乙型肝炎病毒核苷(酸)類似物耐藥的檢測-wenkub.com
2025-01-03 15:30 本頁面
【正文】 ? HBV的基因型與各種核苷類藥物的療效之間的關(guān)系還沒有確定的結(jié)論。其中 YVDD陽性 36例，YIDD陽性 3例，YVDD和 YIDD同時陽性者 1例。 ? 日本 Kobayashi等檢測 18例無癥狀 HBV攜帶者 ,發(fā)現(xiàn)5例 YMDD變異 ,占 %。 ? 不要過分依基因型耐藥檢測技術(shù)。 臨床耐藥監(jiān)測 YMDD變異前后病毒載量和 ALT的變化 HBV MDD變異與病毒學突破 判斷臨床耐藥時的建議 ? 1. 結(jié)合核苷類藥物的應用史、起始病毒載量、是否合并其他肝病等。 細胞外 HBV聚合酶活性分析 ? 目前常用的研究 HBV聚合酶活性模型是將 HBV基因組插入桿狀病毒載體，繼而轉(zhuǎn)染昆蟲細胞而表達HBV顆粒，應用親和層析法純化 HBV顆粒后，在細胞外評價藥物對聚合酶活性的影響。 局限性： 設備昂貴，目前國內(nèi)難以用于臨床檢測。 ，可能導致擴增效率降低、檢測 敏感的下降。 堿基變異可能導致： ① 原有位點消失 ② 產(chǎn)生新的位點 ③ 識別位點移位 利用錯配引物使 PCR產(chǎn)物中產(chǎn)生 特異的酶切位點 結(jié)果 : 酶切片段長、短變化和多、少變化 聚合酶鏈式反應及限制性片段長度多態(tài)性技術(shù) (PCRRFLP) 限制性內(nèi)切核酸酶的作用 它們能識別 DNA的特異序列，并在識別序列內(nèi)或其旁切割雙鏈 DNA。 。 HBV YMDD變異直接測序結(jié)果圖譜 直接 DNA測序的局限性 ? 1. 設備貴、技術(shù)高、耗材、費時。 ①簡便、快速、準確可靠。 用化學試劑在 A、 G、C、 T處特定的裂解DNA片段，產(chǎn)生一簇各種長度的短鏈，經(jīng)過 PAGE放射自顯影可直讀 DNA順序。這種 HBV基因變異與 HBV的耐藥性有直接因果關(guān)系，通過這些變異位點的檢測可判斷 HBV有無耐藥性。 HBV耐藥的有關(guān)定義 病毒反跳（ viral rebound） ?指核苷類藥物治療過程中患者的血清 HBV DNA水平一度被抑制，但在繼續(xù)治療中血清HBV DNA升高至＞ 2 104IU/mL或高于治療前水平。 HBV耐藥的有關(guān)定義 生化學突破（ biochemical breakthrough） ?指在核苷類藥物治療過程中血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ ALT）水平一度復常，但在繼續(xù)治療中血清 ALT水平又再次升高。 HBV耐藥的有關(guān)定義 HBV表型耐藥（ phenotypic resistance） ? 通過體外細胞培養(yǎng)方法，直接測定 HBV對某種藥物的敏感性，或者在體外直接測定 HBV聚合酶的活性，敏感性的降低或酶活性的下降均表明有耐藥，即表型耐藥。
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