【正文】 小分子在顆粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿 來(lái)穿去 ,歷程長(zhǎng) ,后洗脫下來(lái) ,洗脫體積大 . 3 密度梯度離心 (density gradient centrifugation) 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 95 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (三 )根據(jù) 電離性質(zhì) 不同的分離方法 電泳法和離子交換層析 :帶電顆粒在電場(chǎng)中向著所帶電荷相反方向移動(dòng)稱為電泳 . 原理 :不同的蛋白質(zhì)因結(jié)構(gòu)、形狀和帶電量的不同而有不同的泳動(dòng)速度 ,從而可以進(jìn)行分析和分離 . 分類：根據(jù)支持物的不同，可分為：薄膜電泳，凝膠電泳 . 96 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University a)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法 (SDSPAGE) SDS:十二烷基硫酸鈉 ,變性劑 普通蛋白質(zhì)電泳的泳動(dòng)速率取決于荷質(zhì)比 : 凈電荷 ,大小 ,形狀 用 SDS和巰基乙醇 (打開二硫鍵 )處理 蛋白質(zhì)變性并與 SDS結(jié)合 ,形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物 ,使蛋白質(zhì)分子均帶負(fù)電 . SDS/1g 此方法只能測(cè)得 亞基肽鏈的相對(duì)分子質(zhì)量 97 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 十二烷基硫酸鈉 Sodium dodecyl sulfate 分子式： CH3(CH2)11OSO3Na 分子量： C12H25NaO4S= 性狀：白色或淺黃色結(jié)晶或粉末 . 熔點(diǎn)： 180℃ （分解） . 十二烷基磺酸鈉 Sodium dodecyl sulfonate 分子式： CH3(CH2)11SO3Na 分子量： C12H25NaO3S= 性狀：白色或淺黃色結(jié)晶或粉末 . 熔點(diǎn)： 300℃ . 98 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 水平式電泳裝置 垂直式電泳裝置 99 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University b） 等電點(diǎn)聚焦電泳 （ IFE） ：形成 pH梯度 ,不同蛋白質(zhì)聚集到各自等電點(diǎn)位置 . 100 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University C 雙向電泳 第一向 ： 等電聚焦電泳 第二向 ： SDSPAGE 雙向電泳后的凝膠經(jīng)染 色后蛋白呈現(xiàn)二維分布圖： 水平方向反映出蛋白在pI上的差異， 垂直方向反映出它們?cè)诜肿恿可系牟顒e . H b AH b S 胰 蛋 白 酶 2 8 肽 段2 8 肽 段 雙 向 電 泳 層 析101 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (Ionexchange chromatography) 常用的陽(yáng)離子交換劑為羧甲基纖維素 (CMC) 陰離子交換劑為二乙氨基乙基纖維素 (DEAEC) 102 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (Ionexchange chromatography) 常用的陽(yáng)離子交換劑為羧甲基纖維素 (CMC) 陰離子交換劑為二乙氨基乙基纖維素 (DEAEC) 103 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (四 )根據(jù) 配基特異性 的分離純化方法 親和層析法 (affinity chromatography):蛋白質(zhì)和 相應(yīng)配基的親和力具有高度特異性和可逆性特點(diǎn) . 抗原、 Protein A和抗體，酶與底物等 . 104 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 二、蛋白質(zhì)的純度的鑒定 高壓液相層析法 (HPLC) 高壓毛細(xì)管電泳法 (HPCE) 放射免疫分析 (RIA) 酶標(biāo)記免疫分析法 (ELISA) －末端測(cè)序 105 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 三、分子量測(cè)定的方法 根據(jù)氨基酸的數(shù)目 20種氨基酸的平均分子量為 128 肽鍵個(gè)數(shù) =縮合失水分子數(shù) =氨基酸分子總個(gè)數(shù)－肽鏈條數(shù) 已知 20種氨基酸的平均分子量是 128，現(xiàn)有一蛋白質(zhì) 分子由兩條多肽鏈組成，共有肽鍵 98個(gè) ,問(wèn)此蛋白質(zhì) 的分子量最接近于（ ） 11036 106 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 較精確測(cè)定分子量的主要方法有超速離心法、 分子篩層析法、 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳、生物質(zhì)譜法 等 . 107 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University a）超速離心法 高速離心力作用下 ,蛋白質(zhì)分子會(huì)沿旋轉(zhuǎn)中心向外周 方向移動(dòng) ,用光學(xué)方法測(cè)定界面移動(dòng)的速度即為蛋白 質(zhì)的離心沉降速度 .蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和 形狀有關(guān) . 沉降系數(shù) 是溶質(zhì)顆粒在單位離心場(chǎng)中的沉降速度 ,用 s表示 .一個(gè) s單位為 1 1013秒 108 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 相對(duì)分子質(zhì)量越大 ,s值越大 蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)： 1～ 200s 由沉降系數(shù) s可根據(jù)斯維得貝格 〔 Svedberg〕 方程計(jì)算蛋白質(zhì)分子的相對(duì)分子質(zhì)量： 109 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University b)分子篩層析法 ,也叫凝膠過(guò)濾法 所用介質(zhì)為 凝膠珠 ,其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) . 一定型號(hào)的凝膠網(wǎng)孔只允許相應(yīng)大小的分 子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部 ,大分子則被排阻在外 . 洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來(lái) , 洗脫液體積小 。2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 第二章 蛋白質(zhì)的化學(xué) 蛋白質(zhì) (protein):是由許多不同的 α 氨基酸按一定的序列通過(guò)酰胺鍵 (肽鍵 )縮合而成的 ,具有較穩(wěn)定的構(gòu)象和一定生物功能的大分子 . 蛋白質(zhì)存在于所有的生物細(xì)胞中 ,是構(gòu)成生物體最基本的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和功能物質(zhì) . 第一節(jié) 蛋白質(zhì)簡(jiǎn)介 1 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University : 蛋白質(zhì)是細(xì)胞中含量最豐富的高分子有機(jī)化 合物 . 占人體總干重的 45%,細(xì)菌占 5080%, 干酵母 47%,高等植物大豆含 40% 2 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 1）球狀蛋白：不對(duì)稱常數(shù)接近 1，功能蛋白 2）纖維狀蛋白：不對(duì)稱常數(shù)大于 10,結(jié)構(gòu)蛋白 3）橢圓形：對(duì)稱常數(shù)介于中間 3. 蛋白質(zhì)分子的大小 蛋白質(zhì)是分子量很大的生物分子 ,相對(duì)分子質(zhì)量一般大于 1 4 107(煙草花葉病毒 )．變化范圍非常大 . 3 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)過(guò)程中有重要的作用： ① 生物催化 , 酶類，已知的有 3000種以上 ② 代謝調(diào)節(jié) ， 部分激素 ③ 免疫保護(hù) ， 抗體、干擾素 ④ 物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存 ， 載體蛋白 ⑤ 運(yùn)動(dòng)與支持 ， 肌肉、骨骼、鞭毛 ⑥ 控制生長(zhǎng)和分化 ， 基因表達(dá)調(diào)控 ⑦ 接受和傳遞信息 ， 配體和受體 ⑧ 構(gòu)成生物膜 . 4 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 蛋白質(zhì)是一類含 氮 有機(jī)化合物 .某些蛋白質(zhì)還含有微量元素 ,主要是 P、 Fe、 Cu、 Zn、 I等 . 5 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University N的含量平均為 16%： 凱氏 (Kjadehl)定氮法 的理論基礎(chǔ) 蛋白質(zhì)的含量 =蛋白質(zhì)的含氮量 100/16=蛋白質(zhì)的含氮量 6 2022年 5月 30日 8時(shí) 54分 煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)分為一級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié) 構(gòu) (二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu) ). 一