rt-pcr實(shí)驗(yàn)心得(參考版)
2024-08-25 05:32本頁面
【正文】 四、幾種緩沖液的配制： 電泳緩沖液： TAE Tris 54g 硼酸 EDTA 20ml 蒸溜水 1000ml 5TBE （貯存液） 再將 5TBE 稀釋 10 倍成 就可以在電泳時使用（即工作液濃度），如取50ml 貯存液 +450ml 水 ——→ 500ml ■ 2020915 的收獲 工作緩沖液 TBE,我的是 10TBE 的濃縮液 , 100ml 的 10TBE 的濃縮液加入 1900 的三蒸水 ,既是為 . 電泳緩沖液是 6緩沖液上樣緩沖液： %溴酚藍(lán) %二甲苯青 FF 30%甘油 6緩沖液， 4℃ 保存 五、瓊脂糖凝膠 的配制： % / %:： +100ml 電泳緩沖液，微波爐中火 30 秒至沸騰，熔化的瓊脂物冷卻至 60℃ 時充分混勻，將溫?zé)岬哪z倒入已置好梳子的膠膜中，在室溫下放置 3045min 后現(xiàn)進(jìn)行電泳。放置過夜并高壓滅菌。 75%乙醇：用無水乙醇 +DEPC 水配，然后放 20℃ 保存 ,或提前 10 分配好 .（其中 DEPC 水需先高壓 !） 異丙醇：放入棕色瓶中 . 氯仿：放入棕色瓶中 . 注 :氯仿，無水乙醇，異丙醇均需重新開瓶，最好分裝于幾個 EP 管 ! 瓊脂糖 . *PBS 均用用滅菌之 DEPC 水配制。所有的操作應(yīng)該在 15 30℃ 的條件下完成，試劑亦在 1530℃ 的條件下。 在化學(xué)通風(fēng)櫥完成操作 。 ■ RNA 抽提指南 注意：用 TRIZOL 抽提 RNA 時要 戴手套和護(hù)眼罩 。 * 離心前小心平衡試管。 * 當(dāng) TRIZOL 用量較大時，可以使用玻璃試管 (Corex)或聚丙材質(zhì)試管，事先檢驗(yàn)以確保該試管可以耐受加 入 TRIZOL 和氯仿后 12,000 g 的離心力。塑料器皿可以在 NaOH 中浸泡 10 分鐘，用水徹底漂洗干凈后高壓滅菌備用。玻璃器皿可以在 150176。 * 在 TRIZOL 中， RNA 是隔離在 RNA 酶污染之外的。 * 使用滅菌的，一次性的塑料器皿和自動吸管抽提 RNA，避免使用公共儀器所導(dǎo)致的 RNA 酶交叉污染。皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌和霉菌，可能污染 RNA 的抽提并成為 RNA 酶的來源。 (可保存一周多 ,重復(fù)用 4 次 !) 為 10mA，電源 100V，電泳 30 分鐘，紫外燈下觀察，滿意的結(jié)果掃描打印。 TBE pH
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