【正文】 過氧化氫過多，則會造成植物體內(nèi)生理系統(tǒng)的紊亂，破壞膜的結(jié)構(gòu)。說明隨著脅迫濃度的增加，POD清除能力也隨之增加。而S3處理產(chǎn)生不可逆的下降，說明SOD的防御和清除自由基的能力只在一定范圍內(nèi)有效，一旦超出了其范圍，SOD就會失活。各處理的SOD活性峰值均在第3天就出現(xiàn)了，%，%，%，說明干旱脅迫激活了SOD活性的水平，使其清除自由基的能力加強，且隨著脅迫濃度的增加，其激活程度也較大。 干旱脅迫對大葉冬青葉片SOD活性的影響 超氧化物歧化酶(SOD)是植物體內(nèi)清除自由基的最關(guān)鍵的保護酶之一，它能催化生物體內(nèi)氧活化的第一個中間產(chǎn)物O2發(fā)生歧化反應(yīng)，生成O2和H2O2，從而起到清除活性氧，維護氧代謝平衡的重要作用。 圖52 干旱脅迫下大葉冬青葉片MDA含量的變化Fig52 The contents variation of MDA on Broadleaf Holly leaf under drought stress表52 不同干旱脅迫處理下大葉冬青葉片MDA含量隨時間變化的方差分析（單位：μmol﹒g1FW）Table52 Different drought stress treatments Broadleaf Holly leaf MDA changes with time analysis of variance處理Treatment處理時間Treating Time0 d3 d6 d9 d12 d15 d18 dCK a a a a a a aS1 a a a ab b bcd abS2 a a a ab b ab bS3 a a a b b d c由圖52可以看出，從脅迫開始至第9天，除S3處理葉片MDA含量增幅稍大以外，其余處理與CK相差不大，并且在這段時間內(nèi)都保持在一個相對穩(wěn)定的水平，這說明輕度的干旱脅迫尚未對大葉冬青產(chǎn)生明顯傷害。隨著干旱脅迫時間的延長，從第9天到第15天葉綠素含量與對照差異并不顯著（見表51），這是大葉冬青對干旱脅迫的一種適應(yīng)（黃顏梅等，1998；王金錫等，1995），在干旱脅迫下，葉綠素含量表現(xiàn)出了較強的穩(wěn)定性，這是耐旱植物的生理特點之一（李在軍等，2006）。注：表中不同字母表示差異顯著（p），下同. Note: Different letters indicate significance（p）,The same as below.由圖51可知，隨著PEG脅迫，與CK比較SS2處理水平下在第3天時葉綠素含量就有所上升，而S3處理下葉綠素含量有所降低，并且差異顯著?？芍苯臃从持参飳Ω珊得{迫的抵抗能力，通過測定葉綠素含量的變化可以確定大葉冬青抗旱性的強弱。表明在整個低溫脅迫過程，這些物質(zhì)都不能有效清除MDA對細胞膜的傷害，不同物質(zhì)在不同階段對MDA直接清除作用是不同的。在低溫脅迫下，膜脂過氧化的加劇，致使植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)合成速度減小，滲透調(diào)節(jié)能力降低，葉綠素含量下降，致使植物生成機制遭到破壞。%、 %、%。但在較低溫度的持續(xù)脅迫下，CAT活性都有不同程度下降，至72h時，0 ℃、6 ℃處理下CAT活性仍高于對照，保持了較高的CAT活性。緩慢降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖414所示。在低溫脅迫24h時，三者POD活性的變化較為緩慢，POD的活性分別是444 u?g1FW?min1 、458 u?g1FW?min557 u?g1FW?min1，%、%、%。12℃、18℃%、% 。圖412 緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig412 Effect of rapid cooling chill stress on POD activity of broadleaf holly leaves由圖412可知，緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性都低于對照。 低溫脅迫對大葉冬青葉片POD活性的影響POD酶對植物的作用比較復(fù)雜，目前認為它是具有雙重效應(yīng)的一種酶。圖11驟然降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化Fig411 Effect of slow cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖411，大葉冬青在驟然降溫下葉片內(nèi)SOD活性隨著時間變化的曲線，可以看出，3個低溫處理與對照相比，都出現(xiàn)了先升后降的“Z”形變化趨勢，這與緩慢降溫SOD活性的變化不同。0℃、6℃處理下，SOD活性升高，表明SOD能有效地清除活性氧等各種自由基對植株的傷害，避免了活性氧等各種自由基的大量積累,此溫度下不會對大葉冬青造成傷害。緩慢降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化見圖410。表明低溫脅迫適應(yīng)后，植物體內(nèi)仍存在某種機制，調(diào)節(jié)體內(nèi)糖含量的增加以增加其對低溫脅迫的適應(yīng)能力。驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化見圖49所示。48h時6 ℃、12 ℃、18 ℃處理下大葉冬青葉片的可溶性糖開始下降。 圖48 緩慢降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化Fig48 Effect of slow cooling chill stress on SS content of broadleaf holly leaves由圖48可以看出，可溶性糖含量總的趨勢是隨著脅迫時間的延長，而呈現(xiàn)先升后降的趨勢。表現(xiàn)為三個階段，即冷激階段（24h）、適應(yīng)階段（48h）、和傷害階段（72h后）。48h時各處理MDA含量持續(xù)上升，至72h處理時各處理MDA含量均達到峰值，%、%、%、%。緩慢降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化見圖46所示。24h以上處理時間對應(yīng)的“S”形曲線可以計算出拐點溫度，℃℃之間(見表41)，這是大葉冬青抗寒能力的重要指標。大部分研究者認為,植物材料在傷害度為50%時的脅迫因子的水平具有特殊的生理學(xué)意義，已廣泛應(yīng)用于抗性研究中。6℃、0℃處理在整個過程變化幅度較小，%、%。 隨后，電解質(zhì)滲出曲線上升，在72h后，12℃、18℃處理下達到了最大值，%、%，上升幅度變化較大。在低溫脅迫下植物的細胞膜會遭到破壞，質(zhì)膜透性增大，從而使植物細胞的電導(dǎo)率增大，抗寒性較強的植物細胞不僅透性增大的程度較小，并且透性的變化可以逆轉(zhuǎn)，易于恢復(fù)正常（劉鵬，2004）。驟然降溫下葉片葉綠素含量的變化見圖42圖42 驟然降溫下大葉冬青葉片葉綠素含量的變化Fig42 Effect of rapid cooling chill stress on chlorophyll content of broadleaf holly leaves由圖42可見，驟然降溫下大葉冬青葉片葉綠素含量的變化基本呈現(xiàn)下降的趨勢，但6℃、0℃處理下葉綠素含量變化不明顯，表明葉綠素含量對驟然降溫不敏感。這可能是大葉冬青為了維持正常的光合作用主動適應(yīng)低溫環(huán)境的結(jié)果,表現(xiàn)在葉綠素上就是其含量有所回升。4結(jié)果與分析葉綠素總含量?？勺鳛橐环N反映逆境脅迫對植物造成傷害程度的生理指標，用以說明環(huán)境條件的變化對植物產(chǎn)生的影響。4ml 5％TCA沖洗轉(zhuǎn)移至離心管中；在3000r/min下離心10min，提取上清夜。儀器與用具：剪刀；離心機。試劑：蒸餾水；=；30%的H2O2。試劑：PH ；愈創(chuàng)木酚（%）；%的H2O2 方法步驟：在試管中加PH （）2 ml，愈創(chuàng)木酚（%），%的H2O2 ，空白以緩沖液代替。以不照光的對照管做空白，分別測定其它各管在560nm處的吸光值。吸取樣品液的體積提取液量稀釋倍數(shù)樣品干重106可溶性糖含量＝100％從回歸方程求得糖含量（SOD）活性的測定儀器與用具：高速離心機；分光光度計；熒光燈（反應(yīng)試管處光照強度為4000lx）試管數(shù)支；比色皿。取新鮮葉片，擦凈表面的污物，剪碎混勻，共四份。蒽酮比色法原理：糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍綠色糠醛衍生物，在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量。共測定3次電導(dǎo)率（1）1min后震蕩搖勻用電導(dǎo)儀測定電導(dǎo)值E0，（2）在室溫下放置24h后，充分搖勻測定電導(dǎo)值E1，（3）測完E1后，在沸水浴中加熱15min后，冷卻至室溫測定電導(dǎo)值E2，根據(jù)公式計算出相對電導(dǎo)率（L）。記錄重量（W）。每個處理4盆（1株/盆），3次重復(fù)。L1)、 S2 (200 g然后每3h降低5℃，直至降到6℃。隨后放入不同溫度條件下進行低溫脅迫。處理24h后取第5片葉以上的莖段和葉片測定相關(guān)生理指標?；|(zhì)用草炭：珍珠巖：蛭石（體積比2:1:1），盆底部放置托盤。因此，探討干旱脅迫下大葉冬青的生理指標的變化對于園林應(yīng)用及抗旱栽培具有重要意義（Gergely，1980）。一般來說，溫度愈低，低溫持續(xù)時間愈長，溫度回升的越急劇，則寒害也越嚴重。由于大葉冬青主要分布地為溫暖濕潤的氣候，因此干旱、低溫是其引種的主要限制因子。因此引種栽培大葉冬青具有很高的生態(tài)、經(jīng)濟和社會效益。2引言大葉冬青（Ilex latifolia)又名苦丁茶，是冬青科冬青屬常綠闊葉喬木。全炳武等（2008）研究濱麥在PEG6000脅迫下結(jié)果表明保護酶活性在輕度脅迫下升高，而中度或重度脅迫下活性降低或不變。丙二醛（MDA）是膜質(zhì)過氧化降解的產(chǎn)物，因其測定方法簡便易行，且能夠表示植物的氧化脅迫狀況，因此，測定植物脅迫下MDA含量的變化可以了解植物脅迫下的膜脂過氧化程度（王榮華，2003）。孔艷菊（2006）在研究干旱脅迫對黃櫨幼苗的生理指標影響結(jié)果表明，多數(shù)情況下黃櫨處理的葉綠素a/ b要高于對照，隨著干旱脅迫程度的加劇和時間的延長，黃櫨的葉綠素含量都有上升趨勢。顧振瑜等在研究1年生元寶楓幼