【正文】 lymphorpoliferative disease)的突變分別發(fā)生于小鼠 19 號(hào)和 1 號(hào)常染色體。動(dòng)物在出生 中國(guó)最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 21 頁 共 68 頁 5 個(gè)月后出現(xiàn)免疫復(fù)合物型腎炎和關(guān)節(jié)炎。 (1)小鼠 lpr：雖然 lpr 與 gld 不是等位基因的突變，但它們的表現(xiàn)卻極為相似。對(duì) lpr 小鼠 Fas 基因的分析發(fā)現(xiàn)，一個(gè)長(zhǎng)約 的反轉(zhuǎn)座子 ETn 插入到 Fas 基因的第二個(gè)內(nèi)含子。在 lpr小鼠肝臟和胸腺只有非常少的 Fas mRNA，而且往往成熟 mRNA 中只有外顯子 1 和 2，不能編碼正常 Fas蛋白。 (2)小鼠 gld：研究也證明， gld 小鼠的病變發(fā)生在FasL 基因，其 C 端編碼區(qū)有一個(gè)點(diǎn)突變，使胞膜外區(qū)與 Fas 結(jié)合部位的一個(gè)苯丙氨酸變成了亮氨酸，使之不能與 Fas 結(jié)合，從而失去了功能。 (3)人類類似 lpr 和 gld疾?。涸谌祟?，也有類似于 lpr 和 gld 小鼠的癥狀的報(bào)道。研究證明，他們的 Fas 基因不同程度地發(fā)生了基因缺失，不能表達(dá)全長(zhǎng)的 Fas 蛋白。在人類獲得性免疫缺陷綜合征 (AIDS)時(shí)，在 HIV 感染的 CD4+T 細(xì)胞表面有高表達(dá)的 Fas，這些 T細(xì)胞易于被 CTL 細(xì)胞所殺傷，這是 AIDS 導(dǎo)致 T 細(xì)胞功能低下的原因之一。胞膜外區(qū) (182aa)有 4 個(gè) CRD，其中有 3 個(gè) N糖基化位點(diǎn)。 TNFRII 又稱為 TNFR7 P7 P80、 TNFRa ， CD 編號(hào)為 CD120b，為 7580kD 的 I型跨膜糖蛋白，前體長(zhǎng) 461aa，N 端為 22aa 的信號(hào)肽，成熟蛋白長(zhǎng) 439aa，胞膜外區(qū)為 235aa，也有 4 個(gè) CRD，有 2 個(gè) N糖基化位點(diǎn)?？缒^(qū)有 30aa，胞漿區(qū)長(zhǎng) 174aa，有 1 個(gè) PKC 作用位點(diǎn)。 TNFRI 在胞漿區(qū)有一個(gè)約 80aa 的死亡結(jié)構(gòu)域，TNFRII 沒有同樣的結(jié)構(gòu)域，但其 羧基端的 78 個(gè)氨基酸殘基可以結(jié)合 TRAF2 等胞漿信號(hào)蛋白，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。它們都可以從細(xì)胞表面脫落形成可溶性 TNF 受體，即 sTNFRI 與 sTNFRII。一般認(rèn)為，可溶性 TNFR 可以結(jié)合 TNF，從而局限 TNF 的活性，也可以作為 TNF 的拮抗劑。 (2) LTb R 的結(jié)構(gòu)和分布 ： LTb R 又稱為 TNFRIII 和 TNFRrp，表達(dá)在初級(jí)和次級(jí)淋巴樣組織，以及肺、腎等內(nèi)臟器官，外周血細(xì)胞沒有表達(dá)。 LTb R 的基因與 CD27和 TNFRI 相鄰，位于 12p13。 LTb R 的胞漿區(qū)還與 TRAF3和 TRAF5有聯(lián)系，并且 TRAF5與 NFk B活化有關(guān)。 TNFa 又稱惡液素 (cachectin)，成熟的人 TNFa 有 157aa，約 17kD，沒有糖基化。 TNFa 前體為 233aa 的 II 型跨膜蛋白，包括胞漿區(qū) (30aa)、跨膜區(qū) (26aa)，以及一段 20aa 的連接序列。小鼠 TNFa 前體有 235aa，成熟蛋白為 156aa，與人 TNFa 有 79%同源，分子內(nèi)部也有一對(duì)二硫鍵。 TNFb 又稱淋巴毒素 a (Lmyphotoxin a , LTa )，前體為 205aa 的 II 型跨膜蛋白，成熟蛋白長(zhǎng) 171aa，分子量 25kD，也沒有糖基化。 TNFa 和 TNFb 的活性形式都是同源三聚體。而受體三聚體的三個(gè)單體的胞膜外部分伸展開來，沿配體三聚體盤繞上行，象手一樣將配體三聚體“抓”在當(dāng)中。膜相關(guān)的 TNFa 可以分別與 TNFRI 和 TNFRII 結(jié)合，但與 TNFRII 的關(guān)系更密切。在胚胎期，膜相關(guān) TNFa 可以抑制干細(xì)胞增殖，并促進(jìn)其分化。另外，膜相關(guān) TNFa 還參與 CD4+T 細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞的活化和 B 細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的過程。 LTb 不能單獨(dú)存在，一般是以膜結(jié)合的形式與可溶性形式的 LTa 結(jié)合成異源三聚體，并將后者固定在細(xì)胞膜上。 LTa 2b 1 可以與 TNFRII 結(jié)合，可能也與 LTb R 結(jié)合，而 LTa 1b 2 只能結(jié)合 LTb R。 TNFRI 也可以介導(dǎo)活化信號(hào)和增殖信號(hào)，誘導(dǎo)一氧化氮合成酶和 IL8的活性，活化核轉(zhuǎn)錄因子 NFk B 和 AP1。對(duì)LTb R 的功能研究尚不深入，但實(shí)驗(yàn)證明抗 LTb R抗體可以在人腎上腺瘤細(xì)胞系 HT29 和人肺成纖維細(xì)胞瘤細(xì)胞系 WI38 中誘導(dǎo) NFk B 的活化，在另外一些腎上腺瘤細(xì)胞系中則可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這說明LTb R 既可介導(dǎo)細(xì)胞活化信號(hào)，又可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡信號(hào)。 表 3. TNFa 、 TNFb 、 LTb 及其受體基因敲除小鼠的表型 初級(jí)淋巴濾泡 次級(jí)淋巴濾泡 濾泡樹突狀細(xì)胞 淋巴結(jié) 派伊爾氏結(jié) 中國(guó)最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 25 頁 共 68 頁 TNFa / 缺失 缺失 缺失 正常 存在 TNFb / 缺失 缺失 缺失 缺失 缺失 LTb / 缺失 缺失 缺失 部分缺失 * 缺失 TNFRI/ 缺失 缺失 缺失 正常 存在 TNFRII/ 正常 正常 正常 正常 正常 * 腸系膜淋結(jié)和頸淋巴結(jié)存在 (三 )DR3 1996 年幾個(gè)研究組分別獨(dú)立地發(fā)現(xiàn)了死亡受體 3(DR3)，分別命名為 Wsl Apo TRAMP 和 LARD?？缒^(qū) 25aa，胞漿區(qū) 193aa，死亡結(jié)構(gòu)域位于胞漿區(qū)羧基端 (325~414)。 DR3 表達(dá)于富含淋巴組織的器官，如脾臟、胸腺、小腸和外周血淋巴細(xì)胞等。除膜型 DR3 外，不同的拚接體 mRNA 還可編碼兩種不同的可溶性 DR3，分別為 218aa 和 253aa。 DR3 與 TNFRI 的凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能是相同的，因?yàn)樗鼈兌伎梢员籆rmA、抑制性的 FADD 和 caspase8 阻斷。 (四 )DR DR DcR1 與 TRAIL/Apo2L 1996年 Pitti等從人胎盤 cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)了一種與 FasL(Apo1L)很相似 TNF 超家族成員，命名為 Apo2L，也稱為 TNF 相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體 (TNFrelated apoptosisinducing ligand, TRAIL)。與 TNF 超家族其它成員有同源性，其中與 FasL 同源性最高 (%)。 TRAIL 也可形成同源二 /三聚體。 2. TRAIL/Apo2L 的受體 由于 TRAIL 具有典型的 TNF 配體超家族的結(jié)構(gòu)，并且具有不依賴 TNFRI、 Fas 和 DR3 的致凋亡作用，所以它的受體很可能是一種新死亡受體。 中國(guó)最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 27 頁 共 68 頁 (1)DR4： DR4 又稱 Apo2，其前體長(zhǎng) 468aa，除去 23aa 的信號(hào)肽后，成熟蛋白胞膜外區(qū) (203aa)有 2個(gè) CRD，跨膜區(qū) 19aa，胞漿區(qū) (201aa)的死亡結(jié)構(gòu)域位于羧基端，與 TNFRI 相應(yīng)的結(jié)構(gòu)域有 30%的同源性。 DR4 和 DR5 分布比較廣泛，包括脾、肝、肺、胸腺和外周血白細(xì)胞、活化 T 細(xì)胞以及一些腫瘤細(xì)胞系。與 TNFRI、 Fas 和 DR3 相似， DR4 引起的凋亡可以被 CrmA 和 zVADfmk所阻斷，所以它們可能共用凋 亡途徑。 DcR1 前體長(zhǎng) 259aa，它的結(jié)構(gòu)比較特殊，僅由信號(hào)肽 (23aa)、胞膜外區(qū) (217aa)和跨膜區(qū)組成 (19aa)，缺少胞漿區(qū)。在 CRD 區(qū)與跨膜區(qū)之間，有一段重復(fù)序列，每個(gè)重復(fù)單元有 13 個(gè)氨基酸殘基，共重復(fù)了 5 次。 DcR1 只表達(dá)于正常組織，腫瘤細(xì)胞不表達(dá)。由于 DcR1 只表達(dá)于正常組織，在腫瘤細(xì)胞系和轉(zhuǎn)化細(xì)胞不表達(dá)，所以在 TRAIL 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中正常細(xì)胞不被損傷，這是其有別于 TNF/TNFRI 和 Fas/FasL 的作用特點(diǎn)。 (五 )CD40 與 CD40L (1)CD40 分子的結(jié)構(gòu)： CD40(Bp50)是與 T 細(xì)胞和B 細(xì)胞功能有關(guān)的一種表面抗原，其前體含有 297aa，為 I型跨膜糖蛋白，由 N 端信號(hào)肽 (20aa)、胞膜外區(qū)(193aa)、跨膜區(qū) (22aa)和胞漿區(qū) (62aa)組成。在鉸鏈區(qū)的 71aa 中，有 9 個(gè)絲氨酸和 7 個(gè)蘇氨酸，是潛在的O糖基化位點(diǎn)，另外還有 2 個(gè)潛在的 N糖基化位點(diǎn)，所以 CD40 的糖基化程度較高，根據(jù)氨基酸序列推算的 分子量為 28kD，但糖基化后的分子量是 4050kD。PMA、抗 IgM抗體、抗 CD20 抗體以及 IFNg 均可刺激 B 細(xì)胞表達(dá) CD40， IFNg 還可刺激腫瘤細(xì)胞表達(dá)CD40。 中國(guó)最大的管理資料庫下載 (1)CD40L 分子的結(jié)構(gòu)： CD40L 也稱 gp3腫瘤壞死因子相關(guān)激活蛋白 (TNF associated activation protein, TRAP)、 T 細(xì)胞 B 細(xì)胞活化分子 (T cellB cellactivating molecule, TBAM)，為 33kD 的 II 型跨膜糖蛋白，共有 266aa，其中胞膜外區(qū) 214 個(gè)氨基酸，與 TNF 在氨基酸水平具有較 高的同源性?？拷缒^(qū)的兩個(gè)精氨酸是可能的蛋白酶作用位點(diǎn)，所以 CD40L可以被從膜上剪切下來形成可溶性的分子?？缒^(qū)有 24 個(gè)氨基酸殘基，胞漿區(qū)很短，只有 22 個(gè)氨基酸殘基。 (2)CD40L 分子的分布： CD40L 主要表達(dá)于活化的CD4+T 淋巴細(xì)胞，部分活化的 CD8+T 細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、 NK 細(xì)胞也有表達(dá)，胸腺腫瘤細(xì) 中國(guó)最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 29 頁 共 68 頁 胞系 EL4 也表達(dá) CD40L。 (1)TB 細(xì)胞相互作用：由于 CD40 最早是在 B 細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的，所以早期的研究主要集中在 CD40 對(duì)B 細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。穩(wěn)定表達(dá)的 CD40L不需要共刺激信 號(hào)即可促進(jìn) B細(xì)胞增殖，在 IL IL10 存在下可以促進(jìn) B 細(xì)胞產(chǎn)生 IgM、 IgG 和 IgA，在 IL4 存在時(shí)可促進(jìn) B 細(xì)胞產(chǎn)生 IgE。在一種罕見的性聯(lián)免疫缺陷疾病 HIGM1 中，患者 T、 B細(xì)胞數(shù)量均正常， B細(xì)胞可以表達(dá)和分泌 IgM和 IgD，但不能正常分泌 IgG、 IgA 和 IgE。在 CD40L 基因敲除 (gene knockout)的小鼠中的發(fā)生類似的變化，通過轉(zhuǎn)入的穩(wěn)定表達(dá)的 CD40L 可逆轉(zhuǎn)異常的變化。 (2)CD4+TAPC 相互作用：隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn) CD40 不但可以表達(dá)在 B 細(xì)胞表面，而且還可以表達(dá)在大部分抗原提呈細(xì)胞 (APC)表面，如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞等，提示 CD40/CD40L對(duì) T 細(xì)胞的功能也可能具有調(diào)節(jié)作用。但在抗 CD40L mAb 存在時(shí)，活化的 CD4+T 不能使巨噬細(xì)胞活化。經(jīng)研究認(rèn)為， CD40/CD40L 主要是通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞等 APC 細(xì)胞表達(dá) B7 B72 等共刺激分子來發(fā)揮其作用的。高表達(dá)的 CD40L 與 APC 細(xì)胞表面的 CD40結(jié)合促進(jìn) APC細(xì)胞表達(dá) B71(CD80)、 B72(CD86)等共刺激分子，這些分子再與 T 細(xì)胞表面的配 中國(guó)最大的管理資料下載中心 (收集 \整理 . 部分版權(quán)歸原作者所有 ) 第 30 頁 共 68 頁 體 CD2 CTLA4 結(jié)合，形成對(duì) T 細(xì)胞刺激的第二信號(hào)，從而使 T 細(xì)胞進(jìn)一步活化。 CD40/CD40L 也可以促進(jìn)樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表達(dá) BCL2，挽救凋亡細(xì)胞。后來發(fā)現(xiàn)， CD30 不僅表達(dá)于何杰金氏白血病細(xì)胞，還可以表達(dá)于 HTLV1 和 HTLV2感染的 T 細(xì)胞和 EB 病毒轉(zhuǎn)染的 B 細(xì)胞。免疫組織化學(xué)研究表明， CD30 在正常淋巴組織中主要表 達(dá)于淋巴結(jié)和脾臟生發(fā)中心的邊緣，以及胸腺髓質(zhì)。胞膜外區(qū)長(zhǎng) 365 個(gè)氨基酸，其中有兩個(gè) 140 氨基酸的同源區(qū)，兩個(gè)同源區(qū)有 64%的同源性。胞膜外區(qū)含有兩個(gè) N糖基化位點(diǎn)，靠近跨膜區(qū)的鉸鏈區(qū)為富含絲 /蘇 /脯氨酸的 STP 區(qū)，是潛在的 O糖基化位點(diǎn)。胞漿區(qū)比較長(zhǎng) ，有 188aa，其中有眾多的絲 /蘇氨酸蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)。 CD30 主要以膜結(jié)合方式表達(dá)，經(jīng)蛋白酶切后成為 74kD 的可溶性分子。 (CD153) CD30L 屬 II 型跨膜糖蛋白，主要表達(dá)于活化 T 細(xì)胞和單核 /巨噬細(xì)胞，分布