【正文】 小鼠 CD30L 長 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 。另外，胞漿區(qū)被酶切后還可以成為57kD 的具有蛋白激酶活性的胞漿成分。胞漿區(qū)還具有蛋白激酶活性，可以使組蛋白磷酸化，并有自我催化活性?？缒^(qū)長 24 個氨基酸。每個同源區(qū)含有 3 個半胱氨基富集域，分別稱為 1A、2A、 3A、 1B、 2B 和 3B，其中 1B 和 3B 不完整，可能是進化中被截短的。 (2)CD30 分子的結構： CD30 為 120kD 的單體，其前體長 595aa，切除 18 個氨基酸的信號肽后成為成熟蛋白。此外，正常細胞如 CD45RO+的記憶性 T 細胞也有表達。 (六 )CD30 與 CD30L (1)CD30 分子的分布： CD30 首先是在何杰金氏白血病的 Hodgkin(H)細胞和 ReedSternberg(RS)細胞表面用一株針對何杰金氏白細胞病細胞的單抗 Ki1發(fā)現的，并被作為該種白血病細胞的標志，所以 CD30 也被稱為 Ki1。 (3)CD40/CD40L 相互作用對其它細胞的影響： CD40/CD40L 相互作用可以刺激胸腺上皮細胞、樹突狀細胞及其它抗原提呈細胞表達 B7，而參與胸腺中 T細胞的陰性選擇。首先，當 APC 細胞接受外來抗原，并經過加工將其提呈給天然 (na?ve)T 細胞時， T 細胞活化 并表達 CD40L。 CD40L 基因敲除的小鼠來源的活化 T 細胞也不能使巨噬細胞產生 IL1，這說明 CD40/CD40L 相互作用在活化 T 細胞對巨噬細胞的刺激過程中有一定的作用。實驗發(fā)現，正常情況下，活化的 CD4+T 細胞不需要輔助信號即可刺激巨噬細胞活化，發(fā)揮殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的功能，并可分泌細胞因子，如 IL1a 、 IL1b 、IL12 等，其中有些細胞因子作為第二信號作用于 T細胞，促進 T 細胞的進一步分化和增殖。另外， CD40/CD40L相互作用還可以促進 B 細胞表達 B7，使 B 細胞發(fā)揮抗原提呈作用。后來證明這種病人 CD40L 基因發(fā)生了突變，使 B 細胞不能進行正常的 Ig 類別轉換。 CD40L mAb 可以阻斷 T 細胞對 B 細胞的活化作用。研究發(fā)現 CD40/CD40L 交聯可以調節(jié) B 細胞的活化、分化和 Ig 類別轉換，并可以促進記憶性 B 細胞的產生，挽救凋亡的 B 細胞。 CD3 單抗可以刺激 T細胞表達 CD40L。 CD40L 有多種表達形式，在細胞膜表面可以形成同源三聚體，也可以形成以全長分子與另兩個截短體 p31和 p18 形成的異源三聚體存在，在胞漿內則以 p18的同源三聚體存在。不同的蛋白酶切可以形成不同長度的可溶性分子，比較常見的是 p31 和 p18 兩種形式。 CD40L 胞膜外區(qū)含有 4 個半胱氨酸和一個 N糖基化位點。 CD40 的信號轉導主要是通過調節(jié)非受體型酪氨酸蛋白激酶，如 Lyn、 Fyn、 Syk 等的活性，還可以活化 PI3K、磷酯酶 Cg 活化 Rel/NFk B 轉錄因子，誘導 BclxL、 Cdk4 和 Cdk6 蛋白。 (2)CD40 分子的分布： CD40 表達于 B 細胞、胸腺上皮細胞、活化的單核 /巨噬細胞、樹突狀細胞、造血祖細胞、上皮細胞、內皮細胞和一些腫瘤細胞系，如肝癌細胞系 HepG黑色素瘤細胞系 HS294T 等。胞膜 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 第 28 頁 共 68 頁 外區(qū)包含 4 個 CRD，共有 22 個半胱氨酸。 TRAIL 及其受體 DcR1 的發(fā)現 ，為今后腫瘤治療的發(fā)展開辟了一個新的方向。 DR DR5 和 DcR1 都可以與 TRAIL 結合，與 DR4 和 DR5 的結合可以引起細胞凋亡，而 DcR1 由于沒有胞漿部分，不能向胞漿中轉導凋亡信號，所以 DcR1 與 TRAIL 結合后，可以保護細胞不發(fā)生凋亡。這種結構也見于 SOS(Son of Sevenless)和內皮白細胞粘附分子 1。胞膜外區(qū)也有 2 個 CRD，與 DR4 和 DR5 分別有 69%和 52%的同源性。 (2)DcR1： TRAIL 的第三種受體是 DcR1(decoy receptor 1)，也被稱為 TRID(TRAIL receptor without an intracellular domain)。 DR4 和 DR5 基因轉染細胞可以使細胞發(fā)生快速的凋亡變化，而轉染沒有死亡結構域的 DR4 和 DR5 基因則不能引起這種變化。 DR5 前體長 411aa，由信號肽 (51aa)、胞膜外區(qū)(132aa)、跨膜區(qū) (23aa)和胞漿區(qū) (205aa)組成，胞膜外區(qū)也有 2 個 CRD，胞漿區(qū)有約 70aa 的死亡結構域，在 CRD 和死亡結構域與 DR4 分別有 66%和 64%的同源性。 1997 年 TRAIL 的三種受體相繼被發(fā)現，即 DR DR5 和 DcR1/TRID。 TRAIL 基因轉染可以在多種淋巴樣和非淋巴樣細胞系如 EBV 轉化的細胞系 9D、宮頸癌細胞系 HeLa、組織淋巴瘤細胞系 U93肺癌細胞系 A54宮頸癌細胞系 ME180 中引起與 Fas 和 TNFRI 無關的細胞凋亡，而且腫瘤細胞系比正常細胞對 TRAIL 要敏感得多。 TRAIL胞膜外區(qū)有蛋白酶作用位點，可以被從膜上剪切下來，形成可溶性分子。 TRAIL 長 281aa，分子量 ，為 II 型跨膜蛋白，由胞漿區(qū) (14aa)、跨膜區(qū) (26aa)和胞膜 外區(qū) (241aa)組成，胞膜外區(qū)有一個 N糖基化位點。 DR3 也可以活化 NFk B，這個作用可以 被抑制性的 RIP 和 TRAF2 所阻斷，但不被抑制性 FADD 阻斷。 DR3 全長基因轉染小鼠 3T3 和 292 細胞可以引起細胞凋亡，而轉染可溶性 DR3 基因則不能引起凋亡，但只轉染胞漿區(qū)也可以引起凋亡，說明胞漿區(qū)已足以觸發(fā)細胞凋亡程序。 DR3 基因位于 。 DR3 與 TNFRI 的同源性有 28%，在死亡結構 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 第 26 頁 共 68 頁 域的同源性則高達 45%，與 Fas 的死亡結構域的同源性為 23%。DR3 全長 417aa，約 54kD，胞膜外區(qū)有 199aa，包含 4 個 CRD，有兩個 N糖基化位點。 TNFRI、 TNFRII 和 LTb R 均參與淋巴器官的發(fā)育，基因敲除實驗證明，這些受體或其配體表達 缺失的小鼠出現不同程度的淋巴器官發(fā)育障礙，表現為脾臟初級淋巴濾泡、次級淋巴濾泡、濾泡樹突狀細胞發(fā)育受阻，受到抗原刺激后不能形成生發(fā)中心，外周淋巴結缺失或發(fā)育不良。 TNFRII主要傳遞細胞增殖信號，刺激細胞增殖和 NFk B 的活化，但在活化誘導的細胞凋亡中有一定的作用。 3. TNFRI、 TNFRII 和 LTb R 的生物學功能 TNFRI 與配體 TNFa 和 TNFb 結合后，主要介導凋亡信號，引起細胞凋亡，在抗腫瘤和抗病毒感染中發(fā)揮著重要的作用，同時也參與自身免疫性疾病和敗血癥中對自身組織細胞的損傷。由于異源三聚體組成 比例的不同，形成了兩種淋巴毒素，即 LTa 1b 2和 LTa 2b 1，前者是主要形式，后者為次要形式。 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 第 24 頁 共 68 頁 (3) LTb 的結構和功能： LTb 是分子量約 33kD的 II 型跨膜蛋白，全長 244aa 主要表達于 NK、 LAK及活化 T、 B 細胞表面。由于在胚胎期中沒有分泌型 TNFa 的產生，所以膜相關 TNFa 可能發(fā)揮著主要的作用。膜相關 TNFa 與受體結合后可以刺激細胞因子的產生，誘導細胞增殖和 凋亡。 (2)膜相關的 TNFa ： TNFa 也可以 26kDa 的膜結合形式發(fā)揮活性。 X線結晶衍射證明， TNFa 和 TNFb 同源三聚體的結構很相似，都是由三個單體通過內面對側面 (facetoedge)的形式堆積形成錐狀結構，尖頭朝下與受體三聚體結合。小鼠 TNFb 前體為 202aa，切割成熟后為 169aa，與人 TNFb 也有 79%同源。 TNFa 的生物學作用沒有種屬特異性。在金屬蛋白酶的作用下，TNFa 從連接序列 C 端切割，釋放出 成熟 TNFa ，其中 Lys11 是酶切割的關鍵殘基。分子內有一個二硫鍵 (Cys69Cys101)，對維持其空間結構有意義。 2. TNFa 、 TNFb 和 LTb 的分子結構 (1) TNFa 、 TNFb 分子的結構： TNFa 和 TNFb 都可以分別與 TNFRI 或 TNFRII 結合，并且與這兩型受體的結合基本上沒有選擇性。 LTb R 的胞漿沒有蛋 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 第 23 頁 共 68 頁 白激酶作用位點，但可以結合絲氨酸 /蘇氨酸蛋白酶，通過這些激酶傳導信號。 LTb R胞膜外區(qū)有 4 個 CRD，胞漿區(qū)較長，但與 TNFR 超家族其它成員沒有明顯同源性。金屬蛋白酶和絲氨酸蛋白酶都可能參與了可溶性受體的產生。由于這些可溶性的 TNFR 可與 TNF 結合，所以又被稱為 TNF 結合蛋白 (TNFBPI 和 TNFBPII)。 TNFRI 和 TNFRII 分布十分廣泛，幾乎存在于所有有核細胞表面。 TNFRI 與 TNFRII 在胞膜外區(qū)有 28%的同源性，在胞漿區(qū)沒有同源性。在靠近跨膜區(qū)的連接區(qū)還有一個富含絲 /蘇 /脯氨酸的 STP 區(qū)，是潛在的 O糖基化位點?？缒^(qū)有 21aa，胞漿區(qū)較長，有 223aa，有 3 個蛋白激酶 C(PKC)作用位點，1 個蛋白酪氨酸激酶 (PTK)的作用位點。 (二 )TNFRI、 TNFRII、 LTb R 與 TNFa 、 TNFb 、LTb 1. TNFRI、 TNFRII 和 LTb R (1)TNFRI 和 TNFRII 分子的結構和分布：腫瘤壞死因子受體 I(TNFRI)，又稱為 TNFR5 P5 P60、TNFRb ， CD 編號為 CD120a，是 5560kDI 型跨膜糖蛋白，前體長 455aa，切除 29aa 的信號肽后，成熟膜蛋白長 426aa。 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權歸原作者所有 ) 第 22 頁 共 68 頁 另一方面，當 Fas 功能過度增強時，也可以引起疾病。三位患者都是兒童，均出現淋巴結病和脾腫大，幼年發(fā)生自身免疫癥狀。 無論是 lpr 還是 gld，其結果都是使 Fas 與 FasL不能結合，或不能轉導凋亡信號，也就使外周 T 細胞和 B 細胞不能發(fā)生細胞凋亡，這樣，大量的淋巴細胞可能進入并聚集在淋巴結和脾臟，產生了淋巴結病和脾腫大；而眾多自反應性 CD4+T 細胞輔助自反應性B 細胞產生大量自身抗體，形成了致命的免疫復合物性腎炎和關節(jié)炎。 在另一種基因突變 lprcg(plements gld)小鼠， Fas 基因的長度和表達水平是正常的，但這個 mRNA 在胞漿區(qū)有一個 T→ A 的點突變，使死亡結構域的 225 位異亮氨酸突變成了天門冬酰胺， Fas 失去了轉導信號的功能，這種小鼠也表現出與 lpr 小鼠相似的癥狀。這個 ETn在長末端重復序列 (LTR)中帶有一個多聚腺苷酸信號 (AATAAA)，引起 Fas 基因的異常剪接和提前終止。 1991 年， Allen 等通過一系列骨髓移植實驗，證明 lpr 和 gld 是編碼一對互為配體 /受體的蛋白的基因的突變引起的。 lpr 和 gld小鼠明顯的特征是出現大量自身反應性 CD4+T 細胞，能輔助 B 細胞產生抗體，而不出現 AICD。 lpr 和 gld小鼠分別出現淋巴結病和脾腫大，產 生大量 IgG 和 IgM，其中包括抗 DNA 抗體和風濕因子。在 lpr 和 gld 小鼠中，由于 Fas/FasL 機制受阻，使活化的B 細胞在體內堆積，產生大量的免疫球蛋白，其中也包括自身反應性抗體，這也是這些小鼠發(fā)生自身免疫性疾病的主要原因。 B 細胞在其發(fā)育的一定階段也可能發(fā)生凋亡，在骨髓發(fā)育中，那些對自身抗原表現強反應的細胞通過一些不依賴于 Fas 的機制被清除。研究認為，在幼年動物中可能還有其它機制參與活化 T 細胞的清除。 當 Fas 系統(tǒng)功能發(fā)生障礙時，活化的 T 細胞就會堆積在體內，引起自身免疫性疾病。相鄰的活化T 淋巴細胞的 Fas 和 FasL 相互作用可以彼此殺傷，活化 T 細胞表面 Fas/FasL 相互作用也可導致直接自殺。 Fas 是通過