生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告論-wenkub.com
2025-01-15 23:36 本頁面
【正文】 、討論結(jié)果及注意事項(xiàng)利用考馬斯亮藍(lán)法分析蛋白質(zhì)必須要掌握好分光光度計(jì)的正確使用，重復(fù)測定吸光度時(shí)，比色杯一定要沖洗干凈，制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的時(shí)候，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品最好是從低濃度到高濃度，防止誤差。取出凝膠在水中漂洗數(shù)次，再加入考馬斯亮藍(lán)脫色液，震蕩。 凝聚后，慢慢取出“加樣梳”，取出時(shí)應(yīng)防止把加樣孔弄破，取出“加樣梳”后，在形成的加樣孔中加入蒸餾水，沖洗未凝集的丙烯酰胺，倒出加樣孔中的蒸餾水后，在加入已稀釋的電極緩沖液。10 8：：，SDS10g，溶于蒸餾水并定容至1000ml，使用時(shí)稀釋十倍 3凝膠貯液：30克丙烯酰胺，溶于100ml蒸餾水中，過濾，于4℃暗處儲(chǔ)藏，一個(gè)月內(nèi)使用 2待測 蛋白質(zhì)樣品 SDS是一種陰離子去污劑，作為變性劑和助溶性試劑，能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)，三級(jí)結(jié)構(gòu)；而強(qiáng)還原劑，如二硫蘇糖醇，β巰基乙醇能使半胱氨酸殘基之間的二硫鍵斷裂。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，在坐標(biāo)紙上繪制出濃度吸光度曲線，測出未知液的吸光度后，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出未知液的濃度。 實(shí)驗(yàn)試劑:（1）水；（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白液:牛血清蛋白（）?？捡R斯亮藍(lán)G250的磷酸溶液呈棕紅色，最大吸收峰在465nm。 、實(shí)驗(yàn)原理 將甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂溶化后，倒入平板中，凝固后，用直徑為2mm的打孔器打孔，將瓊脂取出，將待檢酶液10ul,滴入孔中，置于加有濕棉紗的濕盒內(nèi)，在37℃培養(yǎng)4h,陽性反應(yīng)在孔的周圍會(huì)出現(xiàn)1mm以上的粉紅圈，測量粉紅圈的直徑。 、透析袋預(yù)處理然后裝入透析袋，PEG2包埋，濃縮。 在柱層析上樣前必須對(duì)層析柱進(jìn)行平衡，將平衡緩沖液泵入到層析柱內(nèi)，打開層析柱下端的出口，當(dāng)下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致
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