【正文】 缺點(diǎn)：① 缺乏轉(zhuǎn)錄后加工機(jī)制，只能表達(dá)克隆cDNA，不宜表達(dá)真核基因組DNA，② 缺乏適當(dāng)?shù)姆g后加工機(jī)制，表達(dá)真核蛋白質(zhì)不能形成適當(dāng)折疊或進(jìn)行糖基化修飾；③ 很難表達(dá)大量的可溶性蛋白等2. 真核表達(dá)系統(tǒng)216。 P1人工染色體(PACs)：噬菌體P1，需要體外包裝盒轉(zhuǎn)導(dǎo)，供體DNA約100kb,用于大基因組分析216。→339。既具有切割位點(diǎn)的專一性, 也具有識(shí)別位點(diǎn)的專一性, 一般在識(shí)別序列內(nèi)切割 Ⅲ型：作用方式同Ⅱ型Ⅱ型限制性核酸內(nèi)切酶★①識(shí)別dsDNA中含４8個(gè)相連的堿基對(duì)組成的特定回文序列②斷裂后形成的DNA片段具有互補(bǔ)堿基的單鏈延伸末端（粘性末端）或平末端DNA連接酶封閉DNA鏈上缺口酶，借助能量催化DNA鏈的5′PO4與另一DNA鏈的3′OH生成磷酸二酯鍵。通過(guò)和靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）降解mRNA或阻礙其翻譯。 每隔6個(gè)氨基酸就有一個(gè)亮氨酸殘基252。 也稱為同源結(jié)構(gòu)域，參與個(gè)體發(fā)育② 鋅指結(jié)構(gòu)(zinc finger) 252。反式作用因子★1概念：也稱為轉(zhuǎn)錄因子(TF)，是一類細(xì)胞核內(nèi)蛋白因子，通過(guò)與順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的活性。216。 基因擴(kuò)增：在細(xì)胞中某些基因的拷貝數(shù)專一性大量增加，并在短期內(nèi)產(chǎn)生大量的基因產(chǎn)物以滿足生長(zhǎng)發(fā)育的需求216。（CAP—分解代謝物基因活化蛋白）★乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié) —— 可誘導(dǎo)調(diào)控1) 無(wú)乳糖存在時(shí)，阻遏物可以結(jié)合在操縱基因上 → 阻止轉(zhuǎn)錄過(guò)程 → 基因關(guān)閉；2）有乳糖存在時(shí)，乳糖→半乳糖與阻遏物結(jié)合→阻遏物變構(gòu) → 阻遏物不能結(jié)合操縱基因 → 轉(zhuǎn)錄進(jìn)行 → 基因開(kāi)放?？勺瓒舨倏v子：調(diào)節(jié)合成代謝的操縱子。是由若干功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和控制這些基因表達(dá)的元件組成的一個(gè)完整、連續(xù)的功能單位★操縱子的基本組成1. 結(jié)構(gòu)基因：能通過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯使細(xì)胞產(chǎn)生一定的酶系統(tǒng)和結(jié)構(gòu)蛋白 2. 操縱基因：控制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄速度，位于結(jié)構(gòu)基因的附近，本身不能轉(zhuǎn)錄成mRNA 3. 啟動(dòng)基因P：位于操縱基因的附近，它的作用是發(fā)出信號(hào)，mRNA合成開(kāi)始，該基因也不能轉(zhuǎn)錄成mRNA4. 調(diào)節(jié)基因：可調(diào)節(jié)操縱基因的活動(dòng)，調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物為阻遏物或激活物。分為可誘導(dǎo)的正調(diào)控和可阻遏的正調(diào)控?！镯樖阶饔迷号c相關(guān)基因處于同一DNA分子上，能起調(diào)控作用的DNA序列。在細(xì)胞內(nèi)幫助其他含多肽的結(jié)構(gòu)完成正確的組裝，且在組裝完畢后與之分離，不構(gòu)成這些蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)執(zhí)行功能時(shí)的組份 作用1. 蛋白合成開(kāi)始時(shí)，防止新生肽鏈在未完成折疊之前相互聚合，幫助蛋白質(zhì)獲得最初的正確結(jié)構(gòu)2. 封閉所暴露出來(lái)的疏水區(qū)段，為蛋白質(zhì)折疊創(chuàng)造無(wú)干擾的隔離環(huán)境3. 識(shí)別錯(cuò)誤折疊的變性新蛋白，幫助復(fù)性或使其降解分子伴侶的分類及作用1. ★應(yīng)激蛋白70家族（heatshock protein 70）：參與蛋白質(zhì)的從頭折疊、跨膜運(yùn)輸、錯(cuò)誤折疊多肽的降解及其調(diào)控過(guò)程2. ★伴侶素系統(tǒng)（chaperonin system）:具有獨(dú)特的雙層環(huán)狀結(jié)構(gòu)的寡聚蛋白，以依賴ATP的方式為非自發(fā)性折疊蛋白質(zhì)提供能折疊形成天然空間構(gòu)象的微環(huán)境翻譯后的加工修飾（二）剪切和剪接加工1. 新生肽鏈N端fMet或Met的切除2. 剪切— 直接從新生肽鏈上除去不等的氨基酸殘基① 分泌型蛋白的信號(hào)肽的切除② 前體蛋白加工：切除前體蛋白的一端肽段；去除蛋白內(nèi)含子③ 活性肽的剪切釋放：一條已合成的多肽鏈經(jīng)翻譯加工后生成不同活性的蛋白質(zhì)或多肽3. 剪接— 蛋白質(zhì)前體通過(guò)多肽剪除某些氨基酸片段，再以一定的順序結(jié)合起來(lái)生成成熟有活性的蛋白質(zhì)（三）添加化學(xué)基團(tuán)（化學(xué)編輯）1. 蛋白質(zhì)的脂?；；D(zhuǎn)移酶催化脂肪酸與肽鏈中的Ser的羥基以酯鍵結(jié)合，使新生的蛋白脂?；?. 蛋白質(zhì)的糖基化——①使蛋白質(zhì)能夠抵抗消化酶的作用 ②賦予蛋白質(zhì)傳導(dǎo)信號(hào)的功能 ③某些蛋白只有在糖基化之后才能正確折疊 蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)1. 核孔運(yùn)輸—胞質(zhì)中合成的蛋白質(zhì)穿過(guò)胞核內(nèi)外膜形成的核孔進(jìn)入細(xì)胞核2. 跨膜運(yùn)輸—胞質(zhì)中合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、葉綠體和過(guò)氧化物酶體等通過(guò)跨膜機(jī)制進(jìn)行運(yùn)輸?shù)?。起始密碼： AUG終止密碼： UAA、UAG、UGA★遺傳密碼的性質(zhì)1. 簡(jiǎn)并性：指一個(gè)氨基酸具有2個(gè)或2個(gè)以上的密碼子2. 擺動(dòng)性：密碼子與反密碼子配對(duì)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不遵從堿基配對(duì)規(guī)律的情況，稱為遺傳密碼的擺動(dòng)現(xiàn)象3. 通用性：除個(gè)別細(xì)胞器的特殊密碼子外，蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從簡(jiǎn)單生物到人類都通用4. 偏愛(ài)性：密碼子使用頻率的差異5. 連續(xù)性：mRNA的讀碼方向從539。第Ⅳ內(nèi)含子的剪接— tRNA的剪接結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 1）位置相同，都在反密碼子環(huán)的下游3’； 2）內(nèi)含子和反密碼子配對(duì)形成莖環(huán)。b、 AATAA序列是加polyA尾信號(hào)。多順?lè)醋觤RNA在RnaseⅢ的催化下裂解為單個(gè)的順?lè)醋?，rRNA的加工： ① 的rRNA有三種：16S，23S和5S。②終止既需DNA上可識(shí)別的終止序列，也需RNA產(chǎn)物的發(fā)夾結(jié)構(gòu)③兩類終止子：依賴與不依賴ρ因子的終止子真核生物的轉(zhuǎn)錄1 三種RNA pol識(shí)別不同啟動(dòng)子。2．由170 ～ 107位序列組成，稱為上游調(diào)控元件，能有效地增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄效率3．轉(zhuǎn)錄成rRNA RNA聚合酶Ⅲ啟動(dòng)子、tRNA和某些snRNA2 .5S rRNA和tRNA基因的啟動(dòng)子是內(nèi)部啟動(dòng)子(internal promoter)位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的下游 ，都由兩部分組成，位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子1 起始子：轉(zhuǎn)錄起始的第一個(gè)堿基多為A,兩側(cè)各有若干嘧啶核苷酸2 TATA box： 25~ 35區(qū)含TATA序列，是轉(zhuǎn)錄因子與DNA分子結(jié)合的部位，使轉(zhuǎn)錄精確地起始 3 CAAT 框：70 ~ 80區(qū)含CCAAT序列，控制轉(zhuǎn)錄起始的頻率 4 GC box：80 ~ 110區(qū)含有GCCACCC或GGGCGGG序列，控制轉(zhuǎn)錄起始的頻率增強(qiáng)子(enhancer)：使和它相連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列①增強(qiáng)效應(yīng)明顯但與位置和取向無(wú)關(guān)②核心序列：TGTGGGTTTGG ③沒(méi)有基因?qū)Ｒ恍缘袊?yán)密的組織和細(xì)胞特異性④許多增強(qiáng)子還受外部信號(hào)的調(diào)控終止子(terminator) ：DNA分子中終止轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列 。復(fù)制后DNA在短期內(nèi)（數(shù)分鐘）為半甲基化的GATC序列，一旦發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配堿基，即將未甲基化鏈切除一段包含錯(cuò)誤堿基的序列，并以甲基化的鏈為模板進(jìn)行修復(fù)2損傷修復(fù) ①光復(fù)活修復(fù) ②甲基轉(zhuǎn)移酶 ③切除修復(fù)3復(fù)制后修復(fù) (postreplication repair)①大腸桿菌的重組修復(fù)系統(tǒng)②SOS修復(fù)：DNA分子受損傷的范圍較大，在復(fù)制受到抑制時(shí)出現(xiàn)的一種應(yīng)急修復(fù)作用 第五章 轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工★轉(zhuǎn)錄:生物體以DNA為模板,在RNA聚合酶催化下合成互補(bǔ)的RNA分子的過(guò)程轉(zhuǎn)錄單位(transcription unit):從啟動(dòng)子到終止子，被轉(zhuǎn)錄成單個(gè)RNA分子的一段DNA序列★復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的相同點(diǎn)1都以DNA為模板2原料為核苷酸3合成方向均為5′→3′方向4都需要依賴DNA的聚合酶5遵守堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)律6產(chǎn)物為多聚核苷酸鏈★復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別作為RNA合成模板的鏈稱為反意義鏈(模板鏈/負(fù)鏈)；與其互補(bǔ)的鏈稱有意義鏈(編碼鏈/正鏈)原核生物RNA聚合酶(RNA polymerase )全酶 = 核心酶（α2ββ’）+ σ因子1, α亞基決定轉(zhuǎn)錄的基因2, β亞基在5’ →3’方向上延長(zhǎng)多核苷酸鏈3, β’亞基結(jié)合DNA模板4, σ因子識(shí)別“啟動(dòng)子”并與之結(jié)合真核的RNA聚合酶酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物鵝膏蕈堿敏感性RNA聚合酶Ⅰ大部分rRNA不敏感RNA聚合酶ⅡhnRNA 敏感RNA聚合酶ⅢtRNA、5srRNA 、snRNA前體中度敏感★啟動(dòng)子：RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的一段高度保守性DNA序列★原核生物啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)216。引起該位點(diǎn)以后的遺傳信息出現(xiàn)異常。岡崎片段：DNA合成過(guò)程中，后隨鏈的合成是不連續(xù)的進(jìn)行的，先合成許多片段，最后各段再連接成為一條長(zhǎng)鏈，這些小的片段稱為岡崎片段原核生物的DNA復(fù)制★復(fù)制原點(diǎn)(Ori C) ⑴245bp的DNA序列 ⑵富含AT ⑶3個(gè)13聚體的回文結(jié)構(gòu) ⑷4個(gè)9聚體的重復(fù)序列⑸重復(fù)序列緊鄰啟動(dòng)子 ⑹起到轉(zhuǎn)錄激活作用 復(fù)制的延伸★1. 先導(dǎo)鏈(leading strand) 合成：以3’ →5’親本鏈為模板，由引發(fā)體合成引物，DNA聚合酶Ⅲ催化以5’→3’合成一條完整的新鏈★2．后隨鏈(lagging strand) 合成：引物RNA合成→DNA pol Ⅲ→合成岡崎片段→ DNA pol I切除岡崎片段上的RNA引物→由DNA連接酶連接兩個(gè)岡崎片段→形成完整的DNA后隨鏈 DNA復(fù)制的終止 DNA具有終止位點(diǎn)(ter)，與蛋白質(zhì)Tus結(jié)合，阻止解鏈酶活性而終止復(fù)制真核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)1．DNA復(fù)制時(shí)要克服核小體結(jié)構(gòu)的空間阻礙，復(fù)制叉前進(jìn)速度慢2．真核生物多起點(diǎn)復(fù)制3．自主復(fù)制序列(ARS)，核心序列為： 5′ATTTATRTTA3′4．DNA聚合酶有5種，分別負(fù)責(zé)先導(dǎo)鏈和后隨鏈的合成5．真核細(xì)胞內(nèi)引物酶與polA緊密偶聯(lián)，原核細(xì)胞引發(fā)酶和解旋酶偶聯(lián)在一起形成復(fù)制體的一部分6．真核細(xì)胞的復(fù)制起始點(diǎn)和復(fù)制子的大小在不同的發(fā)育時(shí)期會(huì)發(fā)生改變7．真核生物在完成全部復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能再開(kāi)始；8．DNA的延長(zhǎng)取決于增殖細(xì)胞核抗原(PCNA) 真核細(xì)胞DNA復(fù)制的終止真核細(xì)胞DNA末端的復(fù)制即端粒結(jié)構(gòu)的形成端粒是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合體端粒DNA由多個(gè)串聯(lián)的58bp寡核苷酸序列組成端粒DNA的合成1端粒酶是反轉(zhuǎn)錄酶，由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成，它以自身的RNA為模板，在后隨鏈模板DNA的3’OH末端延長(zhǎng)DNA2再以這種延長(zhǎng)的DNA為模板，繼續(xù)合成后隨連形成端粒結(jié)構(gòu)★端粒的功能和特點(diǎn)1保證線性DNA的完整復(fù)制2保護(hù)染色體末端不受核酸酶水解和不發(fā)生染色體的異常重組3體細(xì)胞端粒酶活性低4隨著復(fù)制次數(shù)的增加端粒DNA逐步縮短，細(xì)胞組建停止分裂，進(jìn)而進(jìn)入凋亡5惡性腫瘤細(xì)胞可表達(dá)端粒酶，永生分裂單鏈環(huán)狀DNA的復(fù)制φX174噬菌體由一個(gè)單鏈環(huán)狀DNA組成，這條鏈稱為正（+）鏈；合成的互補(bǔ)鏈稱為負(fù)（一）鏈?！?39。 1 F質(zhì)粒：攜帶有負(fù)責(zé)接合轉(zhuǎn)移的基因即編碼形成性纖毛的基因和 DNA 復(fù)制的基因 2 R質(zhì)粒(resistant plasmid )：由決定抗性轉(zhuǎn)移因子的DNA和決定抗性因子的DNA做成，含有對(duì)抗生素的抗性基因又稱抗藥性質(zhì)粒。3保守型轉(zhuǎn)座(Conservative transposition)①非復(fù)制轉(zhuǎn)座的一種 ②類似于入噬菌體的整合作用,轉(zhuǎn)座因子都比較大③轉(zhuǎn)座的往往不只是轉(zhuǎn)座因子自身，而是連同宿主的一部分DNA一起轉(zhuǎn)座 ④轉(zhuǎn)座子從供體上切下然后插入靶位點(diǎn)，供體恢復(fù)原狀 逆轉(zhuǎn)錄病毒和逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子1逆轉(zhuǎn)錄病毒—RNA病毒。通過(guò)轉(zhuǎn)錄合成mRNA，再逆轉(zhuǎn)錄合成新的元件整合到基因組中完成轉(zhuǎn)座 轉(zhuǎn)座子的分類和結(jié)構(gòu)特征1插入序列( insertion sequence，IS):最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，不含有任何宿主基因 （1）含短的末端反向重復(fù)序列。②衛(wèi)星DNA：一般較短，采用密度梯度離心后，分布于DNA主帶的旁邊，參與復(fù)制水平的調(diào)節(jié)、表達(dá)的調(diào)控、參與染色體配對(duì)中度重復(fù)序列：重復(fù)次數(shù)在10～105，散布于基因組中。5癌基因:人類或其他動(dòng)物細(xì)胞（以及致癌病毒）固有的一類基因，又稱轉(zhuǎn)化基因。是DNA長(zhǎng)鏈上一個(gè)由特定核苷酸組成并具有特定遺傳功能的片段，包括編碼蛋白質(zhì)或RN