【正文】 ?4．結(jié)構(gòu)測(cè)定 對(duì)未知成分的結(jié)構(gòu)測(cè)定，需綜合運(yùn)用 UV、 IR、 MS、 NMR譜和 X射線(xiàn)衍射等方法來(lái)推斷。此外，固體物質(zhì)還可通過(guò)測(cè)定其熔點(diǎn)，液體物質(zhì)通過(guò)測(cè)定沸點(diǎn)、沸程等判斷其純度。若無(wú)對(duì)照品或查不到文獻(xiàn)資料，一時(shí)不能確定為已知物還是未知物，需進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定。實(shí)際工作中，要盡可能查閱有關(guān)文獻(xiàn)，因地制宜加以選用。在經(jīng)提取分離后，成分的活性可能減弱或消失。乙醇不溶物中還含有少量番瀉苷 B和 C，均具瀉下作用，但由于含量少，不是主要成分。研究者通過(guò)對(duì)大白鼠大黃粉末的喂食實(shí)驗(yàn)，確立了瀉下作用是提取、分離、篩選大黃中瀉下成分的藥理指標(biāo)，并進(jìn)一步篩選，得到番瀉苷 A為瀉下作用的主要成分 。此種方法篩選工作復(fù)雜，需要較好的設(shè)備和儀器。 74 75 三、活性成分篩選 （一）活性成分篩選的兩種思路 對(duì)中藥進(jìn)行有效成分探索時(shí)，進(jìn)行活性成分篩選應(yīng)以能反映中藥治療作用的藥理活性指標(biāo)（即動(dòng)物試驗(yàn)）作為指針。 ?（ 4）預(yù)試驗(yàn)結(jié)果一般只能提供試樣中可能含有哪些類(lèi)型的化學(xué)成分，然后設(shè)計(jì)提取分離的工藝方法，通過(guò)對(duì)提取分離得到的成分進(jìn)一步檢識(shí)，才能確定該藥材中含有哪些成分。 71 ?（ 1）本實(shí)驗(yàn)所用的供試品，可根據(jù)具體情況，靈活選擇，但應(yīng)包括試驗(yàn)材料項(xiàng)中所列出的成分，提倡盡可能使用有代表性的化學(xué)對(duì)照品。 69 （ 2）揮發(fā)油、油脂類(lèi) ?1）油斑試驗(yàn)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，室溫下?lián)]去溶劑后，濾紙片上如留有油斑，表明可能含有油脂或揮發(fā)油，若稍經(jīng)加熱，油斑消失或減少，表明可能含有揮發(fā)油，如油斑無(wú)變化，表明可能含有油脂。本試驗(yàn)也可在試管中進(jìn)行。 66 （ 2）香豆素、內(nèi)酯類(lèi) ?1）異羥肟酸鐵反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 7％鹽酸羥胺醇溶液及 10％氫氧化鈉溶液各2～ 3滴，置沸水浴上加熱數(shù)分鐘至反應(yīng)完全，放冷，加 1％鹽酸調(diào) pH3～ 4，再加 1～ 2滴 1％三氯化鐵試劑，如溶液為紅色或紫色，表明可能含有香豆素或內(nèi)酯類(lèi)。 ?2）間二硝基苯反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加數(shù)滴間二硝基苯試劑，搖勻后再加數(shù)滴 20％氫氧化鈉，如產(chǎn)生紫紅色，表明可能含有強(qiáng)心苷類(lèi)。 ? 2）碘化汞鉀反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 2～ 3滴碘化汞鉀試劑，如產(chǎn)生白色或類(lèi)白色沉淀，表明可能含有生物堿。 ? 2）三氯醋酸反應(yīng)：取供試液滴于濾紙片上，滴三氯醋酸試劑，加熱至 60℃ ，產(chǎn)生紅色，漸變?yōu)樽仙砻骱摅w類(lèi)成分。 61 （ 4）蒽醌類(lèi)化合物 ?1）堿液反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 10％苛性堿試劑呈紅色，如加酸使成酸性，則紅色褪去，表明可能含有蒽醌類(lèi)。醋酸乙酯層再用蒸餾水洗 1～ 2次，至水洗液呈中性，棄去水洗液，置于水浴上蒸發(fā)除去醋酸乙酯，殘留物用 15ml乙醇溶解，供丙項(xiàng)檢識(shí)。 59 取 10g中藥粗粉，加 100ml乙醇，沸水浴中回流提取 1小時(shí)，濾過(guò)。如顯色不明顯，可再?lài)婌F氨水，然后暴露于鹽酸蒸氣中，背景逐漸由藍(lán)色變成黃色，而有機(jī)酸的斑點(diǎn)仍為藍(lán)色。 ?4）明膠 氯化鈉反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加入 1～ 2滴明膠 氯化鈉試劑，如產(chǎn)生白色混濁或沉淀，表明可能含有鞣質(zhì)。 ?2）三氯化鐵 鐵氰化鉀反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，干燥后，噴灑三氯化鐵 鐵氰化鉀試劑，如立即呈現(xiàn)藍(lán)色，表明可能含有鞣質(zhì)。 54 （ 2）氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)類(lèi) ? 1）茚三酮反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，噴霧茚三酮試劑后，吹熱風(fēng)數(shù)分鐘，如呈紫紅色或藍(lán)色，表明可能含氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)。沿管壁滴加 1ml濃硫酸，分成兩層。 51 （四）供試液中化學(xué)成分的檢識(shí) 各類(lèi)化學(xué)的檢識(shí)反應(yīng)一般在試管、濾紙片或薄層板上進(jìn)行。 48 （ 2） 乙醇提取液 49 （ 3）石油醚提取液：取藥材粉末 1g，加 10ml石油醚（沸程： 60～ 90℃ ），浸漬 24小時(shí)，濾過(guò)，濾液進(jìn)行萜類(lèi)、揮發(fā)油、甾體、油脂等親脂性成分檢查。一類(lèi)是單項(xiàng)預(yù)試驗(yàn)，即根據(jù)工作的需要有重點(diǎn)的檢查某一類(lèi)成分。 ? 4．反應(yīng)顏色判斷不準(zhǔn)確時(shí)，可同時(shí)作對(duì)照試驗(yàn)和空白試驗(yàn)。如檢查生物堿時(shí)，可利用生物堿溶于酸水而與香豆素、中性?xún)?nèi)酯分離，再用生物堿沉淀試劑檢出生物堿。 43 預(yù)試驗(yàn)往往只能提供初步線(xiàn)索，其準(zhǔn)確性受多種因素影響，主要表現(xiàn)在：共存成分相互干擾；提取分離方案不很完善；提取液中雜質(zhì)多，顏色深，影響定性反應(yīng)的觀察；定性檢出試劑不夠?qū)Ｒ?；成分含量低，與檢出試劑反應(yīng)不靈敏；成分在植物體中的存在狀態(tài)等。對(duì)預(yù)試驗(yàn)的要求是簡(jiǎn)便、快捷而正確。 “ 效 ” ，是指療效，通過(guò)二次開(kāi)發(fā)應(yīng)提高藥物的療效，起碼與原制劑達(dá)到等效，如果二次開(kāi)發(fā)，其他工作做得很好，但療效卻降低了，這樣的開(kāi)發(fā)也是不成功的開(kāi)發(fā)。 41 ? 3． 2． 3中成藥二次開(kāi)發(fā)如前所述，名優(yōu)中成藥的二次開(kāi)發(fā)是中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要組成部分。在開(kāi)發(fā)有效部位的新藥中，單味藥的有效部位是研發(fā)的基礎(chǔ)。由于中藥中的成分多數(shù)情況下存在著協(xié)同作用，單體化合物的活性往往不是很強(qiáng)，難以與化學(xué)藥相比，從近幾年申報(bào)的中藥一一類(lèi)新藥也可以看出這一點(diǎn)，所以開(kāi)發(fā)有效成分新藥必須慎重。 38 (2)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可行性：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可行性主要是在有效部位新藥研發(fā)中存在的問(wèn)題，因?yàn)橛行Р课恍滤幰髮?duì)各類(lèi)成分進(jìn)行含量測(cè)定，且所測(cè)各類(lèi)成分的含量之和必須大于 50％。 35 3． 1． 4 立足創(chuàng)新原則 作為創(chuàng)新藥物必須立足于 “ 新 ” 字，中藥創(chuàng)新藥物的創(chuàng)新可以從三方面實(shí)現(xiàn)：①新物質(zhì)，包括新化合物和新有效部位；②新藥用，一個(gè)已知化合物或已知提取物，發(fā)現(xiàn)其藥用價(jià)值，將其開(kāi)發(fā)成為新藥，也是非常有價(jià)值的，如砒霜，發(fā)現(xiàn)其可以治療白血病，曾引起國(guó)際上的轟動(dòng)；③名優(yōu)中成藥的二次開(kāi)發(fā)，對(duì)名優(yōu)中成藥進(jìn)行深入研究，闡明其有效部位，將其研制成為新的有效部位復(fù)方制劑，從而降低服用劑量、提高療效、建立有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)中成藥來(lái)說(shuō)，也是很好的創(chuàng)新。 34 3． 1． 3 市場(chǎng)需求 (經(jīng)濟(jì)效益 )原則市場(chǎng)需求即經(jīng)濟(jì)效益。 33 ? 3． 1． 2 醫(yī)療需要 (社會(huì)效益 )原則 醫(yī)療需要即社會(huì)效益。 32 ? 3 中藥創(chuàng)新藥物的研發(fā) ? 3． 1 中藥創(chuàng)新藥物選題的原則 ? 3． 1． 1 突出中醫(yī)藥特點(diǎn)、優(yōu)勢(shì)原則 “ 辯證施治，調(diào)節(jié)陰陽(yáng) ” 是中醫(yī)藥理論的精髓。另外，中藥復(fù)方的活性成分研究是發(fā)現(xiàn)具有臨床使用價(jià)值的中藥成分的組合或有效部位組合的最有效途徑。 30 2． 3． 5 中藥復(fù)方 中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床用藥的主要形式。 29 2． 3． 4 鮮活動(dòng)物的內(nèi)源性物質(zhì)動(dòng)物藥作為中藥使用有著悠久的歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》收載動(dòng)物藥 67種。因此，低等生物的活性成分研究也是新藥發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新領(lǐng)域。 28 2． 3． 3 低等生物和植物共生菌低等生物同樣存在著樣品采集和分類(lèi)鑒定的困難，因此對(duì)其活性成分研究也很少。我國(guó)有著豐富的喬木資源，特別是熱帶、亞熱帶地區(qū)的喬木種類(lèi)非常豐富，這些喬木大部分未進(jìn)行過(guò)活性成分的研究，為新藥發(fā)現(xiàn)提供了一個(gè)很大的空間。尋找發(fā)現(xiàn)創(chuàng)新藥物的新領(lǐng)域、新途徑是天然藥物學(xué)家們面臨的新課題。 25 ? 2． 3 中藥創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新領(lǐng)域、新途徑大部分傳統(tǒng)中藥是我們的祖先在尋找食物的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的，因此有 “ 醫(yī)食同源 ” 或 “ 藥食同源 ” 之說(shuō)。 23 目前國(guó)際上多數(shù)創(chuàng)新藥物都是通過(guò)這一途徑發(fā)現(xiàn)的，從國(guó)際上申請(qǐng)的專(zhuān)利也可以看出，一般一個(gè)活性化合物，其合成的衍生物都在數(shù)十個(gè)，甚至上百個(gè)。對(duì)于沒(méi)有活性的化合物，將其貯存在樣品庫(kù)中，供其他活性篩選。在此篩選過(guò)程中，有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)某一部位活性很強(qiáng)，但進(jìn)一步分離成單體化合物后活性沒(méi)有提高，甚至降低的現(xiàn)象，這可能是由于中藥的各成分之間存在著協(xié)同作用導(dǎo)致的。為了提高目標(biāo)的命中率，可根據(jù)文獻(xiàn)古籍調(diào)研，從民族、民間藥物、臨床名方、老藥和國(guó)外天然藥物中選擇篩選樣品，收集樣品，進(jìn)行基原鑒定，也可選擇天然產(chǎn)物進(jìn)行大規(guī)模篩選。因此，新藥的發(fā)現(xiàn)是中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的必需過(guò)程。按照現(xiàn)行《藥品注冊(cè)管理辦法》，即首次在我國(guó)上市的中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑 (一類(lèi)新藥 )、首次在我國(guó)上市的中藥、天然藥物中提取的有效部位及其制劑 (五類(lèi)新藥 )。因此，創(chuàng)新藥物的研發(fā)今后也必將成為我國(guó)藥品研發(fā)的主要方向。 15 (4)大部分新藥品種未產(chǎn)業(yè)化，少數(shù)產(chǎn)業(yè)化，