常用培養(yǎng)基制備、滅菌與消毒-微生物分離、純化及培養(yǎng)技術(shù)(參考版)
2025-05-27 16:20本頁面
【正文】 因莢膜薄，且易變形，所以不能用加熱法固定。并用另一種對比鮮明的染料 使菌體著色。 實驗四、細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察（革蘭氏染色、芽孢染色、 莢膜染色） 革蘭氏染色法原理 由于細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的不同可將其分為革蘭氏陰性和陽性 芽孢染色原理 芽孢壁比營養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)復(fù)雜而且致密，透性低，著色和脫色較營養(yǎng)細(xì)胞難。菌落形態(tài)較大，質(zhì)地疏松，顏色各異，有絲狀、絨毛狀或蜘蛛網(wǎng)狀的菌絲體。菌絲呈管狀，有的有橫隔將菌絲分割為多細(xì)胞（如青霉、曲霉），有的菌絲沒有橫隔（如毛霉、根霉）。注意放線菌菌絲直徑的大小，孢子絲的形狀。區(qū)別基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及孢子絲的著生部位。由于孢子的存在使菌落表面呈干粉狀。菌絲呈各種顏色，有的能分泌水溶性色素到培養(yǎng)基內(nèi)。 放線菌細(xì)胞一般呈分枝無隔的絲狀，菌絲體分為在培養(yǎng)基內(nèi)部的 基內(nèi)菌絲 和伸出培養(yǎng)基表面的 氣生菌絲 。 實驗三－ 2：放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 一、目的要求 掌握放線菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察的方法 觀察放線菌的菌落特征、個體形態(tài)及其繁殖方式。根據(jù)細(xì)菌個體形態(tài)觀察的不同要求，可將染色分為 3種類型：簡單染色、鑒別染色、特殊染色。菌落特征與組成菌落的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生長狀況、排列方式、好氣性和運動性直接相關(guān)。細(xì)菌形態(tài)受培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基成分、濃度、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間等發(fā)生變化。 （ 3）保護劑的配制：配制，滅菌，檢查 （ 4）菌懸液的制備： 23ml保護劑 （ 5）分裝樣品：菌懸液每管 （ 6）預(yù)凍：程序控溫儀降溫 （ 7）冷凍真空干燥： 50℃ 下抽真空 （ 8）取出樣品：輕敲松散即達(dá)標(biāo) （ 9）第二次干燥： （ 10）熔封 （ 11）存活性檢測：抽取一管進(jìn)行存活性檢查 （ 12）保存： 4℃ 保存 實驗三－ 細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)觀察（簡單染色） 一、目的要求 觀察細(xì)菌的菌落特征 掌握簡單染色法 在油鏡下觀察細(xì)菌個體的形態(tài) 學(xué)習(xí)環(huán)境中微生物的檢查方法，并加深對微生物分布廣泛性的認(rèn)識 二、基本原理 形態(tài)觀察主要包括群體的形態(tài)和個體的形態(tài)觀察。 冷凍真空干燥法 （ 1）凍干管的準(zhǔn)備：中性硬制玻璃，烘干，滅菌。 此法多用于產(chǎn)芽孢的細(xì)菌 、 產(chǎn)生孢子的霉菌和放線菌 。 用真空泵抽干水分后火焰封口 (也可用橡皮塞或棉塞塞住試管口 )。 (6)分裝樣品 每支砂土管 (注明標(biāo)記后 )加入 0． 5ml菌懸液 (剛剛使砂土潤濕為宜 )， 用接種針拌勻 。 (4)無菌檢查 每 10支砂土管隨機抽 1支 ， 將砂土倒入肉湯培養(yǎng)基中 ， 30℃ 培養(yǎng)40h， 若發(fā)現(xiàn)有微生物生長 ， 所有砂土管則需重新滅菌 ， 再作無菌試驗 ，直至證明無菌后方
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