【正文】 型 TNFa 的產(chǎn)生，所以膜相關(guān) TNFa 可能發(fā)揮著主要的作用。由于異源三聚體組成 比例的不同，形成了兩種淋巴毒素，即 LTa 1b 2和 LTa 2b 1，前者是主要形式，后者為次要形式。 TNFRII主要傳遞細(xì)胞增殖信號(hào)，刺激細(xì)胞增殖和 NFk B 的活化，但在活化誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中有一定的作用。DR3 全長 417aa，約 54kD，胞膜外區(qū)有 199aa，包含 4 個(gè) CRD，有兩個(gè) N糖基化位點(diǎn)。 DR3 基因位于 。 DR3 也可以活化 NFk B，這個(gè)作用可以 被抑制性的 RIP 和 TRAF2 所阻斷，但不被抑制性 FADD 阻斷。 TRAIL胞膜外區(qū)有蛋白酶作用位點(diǎn)，可以被從膜上剪切下來，形成可溶性分子。 1997 年 TRAIL 的三種受體相繼被發(fā)現(xiàn)，即 DR DR5 和 DcR1/TRID。 DR4 和 DR5 基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞可以使細(xì)胞發(fā)生快速的凋亡變化，而轉(zhuǎn)染沒有死亡結(jié)構(gòu)域的 DR4 和 DR5 基因則不能引起這種變化。胞膜外區(qū)也有 2 個(gè) CRD，與 DR4 和 DR5 分別有 69%和 52%的同源性。 DR DR5 和 DcR1 都可以與 TRAIL 結(jié)合，與 DR4 和 DR5 的結(jié)合可以引起細(xì)胞凋亡，而 DcR1 由于沒有胞漿部分，不能向胞漿中轉(zhuǎn)導(dǎo)凋亡信號(hào)，所以 DcR1 與 TRAIL 結(jié)合后，可以保護(hù)細(xì)胞不發(fā)生凋亡。胞膜 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 28 頁 共 68 頁 外區(qū)包含 4 個(gè) CRD，共有 22 個(gè)半胱氨酸。 CD40 的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要是通過調(diào)節(jié)非受體型酪氨酸蛋白激酶，如 Lyn、 Fyn、 Syk 等的活性，還可以活化 PI3K、磷酯酶 Cg 活化 Rel/NFk B 轉(zhuǎn)錄因子，誘導(dǎo) BclxL、 Cdk4 和 Cdk6 蛋白。不同的蛋白酶切可以形成不同長度的可溶性分子，比較常見的是 p31 和 p18 兩種形式。 CD3 單抗可以刺激 T細(xì)胞表達(dá) CD40L。 CD40L mAb 可以阻斷 T 細(xì)胞對(duì) B 細(xì)胞的活化作用。另外， CD40/CD40L相互作用還可以促進(jìn) B 細(xì)胞表達(dá) B7，使 B 細(xì)胞發(fā)揮抗原提呈作用。 CD40L 基因敲除的小鼠來源的活化 T 細(xì)胞也不能使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 IL1，這說明 CD40/CD40L 相互作用在活化 T 細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞的刺激過程中有一定的作用。 (3)CD40/CD40L 相互作用對(duì)其它細(xì)胞的影響： CD40/CD40L 相互作用可以刺激胸腺上皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及其它抗原提呈細(xì)胞表達(dá) B7，而參與胸腺中 T細(xì)胞的陰性選擇。此外，正常細(xì)胞如 CD45RO+的記憶性 T 細(xì)胞也有表達(dá)。每個(gè)同源區(qū)含有 3 個(gè)半胱氨基富集域，分別稱為 1A、2A、 3A、 1B、 2B 和 3B，其中 1B 和 3B 不完整，可能是進(jìn)化中被截短的。胞漿區(qū)還具有蛋白激酶活性，可以使組蛋白磷酸化，并有自我催化活性。小鼠 CD30L 長 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 。另外，胞漿區(qū)被酶切后還可以成為57kD 的具有蛋白激酶活性的胞漿成分?？缒^(qū)長 24 個(gè)氨基酸。 (2)CD30 分子的結(jié)構(gòu)： CD30 為 120kD 的單體，其前體長 595aa，切除 18 個(gè)氨基酸的信號(hào)肽后成為成熟蛋白。 (六 )CD30 與 CD30L (1)CD30 分子的分布： CD30 首先是在何杰金氏白血病的 Hodgkin(H)細(xì)胞和 ReedSternberg(RS)細(xì)胞表面用一株針對(duì)何杰金氏白細(xì)胞病細(xì)胞的單抗 Ki1發(fā)現(xiàn)的，并被作為該種白血病細(xì)胞的標(biāo)志，所以 CD30 也被稱為 Ki1。首先，當(dāng) APC 細(xì)胞接受外來抗原，并經(jīng)過加工將其提呈給天然 (na?ve)T 細(xì)胞時(shí)， T 細(xì)胞活化 并表達(dá) CD40L。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，正常情況下，活化的 CD4+T 細(xì)胞不需要輔助信號(hào)即可刺激巨噬細(xì)胞活化，發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的功能，并可分泌細(xì)胞因子，如 IL1a 、 IL1b 、IL12 等，其中有些細(xì)胞因子作為第二信號(hào)作用于 T細(xì)胞，促進(jìn) T 細(xì)胞的進(jìn)一步分化和增殖。后來證明這種病人 CD40L 基因發(fā)生了突變，使 B 細(xì)胞不能進(jìn)行正常的 Ig 類別轉(zhuǎn)換。研究發(fā)現(xiàn) CD40/CD40L 交聯(lián)可以調(diào)節(jié) B 細(xì)胞的活化、分化和 Ig 類別轉(zhuǎn)換，并可以促進(jìn)記憶性 B 細(xì)胞的產(chǎn)生，挽救凋亡的 B 細(xì)胞。 CD40L 有多種表達(dá)形式，在細(xì)胞膜表面可以形成同源三聚體，也可以形成以全長分子與另兩個(gè)截短體 p31和 p18 形成的異源三聚體存在，在胞漿內(nèi)則以 p18的同源三聚體存在。 CD40L 胞膜外區(qū)含有 4 個(gè)半胱氨酸和一個(gè) N糖基化位點(diǎn)。 (2)CD40 分子的分布： CD40 表達(dá)于 B 細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞、活化的單核 /巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、造血祖細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和一些腫瘤細(xì)胞系，如肝癌細(xì)胞系 HepG黑色素瘤細(xì)胞系 HS294T 等。 TRAIL 及其受體 DcR1 的發(fā)現(xiàn) ，為今后腫瘤治療的發(fā)展開辟了一個(gè)新的方向。這種結(jié)構(gòu)也見于 SOS(Son of Sevenless)和內(nèi)皮白細(xì)胞粘附分子 1。 (2)DcR1： TRAIL 的第三種受體是 DcR1(decoy receptor 1)，也被稱為 TRID(TRAIL receptor without an intracellular domain)。 DR5 前體長 411aa，由信號(hào)肽 (51aa)、胞膜外區(qū)(132aa)、跨膜區(qū) (23aa)和胞漿區(qū) (205aa)組成，胞膜外區(qū)也有 2 個(gè) CRD，胞漿區(qū)有約 70aa 的死亡結(jié)構(gòu)域，在 CRD 和死亡結(jié)構(gòu)域與 DR4 分別有 66%和 64%的同源性。 TRAIL 基因轉(zhuǎn)染可以在多種淋巴樣和非淋巴樣細(xì)胞系如 EBV 轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系 9D、宮頸癌細(xì)胞系 HeLa、組織淋巴瘤細(xì)胞系 U93肺癌細(xì)胞系 A54宮頸癌細(xì)胞系 ME180 中引起與 Fas 和 TNFRI 無關(guān)的細(xì)胞凋亡，而且腫瘤細(xì)胞系比正常細(xì)胞對(duì) TRAIL 要敏感得多。 TRAIL 長 281aa，分子量 ，為 II 型跨膜蛋白，由胞漿區(qū) (14aa)、跨膜區(qū) (26aa)和胞膜 外區(qū) (241aa)組成，胞膜外區(qū)有一個(gè) N糖基化位點(diǎn)。 DR3 全長基因轉(zhuǎn)染小鼠 3T3 和 292 細(xì)胞可以引起細(xì)胞凋亡，而轉(zhuǎn)染可溶性 DR3 基因則不能引起凋亡，但只轉(zhuǎn)染胞漿區(qū)也可以引起凋亡，說明胞漿區(qū)已足以觸發(fā)細(xì)胞凋亡程序。 DR3 與 TNFRI 的同源性有 28%，在死亡結(jié)構(gòu) 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 26 頁 共 68 頁 域的同源性則高達(dá) 45%，與 Fas 的死亡結(jié)構(gòu)域的同源性為 23%。 TNFRI、 TNFRII 和 LTb R 均參與淋巴器官的發(fā)育，基因敲除實(shí)驗(yàn)證明，這些受體或其配體表達(dá) 缺失的小鼠出現(xiàn)不同程度的淋巴器官發(fā)育障礙，表現(xiàn)為脾臟初級(jí)淋巴濾泡、次級(jí)淋巴濾泡、濾泡樹突狀細(xì)胞發(fā)育受阻，受到抗原刺激后不能形成生發(fā)中心，外周淋巴結(jié)缺失或發(fā)育不良。 3. TNFRI、 TNFRII 和 LTb R 的生物學(xué)功能 TNFRI 與配體 TNFa 和 TNFb 結(jié)合后，主要介導(dǎo)凋亡信號(hào)，引起細(xì)胞凋亡，在抗腫瘤和抗病毒感染中發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)也參與自身免疫性疾病和敗血癥中對(duì)自身組織細(xì)胞的損傷。 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 24 頁 共 68 頁 (3) LTb 的結(jié)構(gòu)和功能： LTb 是分子量約 33kD的 II 型跨膜蛋白，全長 244aa 主要表達(dá)于 NK、 LAK及活化 T、 B 細(xì)胞表面。膜相關(guān) TNFa 與受體結(jié)合后可以刺激細(xì)胞因子的產(chǎn)生，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和 凋亡。 X線結(jié)晶衍射證明， TNFa 和 TNFb 同源三聚體的結(jié)構(gòu)很相似，都是由三個(gè)單體通過內(nèi)面對(duì)側(cè)面 (facetoedge)的形式堆積形成錐狀結(jié)構(gòu)，尖頭朝下與受體三聚體結(jié)合。 TNFa 的生物學(xué)作用沒有種屬特異性。分子內(nèi)有一個(gè)二硫鍵 (Cys69Cys101)，對(duì)維持其空間結(jié)構(gòu)有意義。 LTb R 的胞漿沒有蛋 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 23 頁 共 68 頁 白激酶作用位點(diǎn)，但可以結(jié)合絲氨酸 /蘇氨酸蛋白酶，通過這些激酶傳導(dǎo)信號(hào)。金屬蛋白酶和絲氨酸蛋白酶都可能參與了可溶性受體的產(chǎn)生。 TNFRI 和 TNFRII 分布十分廣泛，幾乎存在于所有有核細(xì)胞表面。在靠近跨膜區(qū)的連接區(qū)還有一個(gè)富含絲 /蘇 /脯氨酸的 STP 區(qū)，是潛在的 O糖基化位點(diǎn)。 (二 )TNFRI、 TNFRII、 LTb R 與 TNFa 、 TNFb 、LTb 1. TNFRI、 TNFRII 和 LTb R (1)TNFRI 和 TNFRII 分子的結(jié)構(gòu)和分布：腫瘤壞死因子受體 I(TNFRI)，又稱為 TNFR5 P5 P60、TNFRb ， CD 編號(hào)為 CD120a，是 5560kDI 型跨膜糖蛋白，前體長 455aa，切除 29aa 的信號(hào)肽后，成熟膜蛋白長 426aa。三位患者都是兒童，均出現(xiàn)淋巴結(jié)病和脾腫大，幼年發(fā)生自身免疫癥狀。 在另一種基因突變 lprcg(plements gld)小鼠， Fas 基因的長度和表達(dá)水平是正常的，但這個(gè) mRNA 在胞漿區(qū)有一個(gè) T→ A 的點(diǎn)突變，使死亡結(jié)構(gòu)域的 225 位異亮氨酸突變成了天門冬酰胺， Fas 失去了轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的功能，這種小鼠也表現(xiàn)出與 lpr 小鼠相似的癥狀。 1991 年， Allen 等通過一系列骨髓移植實(shí)驗(yàn)，證明 lpr 和 gld 是編碼一對(duì)互為配體 /受體的蛋白的基因的突變引起的。 lpr 和 gld小鼠分別出現(xiàn)淋巴結(jié)病和脾腫大，產(chǎn) 生大量 IgG 和 IgM，其中包括抗 DNA 抗體和風(fēng)濕因子。 B 細(xì)胞在其發(fā)育的一定階段也可能發(fā)生凋亡，在骨髓發(fā)育中，那些對(duì)自身抗原表現(xiàn)強(qiáng)反應(yīng)的細(xì)胞通過一些不依賴于 Fas 的機(jī)制被清除。 當(dāng) Fas 系統(tǒng)功能發(fā)生障礙時(shí)，活化的 T 細(xì)胞就會(huì)堆積在體內(nèi)，引起自身免疫性疾病。 Fas 是通過活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡 (activation induced cell death, AICD)作用參與外周克隆剔除和活化T 細(xì)胞的清除的。另外，當(dāng)活化 T細(xì)胞與外來抗原反應(yīng)后，機(jī)體也存在著清除機(jī) 制殺傷這些細(xì)胞，以免大量活化的 T 細(xì)胞在外周堆積，影響免疫系統(tǒng)的功能的穩(wěn)定和平衡。 CD4+的 TH1和 TH2細(xì)胞也可以通 過 Fas/FasL機(jī)制殺傷細(xì)胞，一般來說， TH1 細(xì)胞的殺傷活性要高于TH2 細(xì)胞。但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在沒有 Ca2+存在的情況下，活化的 CTL 細(xì)胞系 PC60d10S 仍然可以殺傷靶細(xì)胞。佛波酯 (PMA)和離子霉素可以促進(jìn) FasL 表達(dá)，環(huán)孢素 A 可以抑制 FasL 的表達(dá)。 FasL 在胞膜外區(qū)有 4 個(gè) N糖基化位點(diǎn)，經(jīng)過糖基化的 FasL的分子量為 3643kD。 Fas 表達(dá)比較廣泛，小鼠的胸腺、心臟、肝、肺、腎和卵巢等都有表達(dá)，在胸腺中除 CD4CD8的雙陰性細(xì)胞外，其它所有細(xì)胞都表達(dá)Fas。 在 Fas 的 C 端有 15aa 對(duì)死亡結(jié)構(gòu)域的作用可能有抑制功能，將這 15aa 突變掉之后， Fas 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用得以增強(qiáng)。胞漿區(qū)長 145aa，其中有 24 個(gè)堿性氨基酸和 19 個(gè)酸性氨基酸?；蚩寺∽C明， Fas 和 Apo1 是同一種蛋白。在人類獲得性免疫缺陷綜合征 (AIDS)時(shí)，在 HIV 感染的 CD4+T 細(xì)胞表面有高表達(dá)的 Fas， 這些 T細(xì)胞易于被 CTL 細(xì)胞所殺傷，這是 AIDS 導(dǎo)致 T 細(xì)胞功能低下的原因之一。 (3)人類類似 lpr 和 gld 疾?。涸谌祟?，也有類似于 lpr 和 gld 小鼠的癥狀的報(bào)道。在 lpr小鼠肝臟和胸腺只有非常少的 Fas mRNA，而且往往成熟 mRNA 中只有外顯子 1 和 2，不能編碼正常 Fas蛋白。 (1)小鼠 lpr：雖然 lpr 與 gld 不是等位基因的突變，但它們的表現(xiàn)卻極為相似。 中國最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 16 頁 共 68 頁 4. Fas/FasL 異常所引起的疾病 小鼠天然突變性疾病 lpr(lymphoproliferation)和gld(generalized lymphorpoliferative disease)的突變分別發(fā)生于小鼠 19 號(hào)和 1 號(hào)常染色體。這種機(jī)制可能隨著動(dòng)物的成年而消失或減弱，所以在成年動(dòng)物表現(xiàn)出比較明顯的活化淋巴細(xì)胞的堆積。另外， FasL 還可以從細(xì)胞膜