動(dòng)物遺傳學(xué)第九章動(dòng)物基因組學(xué)(參考版)
2025-05-16 09:15本頁(yè)面
【正文】 最先進(jìn)的是微數(shù)列矩陣 DNA芯片（ DNA chip）技術(shù)。 位于基因表達(dá)序列內(nèi)的 SNP可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平，對(duì)分析基因與性狀的關(guān)系有重要意義。 SNP就是指基因組內(nèi)特定的核苷酸位置上存在兩種以上不同的核苷酸，其中最少一種在群體中的出現(xiàn)頻率不少于 1%（低于 1%則視為突變）。 MS標(biāo)記的特點(diǎn)有 ： ? 數(shù)量豐富，廣泛分布于整個(gè)基因組； ? 具有較多的等位性變異； ? 共顯性標(biāo)記，可鑒別出雜合子和純合子 ? 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，結(jié)果可靠； ? 由于創(chuàng)建新的標(biāo)記時(shí)需知道重復(fù)序列兩端的序列信息，因此其開(kāi)發(fā)有一定困難，費(fèi)用也較高 一個(gè)家系的微衛(wèi)星 PCR檢測(cè)結(jié)果 （ single nucleotide polymorphism ,SNP） SNP與 RFLP、 MS等標(biāo)記不同之處在于不以 “ 長(zhǎng)度 ” 差別為檢測(cè)手段，而是直接以序列的變異作為標(biāo)記。 ? 無(wú)法確定基因座間的獨(dú)立性 ? 對(duì)檢測(cè)要求高 ? 微衛(wèi)星（ microsatellite DNA,MS)又稱(chēng) SSR,STR,SSLP 基本原理： MS是一類(lèi)由幾個(gè)（多為 26個(gè)）堿基組成的基序串聯(lián)重復(fù)而成的 DNA序列，其長(zhǎng)度一般較短，廣泛分布于基因組的不同位置，如（ CA） n、（ AT） n、（ GGC） n等重復(fù)。 ? 實(shí)驗(yàn)操作繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，成本高。分子雜交所用DNA探針核苷酸序列必須是小衛(wèi)星序列通過(guò)分子雜交和放射自顯影后，就可一次性檢測(cè)到眾多小微衛(wèi)星位點(diǎn)，得到個(gè)體特異性的 DNA指紋圖譜。 ? 內(nèi)切酶在基因組的其他部位有較多的酶切位點(diǎn)，通過(guò)電泳檢測(cè)多態(tài)性。 標(biāo)記特點(diǎn) ? 與 RFLP大致相同，但對(duì)限制性內(nèi)切酶和探針有特殊的要求。 基本過(guò)程： 取得 DNA樣本 —— 酶切 —— 電泳 —— 轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上 —— DNA探針雜交 —— 放射自顯影 Southern雜交過(guò)程 RFLP檢測(cè) 優(yōu)點(diǎn)： ? 遍布于整個(gè)基因組，數(shù)量幾乎是無(wú)限的 ? 無(wú)表型效應(yīng)，不受發(fā)育階段及器官特異性限制 ? 共顯性，可區(qū)分純合子和雜合子 ? 結(jié)果穩(wěn)定、可靠 缺點(diǎn)： ? 檢測(cè)技術(shù)繁雜，成本較高，難以用于大規(guī)模的育種實(shí)踐中 ? 分析對(duì)樣品純度要求較高，樣品需要量大 ? RFLP多態(tài)信息含量低 ? 多態(tài)性水平過(guò)分依賴于限制性內(nèi)切酶的種類(lèi)和量 2. 可變串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性 （ varible number of tandem repeats, VNTR） ? 小衛(wèi)星 DNA（ minisatellite DNA）， 第一代指紋技術(shù)（ DNA fingeiprinting) 原理： 重復(fù) DNA小序列， 1070nt（核苷酸），拷貝 101000，主要存在于染色體靠近端粒處。由于 DNA某一位點(diǎn)的變異有可能引起該位點(diǎn)特異性的酶切位點(diǎn)的改變，當(dāng)用限制性內(nèi)切酶處理不能生物個(gè)體的 DNA時(shí)，致使酶切片段的長(zhǎng)度發(fā)生變化，個(gè)體間出現(xiàn)限制性片段長(zhǎng)度的差異。 分子標(biāo)記的三個(gè)階段 隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展和研究水平的深入，分子標(biāo)記的發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段，也稱(chēng)為三代 DNA分子標(biāo)記。 不能直接反應(yīng)基因的情況 （四）分子標(biāo)記（第三代遺傳標(biāo)記） 分子標(biāo)記（又叫 DNA分子標(biāo)記， DNA標(biāo)記） 指能個(gè)體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，是 DNA水平遺傳多態(tài)性的直接反應(yīng)。 表現(xiàn)近中性，對(duì)生物經(jīng)濟(jì)性狀一般沒(méi)有大的不良影響；直接反映了基因產(chǎn)物差異，受環(huán)境影響較小?？捎糜阼b別不同物種或品種。 真正用于遺傳育種研究中的細(xì)胞學(xué)標(biāo)記較少 （三）生化標(biāo)記（第二代遺傳標(biāo)記） 以同工酶和貯藏蛋白的電泳譜帶作為特征的遺傳標(biāo)記。 優(yōu)點(diǎn)： 與形態(tài)標(biāo)記相比，細(xì)胞學(xué)標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是能進(jìn)行一些重要基因的染色體或染色體區(qū)域定位。 （二）細(xì)胞遺傳標(biāo)記（第一代遺傳標(biāo)記） 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記 即細(xì)胞染色體的變異。 、分離純合的過(guò)程，周期較長(zhǎng)。 優(yōu)點(diǎn)： 形態(tài)標(biāo)記簡(jiǎn)單、直觀、經(jīng)濟(jì)方便； 是早期使用的一種遺傳標(biāo)記，也是現(xiàn)在也常用的一種方法。 二、遺傳標(biāo)記的類(lèi)型 形態(tài)學(xué)標(biāo)記 （ morphological marker） 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記 (cytological marker) 生化標(biāo)記 (biochemical marker) 分子標(biāo)記 (molecular marker)： DNA分子遺傳標(biāo)記，或 DNA標(biāo)記。 常用操作舉例
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