【正文】 免疫化學法 樣品中的黃曲霉毒素 B1經(jīng)提取、脫指、濃縮后與定量特異性抗體反應，多余的游離抗體則與酶標板內(nèi)的包被抗原結合，加入酶標記物和底物后顯色，與標準物產(chǎn)生的顏色比較測定含量。然后再用丙酮氯仿混合液做縱向展開，黃曲霉毒素 B1所在位置的雜質底色大大減少，因而有利于觀察。 薄層色譜法： （ 1）單向展開法：樣品中的黃曲霉毒素 B1經(jīng)提取、濃縮和用單向展開法在薄層上分離后，在 365nm紫外線照射下產(chǎn)生藍紫色熒光。 黃曲霉的基本結構： 黃曲霉毒素是一類結構相似的化合物，其基本結構都有二呋喃和香豆素。 ⑥載氣：常以高純氮（含氮 %）為載氣，流速 50150ml/min。 ②檢測器：常用電子捕獲檢測器。 展開劑：丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)已烷等。 ? 柱層析分離：常用吸附劑有弗羅里硅土（ Florisil）、 CeliteNuchar、硅膠、氧化鋁、活性炭等。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 三、農(nóng)藥殘留量的測定 殘留農(nóng)藥的提取 ?提取溶劑： ? 有機氯類農(nóng)藥：常用正已烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶劑常用正已烷（或石油醚） — 丙酮、乙腈 — 水等。 第三節(jié) 特殊雜質檢查方法 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 一、對中藥材及中藥制劑進行農(nóng)藥殘留量檢查的必要性 中藥材有相當數(shù)量為人工栽培，為提高藥材產(chǎn)量，減少昆蟲、真菌和霉菌的危害，在生產(chǎn)過程中常噴灑農(nóng)藥。 第三節(jié) 特殊雜質檢查方法 烏頭酯型生物堿的檢查 （ 1）制川烏中酯型生物堿的檢查 — 比色法 雙酯型生物堿在堿性條件下與鹽酸羥胺反應，生成 異羥肟酸 ，再與三價鐵離子反應，生成紅色的異羥肟酸鐵，在 520nm波長處有特征吸收，因此在此波長處測定其吸收，從而算出濃度而控制制川烏的毒性成分含量。 例：大黃流浸膏中土大黃苷的檢查 取本品適量，加甲醇 2 ml，溫浸 10分鐘，放冷，取上清液 10181。供試品色譜中，不得顯與對照藥材完全相一致的斑點。 ②人參為五加科植物人參 Panax ginseng 根，主要含各種人參皂苷（ R0、 Ra、 Rb Rb Rc、 Rd、 RgRg Rh Rh Rh3等）其中所含人參皂苷以 Rg1含量最高。 中藥制劑在生產(chǎn)和貯存過程中，由于各種藥品的來源不同、制備方法不同、劑型不同，即使同一個品種也可以采取不同的工藝路線，而且藥品在貯存過程中也可能有不同分解變化的產(chǎn)物。 進行新藥研制、必須做重金屬、砷鹽等有害物質的考察。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含酸不溶性灰分的含量（ %）。 酸不溶性灰分 中藥經(jīng)高溫熾灼得到的總灰分加鹽酸處理，得到不溶于鹽酸的灰 分，稱為酸不溶性灰分。 5. 具有揮發(fā)性的無機成分中藥受熱揮發(fā)或分解，殘留非揮發(fā)性雜質，也可用熾灼殘渣法檢查。由于熾灼殘渣限量一般在 %～ %，所以取樣量一般為 1～ 2g左右。 四、水分測定法 （二）注意事項 五、熾灼殘渣檢查法 熾灼殘渣（英國藥典稱為硫酸灰分）： 中藥多由有機化合物組成，有機物經(jīng)熾灼炭化，再加硫酸濕潤 ,加熱使硫酸蒸氣除盡后，于高溫（ 700～ 800℃ ）熾灼至完全灰化，使有機質破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質逸出，殘留的非揮發(fā)性無機雜質（多為金屬的氧化物或無機鹽類）成為硫酸鹽。②含水量的計算采用外標法。 2. 甲苯法中，為減少因甲苯與微量水混溶引起水分測定結果偏低，在測定前，甲苯需先加少量水，充分振搖使達飽和后放置，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后方可使用。檢讀水量，并計算供試品中含水量（ %）。 氣相色譜法 適用于各類型中藥制劑中微量水分的精密測定 四、水分測定法 （一）測定方法 甲苯法 適用于含揮發(fā)性成分的藥品 取供試品適量（約相當于含水量 1～ 4ml）精密稱定，置 A瓶中，加甲苯約 200ml，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿 B管的狹細部分。 干燥失重測定法除測定水分外尚含有揮發(fā)成分，而水分測定僅僅是測定供試品中的水分。 三、干燥失重測定法 注意事項 （ 5） 如供試品未達到規(guī)定的干燥溫度即融化時，應先將供試品置較低的溫度下干燥至大部分水分除去后，再按規(guī)定條件干燥。 （ 3） 鋪設的厚度 應將供試品平鋪在扁形稱量瓶中，厚度不可超過 5mm，如為疏松物質，厚度不可超過 10 mm。 2℃ 干燥 2~4小時，再稱至恒重為止。 水分又可分為必要的水分： 即結晶水或組成水分；不必要的水分，即附著水分或吸留的水分。 二、砷鹽檢查法 二、砷鹽檢查法 3. 注意事項： （ 1）有機堿液的選擇 該法需要加入一定量的有機堿以中和反應中的二乙基二硫代氨基甲酸。 A s H 3 C 2 H 5NSS HC 2 H 5CSSA g A g6 3+ A sC 2 H 5NC 2 H 5CSS+C 2 H 5NC 2 H 5C3 + 6 二乙基二硫代氨基甲酸銀 二乙基二硫代氨基甲酸 （簡稱 AgDDC） （簡稱 HDDC） 2. 檢查方法： （ 1）儀器裝置 A為 100ml標準磨口錐形瓶； B為中空的標準磨口塞，C上連導氣管 。標準砷溶液應于實驗當天配制，標準砷貯備液存放時間一般不宜超過一年。可將所使用的儀器裝置依法制備標準砷斑，所得的砷斑應呈色一致。 常用的破壞方法有 ? 酸破壞法（溴 稀硫酸破壞法、硫酸 過氧化氫破壞法）、 ? 堿破壞法（氫氧化鈣破壞法、無水碳酸鈉破壞法、硝酸鈉 無水碳酸鈉破壞法） ? 直接炭化法等，以氫氧化鈣破壞法較為常用。 二、砷鹽檢查法 3. 注意事項 （ 6）醋酸鉛棉花的作用 供試品和鋅粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產(chǎn)生 H2S氣體，干擾實驗，故需采用醋酸鉛棉花吸收除去H2S。如反應太快，則宜適當降低反應溫度，使砷化氫氣體能被均勻吸收。 （ 2）反應液的酸度及各種試液用量 反應液的酸度相當于 2mol/L的鹽酸液。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。g銻存在不至干擾測定。 為了防止五價砷存在，影響測定結果的準確性，故必須加入 碘化鉀、酸性氯化亞錫 還原劑，將五價砷還原為三價砷。 中國藥典中規(guī)定的方法是 古蔡法 和二乙基二硫代氨基甲酸銀 法 (AgDDC). 二、砷鹽檢查法 （一）古蔡法 1. 基本原理：本法系采用鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應生成揮發(fā)性砷化氫，再與溴化汞試紙作用生成黃色至棕色砷斑。 ⑤當采用第四法時，將注射器套于濾器上后，讓注射器內(nèi)管自然下降，產(chǎn)生的壓力比較均勻，而且對于大多數(shù)樣品溶液過濾速度達到每分鐘 1ml左右；對于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使達到該速度，以保證色斑上色調的均勻性。 ②硫化鈉試液的穩(wěn)定性與硫化鈉的純度有很大關系，一般應采用分析純的硫化鈉配制，貯存在棕色瓶中可保存 1～ 2個月。 （ 5） 其他離子的干擾 ① 供試品中如含有高鐵鹽 ， 可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾 。 （ 2） 反應條件：硫代乙酰胺試液與重金屬反應的最佳 pH值是 ， 硫代乙酰胺試液加入量以 2ml時呈色最深 ，最佳顯色時間為 2min。 第一法 適用于供試品不經(jīng)有機破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查 取兩支納氏比色管 甲管 乙管 標準鉛溶液 +醋酸鹽緩