【正文】 and other macromolecule impurities in natural product extraction can be effectively removed by being frozen, heated and centrifugally separated. The conditions of removing impurity are 3℃ for six hours, 45℃ for one hour, 2000 r/min for fifteen minutes.Key word：Natural products。開(kāi)發(fā)天然產(chǎn)物是世界食用色素業(yè)和醫(yī)藥等行業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)之一，以天然產(chǎn)物為主的保健品和藥物等具有相當(dāng)大的市場(chǎng)前景，但由于天然產(chǎn)物分離純化困難，很難達(dá)到和國(guó)際接軌的要求，因此解決天然產(chǎn)物研究中樣品分離純化的難題，得到除雜后的精制產(chǎn)品會(huì)使天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)利用具有更加廣闊的前景，同時(shí)開(kāi)發(fā)高效的天然產(chǎn)物的除雜方法對(duì)徹底改變中國(guó)天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)層次低，生產(chǎn)方式粗放，技術(shù)落后有重要作用，對(duì)中國(guó)天然產(chǎn)物利用現(xiàn)狀的轉(zhuǎn)型與提升具有重要意義。并且天然產(chǎn)物由于其安全性高，已成為醫(yī)藥、食品和飼料等的重要來(lái)源[12]。近年來(lái)隨著生物技術(shù)的發(fā)展，利用生物技術(shù)生產(chǎn)天然產(chǎn)物已為人們開(kāi)闊了廣泛的領(lǐng)域，如利用微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)藍(lán)色素、紅曲色素等多種天然色素已成為現(xiàn)實(shí)[34]，利用微生物具有特定的優(yōu)勢(shì)，如不受資源、環(huán)境和空間的限制，以及生長(zhǎng)迅速等，可快速大量的生產(chǎn)天然產(chǎn)物。 (1)有機(jī)溶劑提取法 溶劑提取法是目前從動(dòng)植物中提取色素的一種常用的方法。(2)堿提取法 堿提法主要是應(yīng)用堿對(duì)多種生物物質(zhì)的影響作用，其提取效率雖不如有機(jī)溶劑提取率高，但從經(jīng)濟(jì)角度和安全性考慮仍有應(yīng)用價(jià)值。(3)超臨界流體萃取法 超臨界二氧化碳流體萃取是近二十年發(fā)展起來(lái)的一種新型物質(zhì)分離、精制技術(shù)。宿樹(shù)蘭等采用正交試驗(yàn)優(yōu)化超臨界流體萃取姜黃藥材中姜黃素，%。該技術(shù)具有蒸餾溫度低，蒸餾壓力低，分離程度高，受熱時(shí)間短等特點(diǎn)，因而能大大降低高沸點(diǎn)物料的分離成本，極好地保護(hù)熱敏性物料的品質(zhì)，真正保持了純天然的特性。其基本原理是利用被提取物質(zhì)在不同的兩相系統(tǒng)間分配行為的差異進(jìn)行分離。對(duì)于熱不穩(wěn)定性或極性大的天然產(chǎn)物來(lái)說(shuō)，HPLC是一種有效的分離分析方法。應(yīng)用酶促反應(yīng)還可改變天然梔子黃色素中的梔子苷的結(jié)構(gòu)， 生產(chǎn)出梔子紅、藍(lán)色素。 我國(guó)天然產(chǎn)物的應(yīng)用現(xiàn)狀我國(guó)疆域遼闊，有著天然產(chǎn)物生產(chǎn)所需的豐富植物資源，在發(fā)展天然產(chǎn)物方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。我國(guó)還有一支龐大的天然色素研究開(kāi)發(fā)隊(duì)伍。據(jù)1998年下半年統(tǒng)計(jì)。在人們崇尚綠色天然食品的今天，用純化學(xué)物質(zhì)人工合成的食品著色劑和食用色素已不占食用色素市場(chǎng)的主流。同時(shí)由于人們對(duì)化學(xué)合成色素危害性認(rèn)知的增加，天然產(chǎn)物具有的天然和健康屬性，使天然色素的種類(lèi)和市場(chǎng)需求量大幅度增加，而且色素品種逐漸由合成色素轉(zhuǎn)變?yōu)樘烊簧?，但目前天然色素的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足現(xiàn)代工業(yè)發(fā)展的需要，開(kāi)發(fā)新品種的天然色素，探索新的天然色素來(lái)源，對(duì)原有天然色素的生產(chǎn)工藝進(jìn)行改進(jìn)，擴(kuò)大天然色素的應(yīng)用范圍，降低天然色素的生產(chǎn)成本，已成為添加劑行業(yè)和研究者們非常迫切的問(wèn)題。隨著人民生活水平的提高和食品工業(yè)不斷發(fā)展與壯大，食用色素發(fā)展在我國(guó)具有廣闊的前景，以天然色素為例說(shuō)明我國(guó)對(duì)天然產(chǎn)物發(fā)展的政策方針。(2)提高技術(shù)與裝備水平，促進(jìn)天然色素的生產(chǎn) 天然色素的生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)采用高新技術(shù)，不斷提高裝備水平，提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，降低成本，從而提高產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)力。(3)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化、系列化、實(shí)用化，開(kāi)拓國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)。就某一個(gè)天然色素而言，一個(gè)企業(yè)也沒(méi)有完全做到標(biāo)準(zhǔn)化、系列化，缺欠實(shí)用技術(shù)的開(kāi)發(fā)。(4)進(jìn)行原料的綜合利用在原料上應(yīng)當(dāng)走綜合利用，變廢為寶的道路。用高粱殼生產(chǎn)高粱紅；用葡萄皮渣生產(chǎn)葡萄色素等，原料低廉。這種綜合利用的開(kāi)發(fā)，可以大大提高經(jīng)濟(jì)效益。只要我們能把自己的天然色素做到標(biāo)準(zhǔn)化、系列化、實(shí)用化，一定能培養(yǎng)出中國(guó)這個(gè)大市場(chǎng)，這已經(jīng)為火腿腸使用紅曲紅和餅干噴涂辣椒紅的中國(guó)市場(chǎng)所證明。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無(wú)機(jī)鹽為主的小分子分開(kāi)。離心也是經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一種分離蛋白質(zhì)的方法。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度。凝膠過(guò)濾也稱(chēng)凝膠滲透層析，是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同分離蛋白質(zhì)最有效的方法之一。凝膠過(guò)濾在抗凝血蛋白的提取過(guò)程中也被用來(lái)除去大多數(shù)雜蛋白及小分子的雜質(zhì)。等電點(diǎn)沉淀和pH值調(diào)節(jié)是最常用的方法。李殿寶在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時(shí)將蛋白溶液的pH值調(diào)到3～4，使目標(biāo)蛋白于等電點(diǎn)沉淀出來(lái)。利用酸法提取得到的鰱魚(yú)魚(yú)肉蛋白質(zhì)無(wú)腥味、色澤潔白，蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達(dá)90%。鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法，如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法，其中硫酸銨鹽析法廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)。有機(jī)溶劑提取法的原理是：與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低；而且在一定溫度、pH值和離子強(qiáng)度下，引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同，因此，控制有機(jī)溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì)。對(duì)于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì)，可以用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑提取，它們有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性，是理想的提取液。雙水相萃取技術(shù)(Aqueous two phase extraction，ATPE)是指親水性聚合物水溶液在一定條件下形成雙水相，由于被分離物在兩相中分配的不同，便可實(shí)現(xiàn)分離，被廣泛用于生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化工等領(lǐng)域的產(chǎn)品分離和提取。采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白，受聚合物分子量及濃度、溶液pH值、離子強(qiáng)度、鹽類(lèi)型及濃度的影響[16]。程世賢等就利用反膠團(tuán)萃取法提取了大豆中的蛋白質(zhì)。它的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、樣品用量少。孫臣忠[17]等研究了聚丙烯酰胺電泳、等電聚焦電泳和等速提純電泳在分離純化蛋白質(zhì)中的應(yīng)用。帶有正電荷的為陰離子交換樹(shù)脂；反之為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。反之陽(yáng)離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì)，結(jié)合的蛋白可以通過(guò)逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來(lái)。它通常只需一步處理即可將目的蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中分離出來(lái)，并且純度相當(dāng)高。范繼業(yè)等利用殼聚糖親和層析提取的抑肽酶比活達(dá)到71 428，%。 影響冷凍脫脂的因素影響冷凍脫脂的因素主要有4個(gè)方面。二是結(jié)晶時(shí)間。但攪拌速度過(guò)大，則會(huì)打碎已經(jīng)形成的晶粒，也不利于結(jié)晶。 高速離心分離技術(shù) 離心分離簡(jiǎn)介離心分離(centrifugal separation)：借助于離心力，使比重不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的方法。對(duì)于兩相密度相差較小，黏度較大，顆粒粒度較細(xì)的非均相體系，在重力場(chǎng)中分離需要很長(zhǎng)時(shí)間，甚至不能完全分離。如果顆粒密度大于液體密度，則顆粒將沿離心力的方向而逐漸遠(yuǎn)離中心軸。它指采用低速和高速兩種離心方式交替使用，用不同強(qiáng)度的離心力使具有不同密度的物質(zhì)分級(jí)分離的方法。第二章 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)材料連翹花提取液，%；迎春花提取液：%；均為本實(shí)驗(yàn)室自備，于低溫冷藏備用。 提取液的高效液相色譜分析用高效液相色譜對(duì)純化后的溶液進(jìn)行分析，流動(dòng)相為乙腈：水(：)，柱溫為室溫，分離柱為C18；進(jìn)樣量20，檢測(cè)波長(zhǎng)為：迎春花；連翹花。 迎春花原液3℃降溫曲線(xiàn) 連翹花原液3℃降溫曲線(xiàn) 迎春花原液45℃升溫曲線(xiàn) 連翹花原液45℃升溫曲線(xiàn) 除雜前提取液吸收光譜的測(cè)定連翹花中主要含有連翹苷、連翹酯苷及黃酮類(lèi)成分，黃酮類(lèi)成分主要是槲皮素；迎春花含丁香甙、迎春花苷、及黃酮類(lèi)成分，黃酮成分主要是蘆丁。 提取液處理前后的紫外光譜分析。 迎春花對(duì)有機(jī)玻璃上色紫外光譜圖 連翹花對(duì)有機(jī)玻璃上色紫外光譜圖，除雜后染色效果加強(qiáng)。：經(jīng)除雜后的提取液光譜強(qiáng)大有較大的增強(qiáng)，提取液純度有較