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20xx年醫(yī)學(xué)專題—trizol法同時(shí)提取rna-dna-蛋白質(zhì)-資料下載頁

2024-11-17 22:18本頁面

　　

【正文】 S調(diào)節(jié)pH至78并且加EDTA至1mM，可置于4℃或20℃長期保存。常見問題分析：得率低： B．最終得到的DNA沉淀沒有完全溶解 A260/A280 ：A. 檢測吸光度時(shí)，RNA樣品沒有溶于水，而溶于了TE中 B．酚除去的不徹底，〔含10%乙醇〕再洗一遍DNA沉淀。 DNA降解： ℃,而保存在了5至20℃ C．樣品勻漿時(shí)使用了高速勻漿儀 RNA污染： B．〔含10%乙醇〕洗的不徹底蛋白質(zhì)的提取準(zhǔn)備試劑：異丙醇 %乙醇無水乙醇 1%SDS 操作步驟：，用異丙醇沉淀蛋白質(zhì)。每使用1ml ，室溫放置10分鐘，28℃12000g離心10分鐘棄上清。 2．%乙醇洗滌蛋白質(zhì)沉淀。每使用1ml TRIzol加2ml洗滌液，室溫放置20分鐘，28℃7500g離心5分鐘，棄上清，重復(fù)兩次。用2ml無水乙醇同樣方法再洗一次。 3．真空抽干蛋白質(zhì)沉淀510分鐘，用1%SDS溶解蛋白質(zhì)，反復(fù)吸打，50℃溫浴使其完全溶解，不溶物28℃10000g離心10分鐘除去。別離得到的蛋白質(zhì)樣品可用于Western Blot或5至20℃保存?zhèn)溆谩?考前須知： %乙醇或無水乙醇中28℃一個(gè)月以上或5至20℃一年以上。 2．% SDS在28℃透析三次，10000g離心10分鐘取上清即可用于Western Blot。常見問題分析：得率低： B．最后得到的蛋白質(zhì)沉淀未完全溶解蛋白質(zhì)降解：組織取出后沒有馬上處理或冷凍電泳時(shí)條帶變形：蛋白質(zhì)沉淀洗滌不充內(nèi)容總結(jié)
〔1〕TRIzol法同時(shí)提取RNA,DNA,蛋白質(zhì)TRIzol試劑適用于從細(xì)胞和組織中快速別離RNA
〔2〕每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇
〔3〕預(yù)期產(chǎn)量：1mg組織或1106細(xì)胞提取RNA分別為：肝和脾610μg ,腎34μg , ,胎盤14μg ,上皮細(xì)胞815μg ,成纖維細(xì)胞57μg

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