯作用，血液中循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)，且在荷 Lewis 肺癌的小鼠癌組織 及 EL T4 淋巴癌中濃集。聚合物膠束作為載藥系統(tǒng)，可以提高藥物穩(wěn)定性、延緩釋放、提高療效、降低毒性和具有靶向性。 圖 26 聚合物膠束作為藥物載體示意圖 1為親水性藥物， 2,3,4分別為兩親性藥物， 5為疏水性藥物 25 聚合物膠束（ polymeric micelles）由兩親性聚合物單體在溶液中自動(dòng)反應(yīng)或自動(dòng)組裝（ selfassembling）形成，粒徑一般在 10~100 nm范圍。作為藥物載體的膠束均是聚合物膠束，其 CMC值較低，而且稀釋時(shí)的解離速率不高，一般可以在發(fā)揮藥效前保持膠束狀態(tài)。在有機(jī)溶劑里也可以形成膠束，但其結(jié)構(gòu)不同，是親水基向內(nèi)、疏水基向外，又稱為反膠束。水中的鈉肥皂膠束帶負(fù)電（因有電離的羧基）。水中鈉肥 皂濃度小時(shí)主要分布在水 氣界面，親水的羧基在液面內(nèi)，疏水的烴基伸向液面外；當(dāng)鈉肥皂的濃度較大時(shí)，液面已經(jīng)飽和，一部分完全進(jìn)入液面以下，形成膠束：即疏水基在內(nèi)而親水基向外、由若干鈉肥皂單體組成的集團(tuán)。 ⑥ 超聲 冷凍法 將磷脂經(jīng)超聲處理高度分散于緩沖鹽溶液中，加入凍結(jié)保護(hù)劑（如甘露醇 、海藻酸等）冷凍干燥后，再將干燥物分散到含水溶性抗腫瘤藥物的緩沖鹽溶液中，可得納米脂質(zhì)體。再用高壓乳勻機(jī) （ 或超 24 聲 ） 處理。再用超聲波處理可得納米脂質(zhì)體。再將脂質(zhì)體混懸液通過(guò)高壓乳均機(jī) 多 次，或用超聲波處理，可得納米脂質(zhì)體。 ② 鈣融合法 在磷脂酰絲氨酸等帶負(fù)電荷的酸性磷脂用加入 Ca2+,使之相互融合形成蝸牛殼圓筒狀結(jié)構(gòu)，加入螯合劑 EDTA 除去 Ca2+,可得納米脂質(zhì)體。 (2) 制備方法 通常時(shí)先制成多室脂質(zhì)體或大單室脂質(zhì)體，再分散制成納米脂質(zhì)體。 膽固醇類具有調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性的作用，可稱為脂質(zhì)體的流動(dòng)性緩沖劑（ fluidity buffer）。豆磷脂為卵磷脂和少量腦磷脂的混合物。 23 4 納米脂質(zhì)體的膜材和制備方法 (1) 膜材 分磷脂類 和膽固醇類。 (3) 緩釋藥物而延長(zhǎng)藥效 藥物可從納米脂質(zhì)體中緩慢釋放，有利延長(zhǎng)藥效。 3 納米脂質(zhì)體的生物學(xué)性質(zhì) (1) 組織細(xì)胞的相容性 由于組成納米脂質(zhì)體的 磷脂及其衍生物的生物相容性好，其 囊 泡結(jié)構(gòu)類似生物膜，有很好的細(xì)胞相容性和親和性，可以靜脈給藥。 (2) 電性 含磷脂酸（ PA）和磷脂酰絲氨酸（ PS）等的酸性脂質(zhì)體荷負(fù)電，含堿基（胺基）如十八胺等的脂質(zhì)體荷正電，不含離子的脂質(zhì)體顯電中性。轉(zhuǎn)變時(shí)的溫 度稱為相變溫度（ phase transition temperature），相變溫度的高低取決于磷脂的種類。 22 圖 25 納米脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)示意圖 2 納米脂質(zhì)體的理化性質(zhì) (1) 相變溫度 脂質(zhì)體的物理性質(zhì)與介質(zhì)溫度有密切關(guān)系。 膽固醇亦屬于兩親物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)中亦具有疏水與親水兩種基團(tuán)，其疏水性較親水性強(qiáng)。如果把磷脂的醇溶液倒入水中，醇很快地溶于水，而磷脂分子則排列在空氣 水的界面上，極性部分在水內(nèi)，而非極性部分則伸向空氣中。 1 納米脂質(zhì)體的組成和結(jié)構(gòu) 脂質(zhì)體由磷脂和適當(dāng)?shù)母郊觿ㄈ缒懝檀迹┙M成。美國(guó) SEQUUS公司研制的阿霉素納米脂質(zhì)體經(jīng) FDA 批準(zhǔn)上市，商品名 Doxil，主要用于由 HIV引起的卡巴瘤。 20世紀(jì) 60年代末 Rahman等人首先將脂質(zhì)體作為藥物載體應(yīng)用。納米脂質(zhì)體（ nanoliposomes）粒徑在 20~80nm之間，又稱為 小單室脂質(zhì)體，抗癌藥物可以包封于其脂類雙分子層之間。脂質(zhì)體可分為單室脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體，每個(gè)室均為封閉的雙分子層。故納米載體可以提高抗癌藥物在腫瘤部位的濃度、延長(zhǎng)其滯留時(shí)間，從而提高抗癌療效、降低毒副作用。 抗腫瘤藥物的納米載體 概述 腫瘤部位的細(xì)胞透過(guò)性處于亢進(jìn)狀態(tài)，抗癌藥物在血液循環(huán)中存在的時(shí)間愈長(zhǎng)，進(jìn)入腫瘤部位的機(jī)會(huì)就愈多。 T表示 納米給藥系統(tǒng) 對(duì)靶器官比所有非靶器官的選擇性。 te值大于 1表示 納米給藥系統(tǒng) 對(duì)靶器官比某非靶器官有選擇性； te值愈大，選擇性愈強(qiáng)； 納米給藥系統(tǒng) te值 與藥物溶液的 te值相比，說(shuō)明 納米給藥系統(tǒng) 靶向性增強(qiáng)的倍數(shù)。 re大于 1 表示 納米給藥系統(tǒng) 在該器官或組織有靶向性， re愈大靶向效果愈好，等于或小于 1表示無(wú)靶向性。二者的關(guān)系取決于藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑、在靶位的滯留情況（即在活性位點(diǎn)保持足夠的靶向給藥水平和游離藥物濃度）、在靶位的適時(shí)釋放等因素。 化療的普通給藥制劑中，抗癌藥物的藥理活性與血漿中藥物濃度呈線性相關(guān)。然而，由于藥物在血漿中的量也會(huì)隨之持續(xù)增高，將導(dǎo)致藥物靶向選擇性降低?；谝陨霞僬f(shuō)， Levy提出： ?藥物從靶位的清除通常比藥物從整個(gè)體內(nèi)的清除要快； ?靶向給藥 系統(tǒng) 的活性維持時(shí)間通常比 普通給藥劑量的維持時(shí)間要短，因此要達(dá)到恒定的藥理效果，靶向給藥的頻率比常規(guī)給藥的 頻率要高； ?生物轉(zhuǎn)化、排泄或其它決定身體對(duì)藥物系統(tǒng)清除過(guò)程的變化，不會(huì)影響靶向給藥系統(tǒng)從活性位點(diǎn)的清除動(dòng)力學(xué)。對(duì)那些只有游離態(tài)才有活性的藥物，其結(jié)合可能降低有效藥量而達(dá)不到預(yù)期的療效。大分子