核酸的組成與結(jié)構(gòu)ppt課件-wenkub.com
2025-05-09 05:10 本頁(yè)面
【正文】 3. 簡(jiǎn)核酸提取與純化方法及其注意事項(xiàng)。 十二烷基肌酸鈉： 可使核糖體蛋白質(zhì)與 RNA分子分離。不能高壓滅菌的溶液，用 DEPC處理過(guò)的無(wú) RNA酶的三蒸水配制，用濾膜過(guò)濾除菌。 50 ３．真核細(xì)胞 RNA的提取純化 （１）注意事項(xiàng) 一個(gè)典型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞約含 105μgRNA，其中 80~85%為rRNA， mRNA為細(xì)胞總 RNA的 1~5%。 ２．核酸的沉淀 （１）原理：核酸與鈉、鉀、鎂形成的鹽在許多有機(jī)溶劑中不溶，也不會(huì)變性。 49 十、核酸的提取 １．核酸的酚抽提 （１）原理：交替使用酚、氯仿兩種蛋白質(zhì)變性劑，更有效去除蛋白質(zhì)。 ２．可與 mRNA配對(duì)結(jié)合形成雙鏈，最終抑制 mRNA作為模板進(jìn)行翻譯。 47 七、核內(nèi)不均一 RNA（ hnRNA） 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄生成 mRNA的前體；加工過(guò)程包括： 5′加帽； 3′端加尾；內(nèi)含子的切除和外顯子的拼接；分子內(nèi)部的甲基化修飾作用；核苷酸序列的編輯作用。 44 原核生物 70S核糖體 真核生物 80S核糖體 核糖體的結(jié)構(gòu) 45 六、核酶：有催化活性的 RNA １．核酶的發(fā)現(xiàn) 1982年，美國(guó) Thomas Cech 在研究四膜蟲(chóng) rRNA自我剪接時(shí)發(fā)現(xiàn)，同時(shí)加拿大的 Sidney Altman 發(fā)現(xiàn)RNase P分子中的 RNA組分有催化活性； 1989年分享了 Noble 化學(xué)獎(jiǎng)。 （ 4）分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。 (3)一般沒(méi)有修飾堿基。 36 3． tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)： 倒“ L”形，所有的 tRNA折疊后形成大小相似及三維構(gòu)象相似的三級(jí)結(jié)構(gòu)，這有利于攜帶的氨基酸的tRNA進(jìn)入核糖體的特定部位。 （ 2） rRNA：?jiǎn)捂?RNA自行盤繞形成局部雙螺旋的多“莖”多“環(huán)”結(jié)構(gòu)，螺旋部分稱為“莖”或“臂”非螺旋部分稱為“環(huán)”，在螺旋區(qū)， A與 U配對(duì)， G與 C配對(duì)。 c. 染色體的形成過(guò)程：一級(jí)結(jié)構(gòu)（核小體，直徑 10nm）、二級(jí)結(jié)構(gòu)（螺線體，直徑 30nm）、三級(jí)結(jié)構(gòu)（超螺線體，直徑400nm）、四級(jí)結(jié)構(gòu)（染色體，直徑 1000nm）， DNA雙螺旋進(jìn)一步扭曲盤旋所形成的特定空間結(jié)構(gòu)。很多分離或鑒定閉合環(huán)超螺旋形 DNA的方法都是依據(jù)其特性而設(shè)計(jì)的。 c. DNA超螺旋是由 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶產(chǎn)生的。 c. 溴化乙錠（ ethidium bromide）能與 DNA緊密結(jié)合，使DNA的密度降低；它插入 DNA分子堿基對(duì)之間，引起 DNA分子松旋，隨著 EB量的增加，負(fù)超螺旋 DNA就轉(zhuǎn)變?yōu)樗沙趹B(tài)； EB的進(jìn)一步增加， DNA就轉(zhuǎn)變?yōu)檎菪?W為變量，可以是非整數(shù)，右手螺旋時(shí)， W取負(fù)值。 L是整數(shù)，在不發(fā)生鏈斷裂時(shí)其值為常數(shù)，右手螺旋對(duì) L取正值。 b. 負(fù)超螺旋： 如果在繩子一端向松纏方向旋轉(zhuǎn)，再將繩子兩端連接起來(lái)，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)右旋的超螺旋，以解除外加的旋轉(zhuǎn)所造成的脅變，這樣的超螺旋稱負(fù)超螺旋。 b. 有些單鏈環(huán)形染色體（如 φx174）或雙鏈線形染色體（如噬菌體 ?），在其生活周期的某一階段，染色體也變?yōu)槌菪Y(jié)構(gòu)。 三鏈 DNA既可以是 BDNA與另一條 DNA鏈結(jié)合成的鏈間的三鏈 DNA，又可以是 BDNA與其自身的一條鏈結(jié)合形成的鏈內(nèi)的三鏈 DNA。 5 ′GGAATCGATCTTTTCTAGCTAAGG 3 ′ 3′ CCTTAGCTAGAAAAGATCGATTCC 5′ 16 17 （ 5） DNA三股螺旋（ triple strands DNA， HDNA， tsDNA）： 1957年由 Felesnfeld及 Davis首先發(fā)現(xiàn)。此序列各單股中沒(méi)有互補(bǔ)序列，不能形成十字型或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。即對(duì)稱軸一側(cè)的片段旋轉(zhuǎn) 180176。 BDNA： 為 DNA在生理狀態(tài)下的構(gòu)型，右手雙螺旋構(gòu)型（沃森和克里克模型），每螺旋為 10個(gè)核苷酸對(duì)。 （左一：威爾金斯，左三：克里克左五： 沃
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