【正文】 《中國藥典》指標(biāo)成分： 鹽酸麻黃堿 。 要生物堿的分離 （四）苦參生物堿的生物活性 現(xiàn)代臨床及藥理學(xué)研究表明，苦參總生物堿具有消腫利尿、抗腫瘤、抗病原體、抗心律失常、正性肌力、抗缺氧、擴(kuò)張血管、降血脂、抗柯薩奇病毒和調(diào)節(jié)免疫等作用。 苦參生物堿的極性大小順序是：氧化苦參堿＞羥基苦參堿＞苦參堿。 叔胺氮，且處于駢和哌啶環(huán)之間，立體空間效應(yīng)小，堿性較強(qiáng)。其中， α 、 β 、 δ 苦參堿為結(jié)晶體，常見的是 α 苦參堿，為針狀或棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn) 76℃ 。 HPLC法分離罌粟殼中的嗎啡、可待因和罌粟堿 嗎啡； 可待因； 罌粟堿 第四節(jié) 含生物堿的中藥實(shí)例 一、苦參 （一）苦參中主要生物堿及其化學(xué)結(jié)構(gòu) 主要生物堿：苦參堿和氧化苦參堿，此外還含有羥基苦參堿、 N甲基金雀花堿、安娜吉堿、巴普葉堿和去氫苦參堿（苦參烯堿）等。分離結(jié)果見圖。其中以分配色譜法中的反相色譜法應(yīng)用較多。 以水作固定相的紙色譜，宜用親水性溶劑系統(tǒng)作展開劑，如 BAW系統(tǒng)（正丁醇 乙酸 水 =4： 1： 5，上層）； 以甲酰胺和酸性緩沖液作固 定相的紙色譜，多以苯、三氯甲烷、乙酸乙酯等親脂性有機(jī)溶劑為主組成的溶劑系統(tǒng)作展開劑。 在配制流動相時(shí)，需用固定相飽和。 特別適用于分離有些結(jié)構(gòu)十分相近的生物堿。 氧化鋁 本身顯弱堿性，不經(jīng)處理便可用于分離和檢識生物堿，一般較常用，特別適合分離親脂性較強(qiáng)的生物堿。 （二）溶劑法 利用水溶性生物堿能夠溶于極性較大而又能與水分層的有機(jī)溶劑（如正丁醇、異戊醇或氯仿 甲醇的混合溶劑等）的性質(zhì)，用 這類溶劑與含這類生物堿的堿水液反復(fù)萃取，使水溶性生物堿與強(qiáng)親水性的雜質(zhì)得以分離。 R1：三尖杉酯堿 R2：高三尖杉酯堿 （ HPLC） 優(yōu)點(diǎn)： 分離效能好、靈敏度高、分析速度快 。以苯、氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑或以其為主的混合溶劑系統(tǒng)作洗脫劑。 （在草酸中溶解度不同，麻黃堿溶解度小于偽麻黃堿） （兩性） 含羧基的生物堿能與碳酸氫鈉生成羧酸鹽而溶于水，可與其他堿分離； 酚性生物堿的酚羥基具有弱酸性，可與氫氧化鈉溶液生成鹽溶于水，而與其他非酚性生物堿分離。如從洋金花的乙醇浸出液中分離莨菪堿和東莨菪堿，利用二者堿性差別進(jìn)行分離。 ② 成鹽后，弱堿鹽在弱堿條件下即可轉(zhuǎn)變成游離生物堿，易溶于親脂性有機(jī)溶劑；強(qiáng)堿鹽則需在較強(qiáng)堿性條件下轉(zhuǎn)變成游離生物堿，溶于親脂性有機(jī)溶劑。 提取方法 溶劑 方法 純化 水或酸水 提取法 %～ 1%的硫酸、鹽酸或醋酸、 酒石酸溶液 浸漬、 滲漉、 回流、 連續(xù)回流 （ 1）陽離子樹脂交換法 （ 2）萃取法 醇類溶劑 提取法 甲醇、乙醇 酸水 堿化 萃取法處理去除脂溶性雜質(zhì) 親脂性有機(jī)溶劑提取法 三氯甲烷、苯、乙醚以及二氯甲烷等 同上 附：陽離子交換樹脂法 將總堿的酸水提取液通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂柱，使酸水中生物堿陽離子交換在樹脂上，而非生物堿化合物則流出柱外，用中性水或乙醇進(jìn)一步洗除柱中的雜質(zhì)。 六、顯色反應(yīng) 某些生物堿能與一些試劑反應(yīng)生成不同顏色的產(chǎn)物，這些試劑成為生物堿顯色劑。 ② 可用于試管定性反應(yīng)和色譜的顯色劑。 判定注意事項(xiàng)： ① 對生物堿定性鑒別時(shí)，應(yīng)用三種以上試劑分別進(jìn)行反應(yīng)，均陽性或陰性方有可信性。 影響因素 典型 化合物 雜化方式 四氫異喹啉 異喹啉 電性效應(yīng) 苯異丙胺 麻黃堿 去甲麻黃堿 （誘導(dǎo)效應(yīng)） 胡椒堿、秋水仙堿、咖啡堿堿性弱 （共軛效應(yīng)） 空間效應(yīng) 莨菪堿 山莨菪堿 東莨菪堿 氫鍵效應(yīng) 鉤藤堿 異鉤藤堿 最佳選擇題 其共軛酸因分子內(nèi)氫鍵而穩(wěn)定的是（ ） [答疑編號 5630020201] 【正確答案】 C 麻黃堿的堿性（ ）強(qiáng)于去甲麻黃堿（ ）的原因是由于（ ） [答疑編號 5630020202] 【正確答案】 B 五、沉淀反應(yīng) 生物堿在酸性水或稀醇中（苦味酸試劑可在中性條件下進(jìn)行），與某些試劑生成難溶于水的復(fù)鹽或絡(luò)合物的反應(yīng)稱為生物堿沉淀反應(yīng)。 甲基麻黃堿（ ） 麻黃堿（ ） 莨菪堿（ ） 東莨菪堿（ ） 山莨菪堿 利血平（ ） 當(dāng)生物堿成鹽后，氮原子附近如有羥基、羰基，并處于有利于形成穩(wěn)定分子內(nèi)氫鍵時(shí)，氮上的質(zhì)子不易離去，其共軛酸穩(wěn)定，則堿性強(qiáng)。 胡椒堿（ ） 秋水仙堿（ ） 咖啡堿（ ） 并非所有的 pπ 共軛效應(yīng)都能使生物堿的堿性減弱。 苯胺型： 苯胺氮原子上的孤電子對與 π 電子形成 pπ 共軛體系后，其堿性減弱。 醇胺型小檗堿 季胺型小檗堿（ ） 有些生物堿的叔胺氮原子處于稠環(huán)的橋頭，雖然有 α 、 β 雙鍵或 α 羥基，由于分子剛性結(jié)構(gòu)而不能發(fā)生轉(zhuǎn)位使叔胺變?yōu)榧句@型，其雙鍵或羥基只能起吸電子誘導(dǎo)效應(yīng)，而使堿性減弱。 供電誘導(dǎo)使氮原子上電子云密度增加，堿性增強(qiáng)； 吸電誘導(dǎo)使氮原子上電子云密度減小，堿性降低。 如四氫異喹啉（ ）為 sp3雜化；吡啶（ ）和異喹啉（ ）均為 sp2雜化；氰 基呈中性，因其為 sp雜化。 ④pKa11 以上為強(qiáng)堿，如季銨堿、胍類生物堿。 生物堿 生物堿鹽 （一）堿性強(qiáng)弱的表示方法 生物堿堿性強(qiáng)弱用 pKa表示， pKa越大，堿性越強(qiáng)。 有些生物堿鹽難溶于水，如小檗堿鹽酸鹽、麻黃堿草酸鹽等。 具有 酚羥基 的生物堿（又稱酚性生物堿），可溶于氫氧化鈉等強(qiáng)堿性溶液，如 嗎啡 ； 具有 羧基 的生物堿，可溶于碳酸氫鈉等弱堿溶液，如 檳榔堿 。 （ 2）含 N氧化物結(jié)構(gòu)的生物堿： 具有配位鍵 ,可溶于水， 如氧化苦參堿 。 （少數(shù)右旋體生物活性強(qiáng)于左旋體，如 d古柯堿的局部麻醉作用強(qiáng)于 ι 古柯堿） 三、溶解性 （一）游離生物堿 多數(shù)仲胺堿和叔胺堿為親脂性 易溶于乙醚、苯和鹵烴類（二氯甲烷、三氯甲烷、四氯 化碳）等有機(jī)溶劑， 尤其在三氯甲烷中溶解度較大 。 性質(zhì) 代表化合物 液態(tài) 煙堿、毒芹堿、檳榔堿 甜味 甜菜堿 具有顏色 小檗堿、蛇根堿呈黃色 藥根堿、小檗紅堿呈紅色 紫外光下顯熒光 利血平 揮發(fā)性 麻黃堿、煙堿 升華性 咖啡因 配伍選擇題 [答疑編號 5630020203] 【正確答案】 C [答疑編號 5630020204] 【正確答案】 D [答 疑編號 5630020205] 【正確答案】 B [答疑編號 5630020206] 【正確答案】 A 二、旋光性 含有手性碳原子或本身為手性分子的生物堿都有旋光性，且多為左旋。 生物堿一般無色 或白色，少數(shù)有顏色， 如小檗堿、蛇根堿呈黃色，藥根堿、小檗紅堿呈紅色等。 雙吲哚類是由 兩分子單吲哚類生物堿聚合而成的衍生物，如長春花中具有抗癌作用的長春堿和長春新堿。 如板藍(lán)根、大青葉中的大青素 B，蓼藍(lán)中的靛青苷等。 這類化合物具有部分飽和的菲核，如罌粟中的 嗎啡、可待因，青風(fēng)藤中的青風(fēng)藤堿 等。 （ 2）雙芐基異喹啉類： 為 兩個芐基異喹啉通過 1～ 3個醚鍵相連接的一類生物堿。 如鹿尾草中的降血壓成分 薩蘇林 ， 是四氫異喹啉的衍生物。主要存在于茄科的顛茄屬、曼陀羅屬、莨菪屬和天仙子屬。 由兩個哌啶環(huán)共用一個氮原子稠合而成的雜環(huán)，具喹喏里西啶的基本母核。 寶馬別逗罌粟 （毛茛科、馬錢科、茄科、豆科、罌粟科） 防己終于小破 （防己科、吳茱萸屬、小檗科） 存在形式 ① 酰胺形式； ② 游離形式： 少數(shù)極弱堿，如那可丁； ③ 有機(jī)酸鹽形式： 絕大多數(shù)生物堿，如檸檬酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽等； ④ 無機(jī)酸鹽形式： 少數(shù)鹽酸生物堿，如鹽酸小檗堿、硫酸嗎啡等； ⑤ 極少數(shù)以 N氧化物、生物堿苷等形式存在。 大多有 較復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu) ,氮原子結(jié)合在環(huán)內(nèi)（特例：有機(jī)胺類生物堿 N原子不在環(huán)內(nèi)）； 多呈 堿性 ，可與酸成鹽； 多具有顯著的 生理活性 。 如苯的取代基位移、羥基的苷化位移和?；灰?。 （ 13CNMR） （ 1）噪音去偶譜：也叫全氫去偶或?qū)拵ヅ肌? 化學(xué)位移： 識別不同的類型的氫。 （三）紫外 — 可見吸收光譜（ UVvis） π→π * 及 n→π *躍遷可因吸收紫外光及可見光而引起，吸收光譜出現(xiàn)在紫外及可見區(qū)域（ 200～ 700nm） UV光譜主要可提供分子中的 共軛體系 的結(jié)構(gòu)信息，可據(jù)此判斷共軛體系中取代基的位置、種類和數(shù)目，用于推斷 化合物骨架。二價(jià)原子 O、 S等不飽和度計(jì)算無關(guān)，故不予考慮。 （ 2）化學(xué)電離質(zhì)譜（ CIMS） 也能得到較強(qiáng)的準(zhǔn)分子離子峰，即 M177。 最佳選擇題 判定單體化合物純度的方法是 液萃取法 [答疑編號 5630010310] 【正確答案】 C 二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序 三、結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法 （一）確定分子式并計(jì)算不飽和度 分子式的測定目前主要有以下幾種方法，可因地制宜加以選用 （ 1）元素定量分析配合分子量測定 （ 2）同位素豐度比法 （ 3）高分辨質(zhì)譜（ HR— MS）法 質(zhì)譜（ MS） 可用于確定分子量和求算分子式，及提供其他結(jié)構(gòu)信息。 （ 3）色譜法： 單一化合物用兩種以上溶劑系統(tǒng)或色譜條件進(jìn)行檢測，均顯示單一的斑點(diǎn)。 一般來說，液體混合物各成分沸點(diǎn)相差在 100℃ 以上時(shí)，可用反復(fù)蒸餾法達(dá)到分離的目的；如沸點(diǎn)相差在 25℃ 以下，則需要采用分餾柱；沸點(diǎn)相差越小，則需要的分餾裝置越精細(xì)。 結(jié)構(gòu)： （ 1）母核部分：由苯乙烯通過二乙烯苯（ DVB）交聯(lián)而成的大分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 常壓下，小分子可通過，大分子不能通過。 羥丙基葡聚糖凝膠（ Sephadex LH20）： 除具有分子篩特性外，在由極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中常常起到反相色譜效果。 （ 5）大孔樹脂應(yīng)用的安全性問題： 規(guī)格影響中藥提取液的質(zhì)量 大孔吸附樹脂規(guī)格內(nèi)容包括： 名稱、牌（型）號、結(jié)構(gòu)（包括交聯(lián) 劑）、外觀、極性，以及粒徑范圍、含水量、濕密度（真密度、視密度）、干密度（表觀密度、骨架密度）、比表面、平均孔徑、孔隙率、孔容等物理常數(shù)； 此外還有未聚合單體、交聯(lián)劑、致孔劑等添加劑殘留量限度等參數(shù)。 注：大孔樹脂的色譜行為具有 反相 的性質(zhì)，被分離物質(zhì)的極性越大，其 Rf值越大，越容易洗脫。 優(yōu)勢： ① 操作簡便，樹脂可再生； ② 可重復(fù)操作，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，收率恒定； ③ 既能選擇性吸附，又便于溶媒洗脫，且不受無機(jī)鹽干擾； ④ 一般不用有機(jī)溶媒，既保持傳統(tǒng)的中醫(yī)理論用藥特色，又最大限度的保留了其有效成分。 如： ④ 洗脫溶劑的影響 洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序?yàn)椋? 水＜甲醇或乙醇（濃度由低到高）＜丙酮＜稀氫氧化鈉水溶液或氨水＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺（ DMF）＜尿素水溶液 （ 2）聚酰胺色譜的應(yīng)用 ① 對酚類、黃酮類等含酚羥基化合物可逆吸附，分離效果好，吸附容量大，適于制備分離。 X、 Y為氧（ O）、氮（ N）、氟（ F）等電負(fù)性較大，且半徑較小的原子。 對堿較穩(wěn)定，對酸尤其是無機(jī)酸穩(wěn)定性較差 ，可溶于濃鹽酸、冰乙酸及甲酸。 （ 5）洗脫劑的選擇與優(yōu)化 通過薄層色譜法（ TLC）進(jìn)行篩選 一般 TLC展開 時(shí)使組分 Rf值達(dá)到 ～ 統(tǒng)。實(shí)踐中多用混合溶劑，并通過巧妙調(diào)節(jié)比例以改變極性，達(dá)到梯度洗脫分離物質(zhì)的目的。 如采用加壓柱色譜，還可以采用更細(xì)的顆粒，或甚至直接采用薄層色譜用規(guī)格。 （ 1）吸附劑及用量 主要吸附劑：硅膠、氧化鋁。 （ 1）用于化合物的精制：結(jié)晶與重結(jié)晶過程中 加入活性炭脫色