【正文】 經(jīng)一系列除雜后天然產(chǎn)物提取液純度提高，為實驗室科研工作打下基礎。結 論本課題利用蛋白質分子的熱變性和低溫脫脂原理為理論依據(jù)，對迎春花和連翹花提取液先進行冷凍處理，經(jīng)高速離心后，再進行加熱離心處理，制備了經(jīng)不同條件處理的提取液。 提取液的高效液相色譜譜圖分析 稀釋100倍迎春花冷凍處理高效液相色譜圖 稀釋100倍迎春花加熱處理高效液相色譜圖 稀釋100倍連翹花原液高效液相色譜圖 稀釋100倍連翹花冷凍處理高效液相色譜圖 稀釋100倍連翹花加熱處理高效液相色譜圖 ，經(jīng)過一系列除雜后，主要成分的含量增加，但峰面積整體下降，證明在除雜過程中目標成分也有少量損失；雜質峰的數(shù)目減少，說明大量雜質被去除。 迎春花樣品實物圖 連翹花樣品實物圖 C27H30O16 C15H10O7 蘆丁分子結構式 槲皮素分子結構式?；貧w方程為： Y=A+exp(x/t1)+Y0 （31）A= t1= Y0= 水45℃升溫曲線A= t1= Y0=根據(jù)上述分析的結果，確定控溫溫度與要求溫度的差為2℃。 實驗方法 粗提取液純化(1)冷凍脫脂分別取迎春花、連翹花粗取液各50ml于兩個燒杯中，貼上標簽置于冰箱中按設定溫度3℃進行低溫處理，低溫處理完成以2000轉速高速離心得到除去脂肪后的提取液，分別將離心后所得提取液與固體殘渣分離，觀察處理后的提取液的色澤及澄清度，取適量上層清液用紫外分光光度計測其在190nm900nm波長范圍內的光譜。(2)密度梯度離心：也叫區(qū)帶離心，即離心是在具有連續(xù)密度梯度的介質中進行。 常用離心方法根據(jù)離心方式的不同，可分為差速離心法和密度梯度離心等。 離心分離的基本原理當非均相體系圍繞一中心軸做旋轉運動時，運動物體會受到離心力的作用，旋轉速率越高，運動物體所受到的離心力越大。離心分離生物分子是最常用的生化分離方法，因為不同的生物分子有不同的體積和密度，可在不同離心力的作用下沉降分離。四是溶液品質。三是攪拌速度。某種油脂最穩(wěn)定晶型的獲得是由冷卻速度和結晶溫度決定的，溫差過大的急驟冷卻易形成無法分離的玻璃質體，只有緩慢冷卻至一定的結晶溫度，才能獲得相應的晶型，冷卻速率取決于冷卻介質與油脂的溫差和傳熱面積。 冷凍脫脂的原理及影響因素 冷凍脫脂原理天然脂類中不同類型的甘三酯的熔點有一定的差異，隨著溫度的降低固體脂在有機溶劑中的溶度降低，因此通過降溫冷卻能促使固體脂結晶，然后進行固液分離即可達到脫脂的目的。近年來，親和層析技術被廣泛應用于靶標蛋白尤其是疫苗的分離純化，特別是在融合蛋白的分離純化上，親和層析更是起到了舉足輕重的作用，因為融合蛋白具有特異性結合能力[19]。另外，離子交換層析還用于抗凝血蛋白的提取。當?shù)鞍踪|處于不同的pH值條件下，其帶電狀況也不同。離子交換層析(Ion exchange chromatography ，IEC)是以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。利用等電聚焦技術分離蛋白質混合物是在具有pH梯度的介質中進行的。在外電場的作用下，帶電顆粒(如不處于等電點狀態(tài)的蛋白質分子)將向著與其電性相反的電極移動，這種現(xiàn)象稱為電泳。反膠團是當表面活性劑在非極性有機溶劑溶解時自發(fā)聚集而形成的一種納米尺寸的聚集體。對于細胞內的蛋白質，需要先對細胞進行有效破碎。冷乙醇法也是目前WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法，不僅分辨率高、提純效果好、可同時分離多種血漿成分，而且有抑菌、清除和滅病毒的作用。由于在室溫下，有機溶劑不僅能引起蛋白質的沉淀，而且伴隨著變性。為防止不同分子之間產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象，%～%。應當指出，同樣濃度的二價離子中性鹽，如、對蛋白質溶解度影響的效果，要比一價離子中性鹽如、大得多。他們利用堿溶法提取葡萄籽蛋白質，得到了最佳的提取工藝為：以的溶液，按1∶5的料液比，在40℃攪拌40 min，%。因而可以通過調節(jié)溶液的pH值來分離純化蛋白質。但在同一條件下，不同的蛋白質因其分子結構的不同而有不同的溶解度，根據(jù)蛋白質分子結構的特點，適當?shù)馗淖兺獠織l件，就可以選擇性地控制蛋白質混合物中某一成分的溶解度，達到分離純化蛋白質的目的。目前常用的凝膠有交聯(lián)葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠等。密度梯度離心曾用于純化蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白，得到的產(chǎn)品純度高但產(chǎn)量偏低。例如，在從大米渣中提取蛋白質的實驗中，加入纖維素酶和淀粉酶進行預處理后，再用離心的方法將有用物質與分解掉的雜質進行初步分離[13]。由于超濾過程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質堵塞，以致超濾速度減慢，截流物質的分子量也越來越小。透析是將待分離的混合物放入半透膜制成的透析袋中，再浸入透析液進行分離。 天然產(chǎn)物提取液的精制方法隨著科技的發(fā)展和生活水平的提高，天然產(chǎn)物以其健康、安全的特點，將越來越受人們的歡迎，但天然產(chǎn)物大多不能直接使用，而只需要其中的某些物質，因此需要對天然產(chǎn)物進行提取分離，提取后所得提取液大多數(shù)是混合物，需利用體系中各組分物性的差別，使用不同的方法使混合物得到分離提純。我國是一個占世界人口四分之一的、具有13億人口的大國，因此，這樣多的人口，要進入一日三餐的加工食品時代，需要的食用天然色素是很大的。辣椒的種子可以提取辣椒堿及辣椒油，殘渣含高蛋白；辣椒種皮可以提取辣椒紅色素、辣椒堿，殘渣再配上面醬、油、鮮味劑，可精制辣醬。許多天然色素生產(chǎn)的原料是野生植物、農(nóng)作物副產(chǎn)品或廢棄物。我們應當奮進直追，迎頭趕上。我國各天然色素生產(chǎn)企業(yè)一般規(guī)模都偏小，產(chǎn)品單一，在小量、低質量、高損耗中徘徊，經(jīng)濟效益不明顯，抗風險能力差。在天然色素的生產(chǎn)過程中，可以采用的高新技術有：基因工程、細胞工程、發(fā)酵工程、吸附色譜、凝膠過濾、微孔過濾、超濾、電滲析、反滲透、膜分離技術、超臨界流體萃取分離技術(、丙烷)、冷凍干燥等技術。紅曲米中含有降血脂物質酪伐它汀，作為著色劑用于食品中，可以有效地使人體內血脂達到正常平衡不少以類黃酮為天然色素的物質有抗氧化功能或軟化血管功能。特別是一些農(nóng)產(chǎn)品，如玉米、高粱、辣椒、蘿卜等更是隨處可見，這就為天然產(chǎn)物的開發(fā)利用提供了豐富的原料，也為農(nóng)副產(chǎn)品的深加工開辟了新的途徑。 天然產(chǎn)物的發(fā)展前景隨著我國食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)的發(fā)展，天然產(chǎn)物的市場需求量將大幅度增加，新產(chǎn)品開發(fā)和應用范圍的擴大，使得天然產(chǎn)物市場具有廣闊的發(fā)展前景。這些食品天然色素產(chǎn)品除在國內銷售外，還遠銷國外。經(jīng)過20多年的努力，我國的食用色素產(chǎn)業(yè)已初具規(guī)模，成為食品工業(yè)中的一個重要行業(yè)。目前已經(jīng)開發(fā)出80余種不同原料來源的食用天然色素。在色素分離中，利用色素與雜質分子大小的差異， 采用纖維超濾膜和反滲透膜，可阻留各種不溶性大分子如多糖、蛋白質等。(8)酶法提取法纖維素酶可使纖維素、半纖維素等物質降解，引起細胞壁和細胞間質結構發(fā)生局部疏松、膨脹等變化，從而增大胞內有效成分向提取介質的擴散，促進天然產(chǎn)物提取效率的提高。(7)高效液相色譜(HPLC) 技術HPLC是一種以液體為流動相的現(xiàn)代柱色譜分離分析技術。結果表明，采用分子蒸餾法，從脫蠟的甜橙油中一步提取的色素，不含有機溶劑，純度高，色價高。微波萃取克服了超臨界萃取和溶劑萃取方法的上述缺陷， 既降低了操作費用，又符合環(huán)境保護的要求，表現(xiàn)出良好的發(fā)展前景和巨大的應用潛力。由于超臨界提取工藝簡單，能耗低，萃取劑便宜，提取的產(chǎn)品具有純度高， 溶劑殘留少，無毒副作用等優(yōu)點，越來越受到人們的重視。辣椒紅色素的堿提取是以15% 40%的水溶液處理辣