【正文】 通過(guò)?；鶊F(tuán)特征吸收峰Eacyl與Evis之間的比值可判斷?；膫€(gè)數(shù)(Eacyl/Evis在53~69%，表明含有一個(gè)?；?8~128%表明含有二個(gè)酞錯(cuò)別字？基) ，E440/Evis值比值接近30，表明花色苷5位沒(méi)有糖苷；比值接近13，表明5位有糖苷；比值接近24，表明3位有糖苷[7475]。通過(guò)HPLCDADESI/MS聯(lián)用技術(shù)，可得到紫甘薯花色苷的HPLC色譜圖（圖21）及總正離子流色譜圖，通過(guò)各組分的準(zhǔn)分子離子及質(zhì)譜碎片信息，結(jié)合其紫外可見(jiàn)掃描光譜，對(duì)三個(gè)品種（Z10）紫甘薯中的花色苷組成進(jìn)行了初步分析。洗脫梯度見(jiàn)表21， mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量5 μL。 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)樣品處理紫甘薯花色苷粗提物：冷凍干燥后的Z103，Z109，Z110紫甘薯粉末，用體積分?jǐn)?shù)為20%（ ）（v/v）？、料液比1∶溫度50℃、常規(guī)水浴振蕩提取120 min，提取液過(guò)濾后，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，冷凍干燥，固形物溶于水：乙腈：甲酸（10：：）溶劑中， μm膜后用HPLCDADESI/MS分析。目前，國(guó)外已采用制備型高效液相色譜等技術(shù)分離出不同品種的紫甘薯中十種花色苷組分，除一種外，其余均為單?；螂p?；Y(jié)構(gòu)。（3） 紫甘薯花色苷的純化條件研究。本論文的主要研究?jī)?nèi)容包括：（1） 紫甘薯花色苷組成的反相HPLCDADESI/MS初步分析。由于植物花色苷主要存在于液泡和細(xì)胞壁上，常規(guī)的溶劑浸提過(guò)程涉及液固兩相的熱質(zhì)傳遞，由于提取液的粘度大，擴(kuò)散系數(shù)小，傳質(zhì)效率低，導(dǎo)致花色苷提取的整體效率偏低。 本課題的研究?jī)?nèi)容及意義紫甘薯（purple sweet potato, Ipomoes batatas L.）屬旋花科一年或兩年生草本植物，其所含花色苷是一類(lèi)優(yōu)質(zhì)的?；烊簧?，具有著色能力、水溶性和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。同時(shí)，將該飲料作用于肝損傷患者也有相似的功效。太多了，不用每種都分開(kāi)舉例說(shuō)明，該合的可以合并。喂食葡萄籽花色苷的家兔主動(dòng)脈MDA含量減少，嚴(yán)重主動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生率降低。研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，花色苷可以促進(jìn)缺血再灌注后心臟收縮功能的恢復(fù)，心肌梗死范圍明顯減小。在另一項(xiàng)研究中，Kim等(2000)[66]發(fā)現(xiàn)從山楂中提取的花色苷可以緩解離體大鼠主動(dòng)脈的血管緊張性。試驗(yàn)結(jié)果還表明，二?；ㄉ帐峭ㄟ^(guò)對(duì)α葡糖苷酶產(chǎn)生抑制作用，從而導(dǎo)致血糖的降低。比較紫、橙、白三種甘薯的水提取物和紫薯花色苷YGM3，YGM6對(duì)ACE的50%抑制率，結(jié)果表明，紫薯花色苷YGM3，YGM6有很強(qiáng)的抑制能力，而白色和橙色甘薯的抑制力很差。當(dāng)濃度為200 μg/ml時(shí)，花色素葡萄糖苷對(duì)腫瘤細(xì)胞無(wú)抑制作用，而花色素有抑制作用，其中錦葵素最有效，可對(duì)胃(AGS)、結(jié)腸 (HCT116)、乳腺(MCF7)、肺(NCIH460)和中樞神經(jīng)SF268腫瘤抑制，其次是天竺葵素。Hagiwara等(2001)[57]發(fā)現(xiàn)紫玉米色素抑制1，2二甲肼和2氨基1甲基6苯基咪唑嘧啶誘導(dǎo)的結(jié)腸腺瘤的發(fā)生和多樣性。Yoshimoto等(2001)[55]對(duì)甘薯中花色苷色素的抗突變作用進(jìn)行了進(jìn)一步研究，結(jié)果表明酰化的矢車(chē)菊花色苷的抗突變作用要大于?；纳炙幓ㄉ?，而脫乙?；幕ㄉ盏目雇蛔兡芰γ黠@下降，同時(shí)發(fā)現(xiàn)咖啡酸的抗突變能力比阿魏酸和對(duì)羥基苯甲酸的抗突變能力強(qiáng)。 抗突變活性自然界中存在大量的致突變物，人類(lèi)長(zhǎng)期接觸后可引起基因突變，從而引發(fā)腫瘤、畸形和遺傳缺陷等。的能力，且均具有量效關(guān)系， mg/mL時(shí)，紫甘薯花色苷對(duì)資名揚(yáng)等人(2009)[53]在紫甘薯花色苷的體外抗氧化性研究中，發(fā)現(xiàn)紫甘薯花色苷具有較強(qiáng)的清除通過(guò)食用具有抗氧化能力的食物可防止多種疾病發(fā)生。因而在食品添加劑、保健品和醫(yī)藥工業(yè)方面有廣闊的應(yīng)用前景。(7) 重結(jié)晶法采用醋酸鉛沉淀，乙醇重結(jié)晶，該法不適用于食用天然色素的生產(chǎn)。(6) 基質(zhì)固相萃取(matrix solid phase dispersionextraction)基質(zhì)固相萃取是一種新的提取凈化技術(shù)，其基本操作是將試樣直接與適量的固體基質(zhì)(硅膠、C1C沙子等)研磨，混勻成半固態(tài)后裝柱，然后選擇合適的溶劑淋洗。Patil等人(2009)[45]利用超濾、反滲透和滲透膜蒸餾聯(lián)用技術(shù)對(duì)紅蘿卜提取物中的花青素進(jìn)行了分離和濃縮，最終結(jié)論為，刪與單個(gè)膜過(guò)濾過(guò)程相比，聯(lián)用技術(shù)可大大提高花青素的濃縮效率， mg/100mL提高到485 mg/100mL。Rentzsch等人(2007)[44]采用半制備液相色譜結(jié)合高速逆流色譜分離技術(shù)對(duì)櫻桃果汁中的2種花青素5carboxypyranocyanidin3O(2Gglucosyl rutinoside)和5carboxypyranocyanidin3Orutinoside進(jìn)行了分離。(3) 高效液相( high performance liquid chromatography, HPLC)目前液相色譜(HPLC)分離技術(shù)已在花青素純化方面得到越來(lái)越廣泛的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，已成為分離和純化花青素的一種的重要方法。國(guó)外許多的研究者都用1%HCl的甲醇(MeOH)溶液作為植物材料的提取溶劑[26]，可以刪用SephaexQ25(交聯(lián)葡聚糖)，AmberliteXAD7，離子交換樹(shù)脂法，酸化甲醇激活的C18柱和正丁醇液液提取純化屬于溶劑萃取方法法[912]。(2) 樹(shù)脂法精制將酸性溶液提取、過(guò)濾后的花色苷用大孔吸附樹(shù)脂等精制，除去糖類(lèi)、有機(jī)酸、單寧和礦物質(zhì)等，再濃縮或噴霧干燥或冷凍干燥得到最終產(chǎn)品。 花色苷的純化方法溶劑法提取的花色苷溶液，含有較多的糖、有機(jī)酸和其它雜質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性差，純度低，溶解性差。采用黑曲霉、木酶、固氮菌等組合菌對(duì)大花葵纖維素進(jìn)行降解，使植物細(xì)胞壁中纖維素解鏈，花青素得到充分釋放，%、溫度30℃、初始含水量50%、該方法的優(yōu)點(diǎn)是花青素可以直接與微生物的代謝產(chǎn)物乙酸形成穩(wěn)定性較強(qiáng)的?；幕ㄇ嗨?。張樹(shù)寶等人(2006)[39]對(duì)超臨界CO2提取大花葵中花青素的最佳工藝進(jìn)行了研究，萃取壓力25 MPa，萃取溫度60℃，萃取時(shí)間為45 min，物料比為1:25時(shí)萃取率最高。②亞臨界水提取技術(shù)(subcritical water extraction, SWE)在適度的壓力下，將水加熱到100℃以上、臨界溫度374℃以下的高溫，水仍然保持在液體狀態(tài)，它的極性會(huì)隨溫度變化而改變，這種水稱(chēng)為亞臨界水。Sun等人(2007)[35]通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化了微波輔助提取紅樹(shù)莓中花青素的最佳工藝參數(shù)： mol/ L的HCl和體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇(體積比15:85)，提取液料比為5 mL:1 g表示為5:1(v/w)？ ，提取時(shí)間為53 min，提取溫度為71℃，提取次數(shù)2次，依此工藝， μg/g鮮果。在微波提取過(guò)程中，微波加熱導(dǎo)致植物細(xì)胞內(nèi)的極性物質(zhì)，尤其是水分子吸收微波能，產(chǎn)生大量熱量，使細(xì)胞內(nèi)溫度迅速上升，液態(tài)水汽化產(chǎn)生的壓力將細(xì)胞膜和細(xì)胞壁沖破，形成微小的孔洞。顧紅梅等人(2004)[32]對(duì)紫甘薯中花青素的超聲波輔助提取方法也進(jìn)行了研究，最佳提取條件為采用V(%HCl):V(95%乙醇)=40:60為提取劑、料液比為1:在60℃下超聲(40 Hz)提取30 min，%；chen等人(2008)[33]對(duì)利用超聲波提取紅樹(shù)莓中花色苷色素的工藝進(jìn)行了研究，得出最佳提取工藝參數(shù)為：在超聲波功能為400 W條件下， M HCl，95%的乙醇(15:85)提取劑，固液比為1:4 (g:ml)，處理2005，溫度40℃時(shí)提取率最高，%。(4) 超聲波輔助提取(ultrasound assisted extraction, UAE)超聲波是指振動(dòng)頻率較高的物體在介質(zhì)中產(chǎn)生的頻率高于2104Hz的彈性機(jī)械波。，溫度99℃，提取時(shí)間7 min，溶劑為V(水)∶V(乙醇)∶V(甲醇)=94:5:1 提取效果？。(2) 加壓溶劑萃取( pressurized solvent extraction, PSE)加壓溶劑萃取，又稱(chēng)加壓液體萃取(pressurized liquid extraction, PLE)、快速溶劑萃取(accelerated solvent extraction, ASE)，它是通過(guò)外來(lái)壓力提高溶劑的沸點(diǎn)，進(jìn)而增加物質(zhì)在溶劑中的溶解度以及萃取效率的。丙酮已用于幾種植物花色素的提取[24,27]，與酸化甲醇相比，丙酮提取避免了果膠干擾，可以在比較低的溫度下濃縮。(1) 溶劑萃取法花色苷易溶于極性溶劑之中，目前報(bào)道的主要溶劑有水、甲醇、乙醇和丙酮等[2728]。而花色苷遇到醋酸鉛會(huì)發(fā)生沉淀[16]。②溫度與花色苷的穩(wěn)定性當(dāng)花色苷溶液加熱時(shí)，花色苷的結(jié)構(gòu)由黃烊鹽陽(yáng)離子向查爾酮式轉(zhuǎn)變；當(dāng)冷卻或酸化時(shí)，醌型堿和假堿結(jié)構(gòu)迅速變成黃烊鹽陽(yáng)離子形式，而查爾酮式結(jié)構(gòu)變化相當(dāng)慢[20]。首先，產(chǎn)生無(wú)色的甲醇假堿，這一物質(zhì)會(huì)發(fā)生開(kāi)環(huán)生成無(wú)色查兒酮假堿；后者反應(yīng)產(chǎn)生一種或幾種淡紫色的醌型。前面已涉及花色素少見(jiàn)，此處只要提花色苷的不穩(wěn)定性及其影響因素即可。從而構(gòu)成了日本紫甘薯花色苷色素的主要化學(xué)組分為帶有酰基的矢車(chē)菊苷和芍藥苷兩種。Goda等(1997)[11]鑒定了此類(lèi)紫甘薯色素中另兩種花色苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分別為：3O(6O反式咖啡酰2OβD吡喃葡糖基β吡喃葡糖苷)5Oβ葡糖苷矢車(chē)菊素和芍藥素（圖13，結(jié)構(gòu)3和4）。研究表明，紫甘薯塊根中主要的花色苷為芳香族有機(jī)酸酰化的花色苷（圖13）[1012]，與其它來(lái)源花色苷相比穩(wěn)定性較強(qiáng)，引起國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注。這些酰化的取代基通常與3位的糖基上的6OH發(fā)生酯化，但也有在單糖的2OH、3OH和4OH發(fā)生酯化的花色苷存在[9]。如表11所示。此部分放到圖前面。目前，天然花色苷主要是從葡萄皮、藍(lán)莓、越橘和紫蘇中提取分離[36]，但由于上述材料來(lái)源有限，且花色苷含量低，使得我國(guó)天然花色苷的產(chǎn)能?chē)?yán)重不足。花色苷上的糖分子上的羥基與一個(gè)或幾個(gè)有機(jī)酸分子通過(guò)酯鍵可形成?；幕ㄉ铡Ｗ杂苫那宄龑?shí)驗(yàn) 100（3）紫甘薯花色苷對(duì)超氧陰離子自由基（O2ˉ]自由基殘留率的測(cè)定方法 94（3）半抑制量的計(jì)算和清除能力的評(píng)價(jià) 943. 紫甘薯花色苷對(duì)超氧陰離子自由基（O2ˉ Purification。 of anthocyanins from purple sweet potato were increased with the concentration, the scavenging rate was % at 30μg/mL, scavenging capacity of different antioxidants for HOg1.(5) In the dynamic adsorption dynamics investigation, the influences of pH value, elution gradient, flow rate and sample size on the separation process were discussed. The results showed that when pH value of purple sweet potato anthocyanins sovent was , concentration was C0= mg/ml, the flow rate of mL/min, sample size of 145 mL, the adsorption content was mg/g(resin), while 80% ethanol with pH as eluent, 3BV , flow rate at mL/min, the desorption rate was %. The content of purified anthocyanins was mg/g, increase times pared with before, the color valueof purified anthocyanins was , increase times. Spectrometry analysis of HPLCDADESI/MS for eluent with gradientelution show that 20% ethanol eluent anthocyanins content was too low to detect, 40% ethanol eluent contains all the15 kinds of anthocyanins, 60% ethanol eluent contains six kinds of anthocyanins with the high molecular weight , , , (including 2 kinds of anthocyanins) and , 80% ethanol eluate only contained two kinds of anthocyanins with the relative molecular weight of and results of grade eluting indicated that most of anthocyanins was eluted off by 40% ethanol eluent.(6) Thermal degradation kineties of anthocyanins from purple sweet potato in aqueous solution followed firstorder kineties. The puted values of activation energies were kJ/mol. With the increase of temperature, the halflife value of anthocy