【正文】 的過氧化作用可直接導(dǎo)致細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的破壞以及細胞膜透性的增加。因此，丙二醛含量的高低直接反映了活性氧代謝及對細胞膜破壞的程度（蘇國興，1997）。緩慢降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化見圖46所示。圖46 緩慢降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化Fig46 Effect of slow cooling chill stress on MDA content of broadleaf holly leaves由圖46可以看出，在緩慢降溫脅迫下MDA含量在總體上呈增加趨勢，增加幅度基本與低溫脅迫程度成正比。在24h時第一次測定葉片中的MDA含量就開始增加，除18 ℃增幅較大外，%。%、%、%。48h時各處理MDA含量持續(xù)上升，至72h處理時各處理MDA含量均達到峰值，%、%、%、%。表明在低溫脅迫下，膜脂過氧化作用加強，MDA含量增加。驟然降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化見圖47所示。圖47 驟然降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化Fig47 Effect of rapid cooling chill stress on MDA content of broadleaf holly leaves 由圖47 可知，在驟然降溫下，從MDA含量隨時間的變化可以看出，大葉冬青在遭到迅速降溫的脅迫時呈曲線升高的趨勢。表現(xiàn)為三個階段，即冷激階段（24h）、適應(yīng)階段（48h）、和傷害階段（72h后）。第一階段是大葉冬青對驟然降溫的強烈反應(yīng)，適應(yīng)階段是大葉冬青通過自身的積極調(diào)節(jié)作用，此階段MDA含量略微下降或增加，大葉冬青的受害程度減少，但隨著脅迫時間的延長，MDA含量都有所升高，%、%、%，植株最終受到傷害。 低溫脅迫對大葉冬青葉片可溶性糖含量的影響可溶性糖作為滲透保護物質(zhì)，可以提高細胞液的濃度，以增加細胞持水組織中的非結(jié)冰水，從而降低細胞質(zhì)的冰點，還可緩沖細胞質(zhì)過度脫水，保護細胞質(zhì)膠體不致遇冷凝固。（李合生，2000；朱紅，1994），可溶性糖含量的積累有利于植物抗寒性的提高，使細胞膜免遭降解和破壞 緩慢降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化緩慢降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化見圖48所示。 圖48 緩慢降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化Fig48 Effect of slow cooling chill stress on SS content of broadleaf holly leaves由圖48可以看出，可溶性糖含量總的趨勢是隨著脅迫時間的延長，而呈現(xiàn)先升后降的趨勢。6 ℃、12 ℃、18 ℃處理下在24h時就達到了峰值，%、%、%。相比之下0 ℃處理在48 h時出現(xiàn)了峰值，%。說明低溫處理提高了葉片中可溶性糖的含量，且隨低溫處理溫度越低，含量增大越快。48h時6 ℃、12 ℃、18 ℃處理下大葉冬青葉片的可溶性糖開始下降。至72 h各處理可溶性糖含量都降到了最低點，均低于對照。12 ℃、18 ℃%、%，下降明顯。這表明低溫持續(xù)脅迫時間越長,對大葉冬青葉片傷害越大。驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化見圖49所示。 圖49 驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化Fig49 Effect of rapid cooling chill stress on SS content of broadleaf holly leaves由圖49可知，驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量變化同緩慢降溫相似，也呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢。在降溫48 h時，三個處理都達到了峰值，分別較對照上升了140%、%、%。隨后，三個處理都開始可溶性糖含量都開始下降，但6℃、0℃處理下大葉冬青葉片的可溶性糖含量仍高于對照。表明低溫脅迫適應(yīng)后，植物體內(nèi)仍存在某種機制，調(diào)節(jié)體內(nèi)糖含量的增加以增加其對低溫脅迫的適應(yīng)能力。根據(jù)可溶性糖的變化可以預(yù)知在驟然降溫下大葉冬青不能適應(yīng)6℃低溫對其造成的影響。SOD是主要的活性氧清除酶系，植物體在遭受到低溫脅迫時，積累的自由基就會引發(fā)膜脂的過氧化作用，SOD的主要功能是催化超氧化物陰離子自由基發(fā)生的歧化反應(yīng)，生成H2O2和O2(其中的H2O2再由POD、CAT酶清除)，從而有效的消除氧自由基對植物的傷害。SOD活性可以反映大葉冬青對低溫的適應(yīng)能力。緩慢降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化見圖410。圖10 緩慢降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化Fig410 Effect of rapid cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖410可知，緩慢降溫SOD酶相對活性表現(xiàn)為“先降后升”的趨勢，在處理24h時，活性達到最低，%、%、%、%。表明經(jīng)過緩慢降溫，植株得到一定的低溫鍛煉，SOD活性對低溫有一定的適應(yīng)性，即具有一定的抗寒性。隨后SOD活性開始上升，直至72h時，0℃、6℃%、%。0℃、6℃處理下，SOD活性升高，表明SOD能有效地清除活性氧等各種自由基對植株的傷害，避免了活性氧等各種自由基的大量積累,此溫度下不會對大葉冬青造成傷害。在12℃、18℃處理下72h后，SOD活性仍然較低，低于對照水平。即隨著低溫脅迫時間的延長,低溫造成的傷害最終打破了體內(nèi)的代謝平衡,酶活性不可逆轉(zhuǎn)的下降,清除自由基的能力下降,動態(tài)平衡失調(diào),表現(xiàn)出傷害。驟然降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化見圖411。圖11驟然降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化Fig411 Effect of slow cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖411，大葉冬青在驟然降溫下葉片內(nèi)SOD活性隨著時間變化的曲線，可以看出，3個低溫處理與對照相比，都出現(xiàn)了先升后降的“Z”形變化趨勢，這與緩慢降溫SOD活性的變化不同。3個處理都在24h時出現(xiàn)一個峰值，%、%、%，SOD活性的增強說明超氧自由基的增加，這是植物在遭遇逆境時清除過多的活性氧進行自保的正常反應(yīng)。說明大葉冬青在驟然降溫初期對低溫具有一定的防御反應(yīng)，來減緩傷害的速度與程度，是大葉冬青自身的一種調(diào)節(jié)對環(huán)境的一種適應(yīng)。6℃處理SOD活性產(chǎn)生了不可逆的下降，表明驟然降溫下6℃處理48h已經(jīng)對大葉冬青產(chǎn)生了傷害，說明驟然降溫對植物造成的傷害更嚴重。 低溫脅迫對大葉冬青葉片POD活性的影響POD酶對植物的作用比較復(fù)雜，目前認為它是具有雙重效應(yīng)的一種酶。一種觀點認為POD主要是防止膜質(zhì)過氧化的主要酶，POD催化如下反應(yīng):H2O2+AH2 2H2O+A，從而清除H2O2，防止生物膜受到破壞（陳貽竹等，1988）。另一種觀點認為，POD參與葉綠素的降解、活性氧的產(chǎn)生(曾韶西等，1997)并引起膜脂過氧化，是植物衰老到一定階段的產(chǎn)物，為一種傷害反應(yīng)，可作為植物衰老的標(biāo)志。 緩慢降溫對大葉冬青葉片POD活性的影響緩慢降溫下大葉冬青POD活性的變化見圖412所示。圖412 緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig412 Effect of rapid cooling chill stress on POD activity of broadleaf holly leaves由圖412可知，緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性都低于對照。0℃、6℃處理下POD活性先降后升，12℃、18℃處理下其POD活性一直處于下降趨勢。在24h處理時4 個處理都下降明顯，%、%、%、%。72h后，0℃、6℃有所上升，但仍低于對照。12℃、18℃%、% 。表明在低溫下72h即可造成大葉冬青代謝功能紊亂。 驟然降溫對大葉冬青葉片POD活性的影響驟然降溫下大葉冬青POD活性的變化見圖413所示。圖413驟然降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig413 Effect of slow cooling chill stress on POD activity of broadleaf holly leaves由圖413可知，驟然降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化如圖所示，在低溫脅迫下，其POD活性隨低溫處理時間的延長逐漸降低。在低溫脅迫24h時，三者POD活性的變化較為緩慢，POD的活性分別是444 u?g1FW?min1 、458 u?g1FW?min557 u?g1FW?min1，%、%、%。隨后持續(xù)下降，%、%、%。可見持續(xù)低溫可引起植物體內(nèi)超氧自由基等活性氧的增加,降低其葉片中POD的活性。 低溫脅迫對大葉冬青葉片CAT活性的影響CAT是植物體內(nèi)重要的活性氧消除系統(tǒng)之一，可以清除H2O2，H2O2是植物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，H2O2的積累可導(dǎo)致破壞性的氧化作用，CAT的活性與植物的抗逆性有關(guān)。緩慢降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖414所示。圖414 緩慢降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化Fig414 Effect of rapid cooling chill stress on CAT activity of broadleaf holly leaves由圖414可見，緩慢降溫處理下大葉冬青葉片CAT活性的變化趨勢一致，葉片CAT活性的變化趨勢為先升后降。24h時CAT活性最高，分別較對照高出 %、 %、%、%。表明一定程度的低溫誘導(dǎo)能夠顯著增強大葉冬青葉片CAT的活性。但在較低溫度的持續(xù)脅迫下，CAT活性都有不同程度下降，至72h時，0 ℃、6 ℃處理下CAT活性仍高于對照，保持了較高的CAT活性。12℃、18 ℃處理下的CAT活性已低于對照的CAT活性。驟然降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖415所示。圖415 驟然降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化Fig415 Effect of slow cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖415 可見，驟然降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化與緩慢降溫的變化趨勢基本一致，隨低溫脅迫時間的延長，CAT活性先升高，再降低，且CAT一直維持較高的活性，在48h時三個處理都達到了最大值，%、%、%，48h時CAT活性最大。%、 %、%。葉片中保持較高的CAT活性，有利于清除細胞中過剩H2O2，從而降低對細胞的毒害作用。大葉冬青葉片在低溫脅迫下各項生理指標(biāo)的相關(guān)性分析見表42所示。表42 低溫脅迫下大葉冬青葉片各項指標(biāo)的相關(guān)性分析Table2 Broadleaf holly leaves under low temperature stress the relevance of the indicators處理（Treatment）項目(Item)ChlMDASSMPSODPODMDASS＊24hMP＊＊＊SODPOD＊＊CAT ＊＊＊項目(Item)ChlMDASSMPSODPODMDA＊SS＊48hMPSODPODCAT項目(Item)ChlMDASSMPSODPODMDA＊SS＊＊＊72hMP＊＊SOD＊＊ ＊＊＊＊POD＊＊＊＊　CAT注： “*” ，“**” Note: “*” Correlation is significant at the level. “**”Correlation is significant at the level.由表42可知，可以看出，Chl與MDA之間均呈負相關(guān)或顯著負相關(guān)，24h處理時，葉綠素與可溶性糖、POD呈顯著正相關(guān)，與電導(dǎo)呈顯著負相關(guān)， MP與MDA、可溶性糖之間呈極顯著正相關(guān)，POD與SOD、CAT之間呈顯著相關(guān)，SOD與CAT之間極顯著正相關(guān)。在低溫脅迫下，膜脂過氧化的加劇，致使植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)合成速度減小，滲透調(diào)節(jié)能力降低，葉綠素含量下降，致使植物生成機制遭到破壞。低溫脅迫第48h時，MDA與可溶性糖、SOD、POD負相關(guān)，與電導(dǎo)和CAT正相關(guān)，說明在這個過程中可溶性糖、SOD、POD的協(xié)同作用有效的保護了MDA對大葉冬青細胞膜的傷害。在脅迫第72h，MDA與電導(dǎo)、SOD正相關(guān)，與可溶性糖、POD、CAT負相關(guān)，說明可溶性糖、POD、CAT在這個過程中起著重要的作用。在防止干旱脅迫過程中發(fā)揮著重要的作用。表明在整個低溫脅迫過程，這些物質(zhì)都不能有效清除MDA對細胞膜的傷害，不同物質(zhì)在不同階段對MDA直接清除作用是不同的。單就相關(guān)性而言， 這幾個指標(biāo)之間的相關(guān)性比較好，因此，在快速估計植物的抗寒性時，測定其中任何一個指標(biāo)即可。但由于植物的抗寒性是由多因素調(diào)控的，因此對抗寒性的評價也需要是多方面的，應(yīng)對植物材料同時采用多種方法相