【正文】 2023/2/1 3:07:0503:07:0501 February 2023161。 01 二月 20233:07:05 上午 03:07:05二月 21161。 1知人者智，自知者明。 1越是沒(méi)有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 01 二月 20233:07:05 上午 03:07:05二月 21161。 03:07:0503:07:0503:07Monday, February 01, 2023161。 03:07:0503:07:0503:072/1/2023 3:07:05 AM161。 3:07:05 上午 3:07 上午 03:07:05二月 21161。 二月 213:07 上午 二月 2103:07February 01, 2023161。 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見(jiàn)青山。 1故人江海別，幾度隔山川。 雨中黃葉樹(shù)，燈下白頭人。 生物素： 賴氨酸生產(chǎn)菌大多是生物素缺陷型，限量的生物素有利于谷氨酸積累，大量的生物素抑制谷氨酸生成，增加天冬氨酸，提高賴氨酸產(chǎn)量。 賴氨酸的發(fā)酵控制216。 菌種： 谷氨酸棒桿菌的高絲氨酸缺陷型變異株，抗賴氨酸結(jié)構(gòu)類似物、抗蘇氨酸結(jié)構(gòu)類似物。 谷氨酸生產(chǎn)工藝161。216。 谷氨酸制造味精的工藝流程 味精 —— 谷氨酸單鈉，具有強(qiáng)鮮味，由谷氨酸用適量的堿中和得到，目前已經(jīng)是人們?nèi)粘Ｉ钪械某Ｓ门胝{(diào)用品，國(guó)內(nèi)消耗量很大。周期長(zhǎng)，占地面積大。 在長(zhǎng)菌體階段，通風(fēng)量過(guò)大，生物素缺乏，抑制菌體生長(zhǎng)。 谷氨酸脫氫酶最適 pH為 ，轉(zhuǎn)氨酶最適 pH 。接種量為 1％。 谷氨酸發(fā)酵控制 （ 1）生物素： 作為催化脂肪酸生物合成最初反應(yīng)的關(guān)鍵酶乙酰 CoA的輔酶，參與脂肪酸的生物合成，進(jìn)而影響磷酯的合成。 發(fā)酵后期： 菌體衰老，糖耗慢，殘?zhí)堑汀?措施： 采取流加尿素辦法及時(shí)供給菌體生長(zhǎng)必須的氮源及調(diào)節(jié) pH在 ；維持溫度 30 32℃ 谷氨酸生產(chǎn)工藝161。糖不利用。種子質(zhì)量要求：二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，無(wú)雜菌或噬菌體污染，菌體大小均一，呈單個(gè)或八字排列。 pH － 。生長(zhǎng)特點(diǎn)：適用于糖質(zhì)原料，需氧，以生物素為生長(zhǎng)因子。 也可以在發(fā)酵液中加入表面活性劑吐溫 60或添加青霉素。 淀粉的 酶法糖化 工藝 以大米或碎米為原料時(shí)采用大米浸泡磨漿，再調(diào)成 15?Bx， ，加細(xì)菌 α淀粉酶在 85 ℃ 下液化 30min，加糖化酶 60 ℃ 糖化 24h，過(guò)濾后可供配制培養(yǎng)基。中和： 冷卻至 80℃ ，燒堿中和至 （ 避免產(chǎn)生焦糖又保證過(guò)濾，中和為沉淀膠體）。 谷氨酸生物合成機(jī)理 由三羧酸循環(huán)中產(chǎn)生的 a酮戊二酸，在谷氨酸脫氫酶和氫供體存在下進(jìn)行還原性氨化作用而得到。 不形成芽胞216。 我國(guó)現(xiàn)有 200余家生產(chǎn)，年產(chǎn)量達(dá) 15萬(wàn)噸，居世界首位。 1957年，日本率先采用微生物發(fā)酵生產(chǎn)，并實(shí)現(xiàn)工業(yè)化，被譽(yù)為現(xiàn)代發(fā)酵工業(yè)的重大創(chuàng)舉，使發(fā)酵工業(yè)進(jìn)入調(diào)節(jié)調(diào)控水平。 供氧不足時(shí)產(chǎn)酸受輕微影響的天冬氨酸族氨基酸發(fā)酵 谷氨酸生產(chǎn)工藝161。 要求供氧充足的谷氨酸族氨基酸發(fā)酵： 生物合成與 TCA循環(huán)有關(guān)。216。216。 氨基酸發(fā)酵的工藝控制161。 主要是影響酶的活性和菌的代謝，主要采用流加尿素的方法控制。 pH對(duì)氨基酸發(fā)酵的影響及其控制 作用機(jī)理： 主要影響酶的活性和菌的代謝。過(guò)少菌體生長(zhǎng)緩慢，發(fā)酵周期長(zhǎng)。1銅離子： 對(duì)氨基酸發(fā)酵有明顯毒害作用。 氨基酸發(fā)酵的工藝控制161。不足時(shí)糖代謝受抑制。 合成菌體使用 3～ 6％的氮源；合成谷氨酸用去 30～ 80％氮源。 氨水用 pH自動(dòng)控制連續(xù)流加 氨基酸發(fā)酵的工藝控制161。 培養(yǎng)基 氮源： 銨鹽、尿素、氨水；同時(shí)調(diào)整 pH值。 溫度161。亮氨酸發(fā)酵亮氨酸高產(chǎn)菌株的選育：1） 選育 α酮 基異丁酸 抗性突變株，解除對(duì)異亮氨 酸、亮氨酸和纈氨酸生物合成酶系的阻遏作用；2）選育異亮氨酸缺陷型回復(fù)突變株， 其 α異丙基蘋果酸合成 酶 不再受 亮氨酸的反饋抑制；3） α噻唑 抗性兼蛋氨酸、 異亮氨酸雙重缺陷型突變株，用于亮氨酸的發(fā)酵生產(chǎn)。8hrGlu非積累型細(xì)胞 Glu積累型細(xì)胞 培養(yǎng)中后期， bio濃度漸低，乙醛酸途徑減弱直至關(guān)閉，膜磷脂合成缺陷，膜透性增強(qiáng)，分泌 Glu，解除反饋調(diào)節(jié)，大量積累Glu，細(xì)胞形態(tài)異常，未溶解。當(dāng)磷脂合成減少到正常量的一半左右時(shí)，細(xì)胞變形，谷氨酸向膜外漏出，積累于發(fā)酵液中161。在低濃度生物素條件下，因琥珀酸氧化能力降低而積累的琥珀酸就會(huì)反饋抑制該酶的活性，并阻遏該酶的合成，乙醛酸循環(huán)基本上是封閉的，代謝流向異檸檬酸 →α 酮戊二酸 → 谷氨酸的方向高效率地移動(dòng)。 Glu產(chǎn)生菌主要生理生化特性 需氧，生物素缺陷型 bio,有乙醛酸循環(huán)，羧化酶活性強(qiáng)（ bio作為輔酶） 檸檬酸、異檸檬酸、谷氨酸脫氫酶活性高， Glu合成中存在正常反饋?zhàn)瓒艉头答佉种啤?優(yōu)先合成與反饋調(diào)節(jié)161。161。 生成谷氨酸的主要酶反應(yīng)161。 氨基酸本身的合成在不同生物體中，有較大的差異，然而許多氨基酸的合成途徑在不同生物體中也有共同之處。161。O琥珀酸高絲氨酸天冬氨酸天冬氨酰磷酸天冬氨酸 β半醛高絲氨酸二氫吡啶 2， 6二羧酸賴氨酸高絲氨酸磷酸蘇氨酸蛋氨酸異亮氨酸優(yōu)先合成 反饋抑制 阻遏①②③④⑤161。 — 滲漏缺陷型的選育161。161。 — 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的選育161。 現(xiàn)代方法161。 選擇出發(fā)菌株 ：前人經(jīng)驗(yàn)；代謝途徑簡(jiǎn)單、 清楚；易于解除代謝控制機(jī)制。 代謝控制發(fā)酵的前提是選育出特定的菌種。 氨基酸發(fā)酵的代謝控制 氨基酸發(fā)酵的代謝控制與育種161。 氨基酸發(fā)酵的代謝控制 氨基酸發(fā)酵的代謝控制降低反饋?zhàn)饔梦锏臐舛? 控制反饋?zhàn)饔梦餄舛龋朔答佉种坪妥瓒?，使氨基酸的生物合成反?yīng)能夠順利進(jìn)行。 氨基酸發(fā)酵的代謝控制溶解氧： 乳酸或琥珀酸 ←→ 谷氨酸 ←→ α－酮戊二酸 （通氣不足） （適中） （通氣過(guò)量、轉(zhuǎn)速過(guò)快）NH4+： α－酮戊二酸 ←→ 谷氨酸 ←→ 谷酰胺 （缺乏） （適量） （過(guò)量）pH： 谷酰胺， N－乙酰谷酰胺 ←→ 谷氨酸 （ pH5－ 8， NH4+過(guò)多） （中性或微堿性）磷酸： 纈 氨 酸 ←→ 谷氨酸 （高濃度磷酸鹽）生物素： 乳酸或琥珀酸 ←→ 谷氨酸 （過(guò)量） （限量） 氨基酸發(fā)酵的代謝控制控制細(xì)胞滲透性 代謝產(chǎn)物的細(xì)胞透性是氨基酸發(fā)酵的重要因素，只有使細(xì)胞內(nèi)的氨基酸滲透到細(xì)胞外，才能大量積累氨基酸。 ：從生物合成途徑看，是受一種完全無(wú)關(guān)的氨基酸的控制。這種通過(guò)逐步有順序的方式達(dá)到的調(diào)節(jié)，稱為順序反饋抑制 順序控制：A B C DEF GA B C D：經(jīng)分支合成途徑生產(chǎn)兩種終產(chǎn)物 E和 G， E和G取平行合成。 161。 同功酶的主要功能在于其代謝調(diào)節(jié)。 ② 合作（或增效）反饋抑制： 系指兩種末端產(chǎn)物同時(shí)存在時(shí)，可以起著比一種末端產(chǎn)物大得多的反饋抑制作用。 161。 G過(guò)剩時(shí)，催化 A→ B反應(yīng)的酶，就會(huì)為 G所控制。 反饋控制機(jī)制 如上圖，催化合成途徑最初反應(yīng) A→ B的初始酶受終產(chǎn)物 E的反饋抑制，同時(shí)，合成途徑上各種酶的合成受終產(chǎn)物 E的阻遏。 在 80年代中后期 ,我國(guó)從日本的味之素、協(xié)和發(fā)酵以技貿(mào)合作的方式引進(jìn)輸液制劑的制造技術(shù)，1991年銷售量為二千萬(wàn)瓶， 1996年達(dá)六千萬(wàn)瓶，主要廠家有無(wú)錫華瑞，北京費(fèi)森尤斯，昆明康普萊特，但生產(chǎn)原料都依賴進(jìn)口。它們能生產(chǎn)高品質(zhì)的氨基酸，可直接用于輸液制劑的生產(chǎn)。 傳統(tǒng)的提取法、酶法和化學(xué)合成法由于前體