雜交棉與親本的基因差異表達_畢業(yè)論(參考版)
2025-06-07 19:32本頁面
【正文】 本實驗主要是對于棉花幼苗三片真葉期的葉片進行差異表達分析，并沒有對地下部分 — 根作進一步的分析，因此，對于根部和葉片的基因表達差異是否 一致并沒有提供依據(jù)，還需要對根部的基因表達做進一步的研究才能知道根部和葉片的基因表達差異是否一致。 討論 石河子大學本科畢業(yè)論文 魏凱 雜交棉與親本的基因差異表達 11 11 雜種優(yōu)勢可能表現(xiàn)在植物生長和 發(fā)育的各個階段，幼苗可以在嚴格控制生長條件下生長并表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢，因此選擇這一時期檢測基因表達差異可以避免外界環(huán)境等因素對雜種優(yōu)勢基因表達的影響。在這些差異表達中基因單態(tài)表達類型最多，單親顯性表達和單親下調(diào)表達這兩種類型較多，有少數(shù)雜交種上調(diào)表達和單親下調(diào)表達。 石河子大學本科畢業(yè)論文 魏凱 雜交棉與親本的基因差異表達 10 10 圖六 基因差異表達類型 [1] 根據(jù)基因差異表達的類型， 統(tǒng)計 64 對引物擴增結(jié)果，建立雜交棉基因表達譜（圖七），結(jié)果顯示：差異性 表達的基因在測定的棉花幼苗 cDNA 片段中占 %，其中雜交種上調(diào)表達型占 %，雜交種下調(diào)表達型占 %，單親顯性表達型占 %，單親下調(diào)表達型占 %。 I： 雜交種上調(diào)表達，擴增強帶僅出現(xiàn)在雜交棉，雙親無； II： 單親顯性表達，擴增強帶在雙親之一和雜交棉中出現(xiàn) ，而在另一親本中不出現(xiàn)，包括母本、雜交棉中有而父本無和父本、雜交棉中有而母本無兩種類 型； III： 單親沉默表達，擴增強帶僅出現(xiàn)在親本之一 ，包括僅母本有而其他無和僅父本有而其他無兩種類型 ； Iv ： 雜交種下調(diào)表達，雙親都有擴增強帶而雜交棉沒有； V： 基因單態(tài)表達，擴增強帶在雙親和雜交棉中均出現(xiàn) 。從這里可以明確的得出，雜交棉 新陸早 43 號與親本之間存在基因的差異表達，基于這樣的分析，我們就可以做出進一步的研究，找出其差異基因等一系列后續(xù)工作。 如圖六所示，我們明顯可以看出雜交棉與親本之間的基因表達的差異，并且這石河子大學本科畢業(yè)論文 魏凱 雜交棉與親本的基因差異表達 9 9 些差異性的表達不在少數(shù)。 圖三 雙酶切 圖四 cDNA 預擴增 選擇性擴增分析 選擇性擴增總共用到了 8 對引物，總共 64 對引物組合用于 cDNAAFLP 的選擇性擴增。如圖三所示，cDNA 在雙酶切之后，條帶處于彌散狀態(tài)，說明整個膠版上都分布有不同量的 DNA，從而可以表明雙酶切效果良好，可以進行預擴增。 的合成與檢測 圖二是對合成的 cDNA 的檢測結(jié)果，以 EF1α 為內(nèi)參擴增的目的片段，用瓊脂糖石河子大學本科畢業(yè)論文 魏凱 雜交棉與親本的基因差異表達 8 8 電泳檢測在 500bp 處出現(xiàn)亮的條帶 ，說明反轉(zhuǎn)錄成功，可以用于 AFLP 標記的分析。 總 RNA 提取與純化效果分析 如圖一所示的為 RNA的瓊脂糖電泳，可以看到出現(xiàn)出現(xiàn) 28S和 18S兩條亮帶，并且 28S大概為 18S的兩倍，表明所提取的 RNA效果良好，污染較少。 可以計算出雜種優(yōu)優(yōu)勢： 中親優(yōu)勢 =（ F1雙親平均） /雙親平均 X100%=% 超親優(yōu)勢 =（ F1HP） /HPX100%=% 算出的中親優(yōu)勢為 %，超親優(yōu)勢為 %。在選擇性擴增階段 , 使用比預擴增引物添加 1 至多個堿基并帶有放射性或熒光標記的引物有選擇的擴增限制性片段 , 擴增的產(chǎn)物 TDF 通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離 , 從電泳圖譜中找出差異表達的片段 ［ 5］ 。切割后添加雙鏈錨定接頭 , 使酶切后的片段與接頭相連接 , 產(chǎn)生初級擴增模板 , 再 加入與接頭序列互補的預擴增引物進行預擴增 , 產(chǎn)生次級擴增模板。 技術(shù)的實施 石河子大學本科畢業(yè)論文 魏凱 雜交棉與親本的基因差異表達 6 6 用識別序列為 6 個堿基和 4 個堿基的 2 種限制性內(nèi)切酶進行切割。 的合成及模板的制備 以提取的總 RNA 為模板，參照 Takara cDNA Synthesis Kit User Manual 中 MMLV RTase cDNA Synthesis Kit ( MMLV versio n )( Code ) 中介紹的方法，先以 Ol
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