【正文】 金針菇喜弱酸性環(huán)境條件，～。添加鎂離子和硫酸根離子后，菌絲生長(zhǎng)旺盛。金針菇為木腐菌，可利用多種氮源，其中以有機(jī)氮最好，如蛋白胨。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過低，不能滿足食用菌菌絲正常生長(zhǎng)需要，濃度過高則有抑制或殺菌作用。后續(xù)研究需要挑選出遺傳形狀穩(wěn)定的、富硒能力較高的菌絲體去栽培，為以后的深入研究子實(shí)體栽培實(shí)驗(yàn)提供保障。相比于固體菌種，液體菌種更加適合于大規(guī)模菌種生產(chǎn)，在縮短生產(chǎn)周期、提高復(fù)習(xí)效率方面有著重大的潛力。 展望 硒元素影響著人體的健康[17]。 針對(duì)液體發(fā)酵，在我們所測(cè)定的硒濃度梯度內(nèi)，金針菇在同一硒濃度梯度下的生長(zhǎng)速度與富硒能力基本能同時(shí)達(dá)到最佳值，并且達(dá)到生長(zhǎng)和富硒的最佳狀態(tài)時(shí)的硒濃度梯度一般都在20μg/L范圍內(nèi)。 固體、液體培養(yǎng)對(duì)金針菇生長(zhǎng)速率和富硒能力的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)表24 獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)Table 24. Independent samples t test項(xiàng)目類型樣本數(shù)均值P值富硒能力固體平板47液體發(fā)酵47由表24結(jié)合我在實(shí)驗(yàn)室記錄的金針菇固液培養(yǎng)的生長(zhǎng)速度的數(shù)據(jù)可知，液體發(fā)酵所培養(yǎng)的金針菇的富硒能力以及生長(zhǎng)速度極顯著的高于其對(duì)應(yīng)的固體平板所培養(yǎng)出來的金針菇。表22 紫外誘變前后菌絲體富硒能力的配對(duì)樣本t檢驗(yàn)Table 22. Paired samples t test for UVirradiation on the capability of the seaccumulating of the mycelium組別均值自由度P值對(duì)1對(duì)照組 誘變531對(duì)2對(duì)照組 誘變1031對(duì)3誘變5 誘變1031由表22可知，紫外誘變后，富硒能力下降，誘變時(shí)間越長(zhǎng)其富硒能力越差。其生長(zhǎng)速率是在含硒量為15μg/L的平板上達(dá)到峰值。綜合考慮菌種生長(zhǎng)速率、菌絲體富硒能力，因而較好的培養(yǎng)方案為配置含硒量為20μg/L的培養(yǎng)基培養(yǎng)白誘10菌絲體。在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力，出現(xiàn)了兩個(gè)峰值，分別為含硒量20和35μg/L的固體平板，但后者富硒能力顯著高于前者。其中在含硒量5μg/L的固體平板上培養(yǎng)的菌絲體的有機(jī)物消耗量值明顯高于含硒量20μg/L的固體平板。在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為25μg/L時(shí)達(dá)到峰值。表15 白色金針菇原種()在平板富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 15. Seaccumulated characteristics of white Flammulina velutipes () in the seleniumenriched plate medium養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK5101520253035———40注：每個(gè)硒濃度梯度下。在有機(jī)物消耗方面，出現(xiàn)了兩個(gè)峰值，分別為含硒量5和25μg/L的固體平板。表13 白色金針菇在平板富硒培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特性Table 13. Growth characteristics of white Flammulina velutipes in seleniumenriched plate culture medium 菌種類型培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌落直徑(cm)菌絲密度有機(jī)物消耗量(g)菌絲外觀菌絲直徑范圍(μm)白色金針菇原種CK+++較粗壯濃白~5++++粗壯濃白~10+++較粗壯濃白~15++較粗壯淡白~20+++較粗壯濃白~25+++較粗壯濃白~30+細(xì)絲狀~35—————40+++較粗壯濃白~白色金針菇誘變5min菌種CK+++較粗壯濃白~5++++粗壯濃白~10++++粗壯濃白~15++較粗壯淡白~20+++較粗壯濃白~25++較粗壯淡白~30++較粗壯淡白~35++較粗壯淡白~40+++較粗壯濃白~白色金針菇誘變10min菌種CK++較粗壯淡白~5++較粗壯淡白~10++++粗壯濃白~15+細(xì)絲狀~20+細(xì)絲狀~25+細(xì)絲狀~30+++較粗壯濃白~35++較粗壯淡白~40+細(xì)絲狀~表14 金針菇201在平板富硒培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特性Table 14. Growth characteristics of Flammulina velutipes 201 in seleniumenriched plate culture medium菌種類型培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌落直徑(cm)菌絲密度有機(jī)物消耗量(g)菌絲外觀菌絲直徑范圍(μm)金針菇201原種CK++++粗壯濃白~5++++粗壯濃白~10+++較粗壯濃白~15+++較粗壯濃白~20+++較粗壯濃白~25+++較粗壯濃白~30+細(xì)絲狀~35+細(xì)絲狀~40+細(xì)絲狀~金針菇201誘變5min菌種CK++++粗壯濃白~5+細(xì)絲狀~10+++較粗壯濃白~15+++較粗壯濃白~20+++較粗壯濃白~25+++較粗壯濃白~30+++較粗壯濃白~35+++較粗壯淡白~40+++較粗壯淡白~金針菇201誘變10min菌種CK++++粗壯濃白~5+++較粗壯濃白~10++++粗壯濃白~15+++ 較粗壯濃白~20+++ 較粗壯濃白~25++ 較粗壯淡白~30++ 較粗壯淡白~35—————40+ 細(xì)絲狀~ 金針菇在液體富硒培養(yǎng)基中的富硒特性由表15和圖9可知，白色金針菇原種在富硒CM固體平板上具有較強(qiáng)的富硒能力。其中在5μg/L的硒濃度時(shí)，該菌種生長(zhǎng)速度最慢，菌絲密度最低，菌絲外觀呈細(xì)絲狀。當(dāng)平板富硒濃度達(dá)到以及超過30μg/L的時(shí)候，菌絲的生長(zhǎng)受到了明顯的抑制，菌絲外觀也顯得瘦弱。在30μg/L的硒濃度時(shí)，菌絲生長(zhǎng)出現(xiàn)另外一個(gè)峰值，然后隨著硒濃度的提高，又呈減弱趨勢(shì)。白色金針菇誘變5min菌種，相比較其原種而言，它在耐硒能力上有了較為顯著的提高，菌落的直徑都比較大，并且有機(jī)物消耗量也較大，菌絲外觀都相對(duì)比較粗壯。本實(shí)驗(yàn)觀察了白色金針菇、金針菇201及其誘變菌株在液體富硒培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)特性，菌落形態(tài)十分明顯，輪廓鮮明，沒有雜菌菌落，透出淡淡的香味，表明培養(yǎng)基未被污染。將菌絲體使用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液進(jìn)行染色。利用紫外分光光度法測(cè)定了金針菇各個(gè)菌種各個(gè)硒濃度梯度下的富硒能力。本次實(shí)驗(yàn)為了探討金針菇各個(gè)菌種對(duì)硒的耐受能力，進(jìn)行了不同含硒量的平板上的培養(yǎng)，考察其相關(guān)生物學(xué)特性。較好的育種方案是選擇含硒量為5μg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)金針菇201誘變10min菌種菌絲體，此時(shí)其生長(zhǎng)速度、富硒能力和硒回收率都達(dá)到較為不錯(cuò)的水平。針對(duì)菌絲球干重，它也是在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，隨著硒濃度的提高而出現(xiàn)兩個(gè)峰值，在10和30μg/L時(shí)出現(xiàn)峰值，兩峰值大致相等。表11 金針菇201誘變10min菌種()在液體富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 11. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)生物量干重(g/100mL)菌絲體的吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)硒回收率（％）CK5101520253040注：每個(gè)硒濃度梯度下。可見適宜濃度的發(fā)酵液硒含量有助于金針菇201誘變5min菌種的生長(zhǎng)。圖7 金針菇201誘變5min菌種菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes () in different selenium concentration gradient由表10和圖7可知，金針菇201誘變5min菌種在富硒CM液體培養(yǎng)基上具有較強(qiáng)的富硒能力。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈下降趨勢(shì)。圖6 金針菇201原種菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes 201 in different selenium concentration gradient由表9和圖6可知，金針菇201原種在富硒CM液體培養(yǎng)基上具有較強(qiáng)的富硒能力。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈下降趨勢(shì)且較為明顯。在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為5μg/L時(shí)富硒能力最強(qiáng)，隨著硒濃度的增加呈下降趨勢(shì)，但不明顯。菌絲體干重在在5μg/L時(shí)達(dá)到了頂峰。在培養(yǎng)基含硒量為15μg/L時(shí)，富硒能力降到最低（%）。表6 白色金針菇菌種在液體富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table characteristics of white Flammulina velutipes in the Seleniumenriched medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)生物量干重(g/100mL)菌絲體的吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)硒回收率（％）CK5101520253040注：每個(gè)硒濃度梯度下?？梢姷蜐舛鹊陌l(fā)酵液硒含量有助于白色金針菇原種的生長(zhǎng)及其富硒能力的提高。在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力隨著硒濃度的增加而增強(qiáng)，在培養(yǎng)基硒含量為20μg/L時(shí)富硒能力最強(qiáng)。表4 金針菇201原種及其誘變菌株在液體富硒培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特性Table 3. The growth characteristics of the Flammnlina velutipes 201 and its mutant strains in Se accumulating liquid training medium菌種培養(yǎng)液滅菌發(fā)酵出瓶菌絲球過濾后生物量類型硒濃度(μg/L)前pH值終點(diǎn)pH值總體積(mL)直徑(mm)余液(mL)干重(g/100mL)金針菇201原種CK87～73588～751088～811591～832088～832590～793090～804092～87金針菇201誘變5minCK89～81588～801089～8215—————2091～822588～793089～794088～80金針菇201誘變10minCK92～87589～831087～791592～8520—————2587～803089～814088～84注:1)搖瓶體積250mL,裝液量為100mL。菌絲球基本呈現(xiàn)球狀，例如星球狀、微球狀、橢球狀、圓柱狀等。圖2：測(cè)定硒的標(biāo)準(zhǔn)曲線:Determination of selenium standard curve