20xx年醫(yī)學(xué)專題—結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗的標(biāo)準(zhǔn)化與新技術(shù)進展海淀20xx-資料下載頁
2024-11-16 04:27本頁面
【正文】 zhěndu224。n)技術(shù),體液免疫診斷技術(shù)：是利用結(jié)核分枝桿菌或其提取物抗原檢測結(jié)核病患者血清抗體的方法。目前，通過檢測抗結(jié)核桿菌的抗體(IgG)診斷結(jié)核病的商品化試劑盒已較多。采用(cǎiy242。ng)的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)和免疫金標(biāo)記技術(shù)的免疫層析法和膠體金標(biāo)記的滲濾法等，采用(cǎiy242。ng)的抗原也各不相同。,第六十三頁，共七十四頁。,體液(tǐy232。)免疫學(xué)診斷技術(shù)的意義,在國內(nèi)應(yīng)用較廣泛，是結(jié)核病的輔助診斷方法之一,尤其對肺外結(jié)核、菌陰肺結(jié)核的診斷具有應(yīng)用價值。 不足之處：單獨使用時，其檢測的特異性和靈敏度都有些缺點。 目前國際上反對使用該項技術(shù)(j236。sh249。)的呼聲在增加。原因主要是特異性問題。,第六十四頁，共七十四頁。,細(xì)胞(x236。bāo)免疫學(xué)診斷技術(shù),細(xì)胞免疫診斷技術(shù)應(yīng)用較少，過去主要應(yīng)用PPD皮試技術(shù)，近年來英國和澳大利亞研制了ELISpot 、TSpot技術(shù)和 QFTGold 。 此項技術(shù)用于感染情況的檢測(jiǎn c232。)是一項特異性較強、靈敏度較高很有希望的新技術(shù)。,第六十五頁，共七十四頁。,酶聯(lián)免疫斑點(ELISpot)技術(shù) 是檢測細(xì)胞(x236。bāo)分泌細(xì)胞(x236。bāo)因子的一種實驗方法，采用可定量的夾心ELISA方法，利用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT6 amp。 CFP10刺激和激活免疫活性細(xì)胞(x236。bāo)使其產(chǎn)生IFN?，并檢測IFN?的濃度變化進行診斷的方法。通過ELISpot酶聯(lián)斑點分析系統(tǒng)對加底物后形成的斑點分析后得出結(jié)果。ELISpot具有較高的特異性和敏感性。,第六十六頁，共七十四頁。,ELISPOT技術(shù)(j236。sh249。)原理,細(xì)胞免疫主要由T淋巴細(xì)胞發(fā)動，T淋巴細(xì)胞分成效應(yīng)T淋巴細(xì)胞和記憶T淋巴細(xì)胞。記憶T淋巴細(xì)胞在首次感染病原體后長期存在免疫系統(tǒng)中。當(dāng)再次受到感染刺激后。這些記憶T淋巴細(xì)胞發(fā)出信號分子(fēnzǐ)并增殖成為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，如 干擾素(INFγ )。所以無論是否有臨床癥狀，檢測效應(yīng)T淋巴細(xì)胞在血中的水平可作為機體是否被感染的指標(biāo)。,第六十七頁，共七十四頁。,ELISPOT在結(jié)核病診斷(zhěndu224。n)中的應(yīng)用,在MTB潛伏感染診斷中的應(yīng)用 早期診斷MTB潛伏感染對控制結(jié)核病意義重大。目前(m249。qi225。n)診斷MTB潛伏感染仍沿用100年來使用的 TST，但 TST不能區(qū)分MTB感染患者和接種BCG的健康人以及感染環(huán)境中的分枝桿菌患者。 Lalvani在土耳其檢查了暴露于肺結(jié)核家庭環(huán)境中的908名健康兒童。皮試結(jié)果表明580名兒童患有潛伏性肺結(jié)核,需要進行藥物治療,以免轉(zhuǎn)化為活動性肺結(jié)核。而ELISPOT結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有380名兒童患有潛伏性肺結(jié)核。通過ELISPOT檢測,只需要治療380名兒童,而不是580名,但卻能夠預(yù)防同樣數(shù)量的活動性肺結(jié)核病例發(fā)生。因此，ELISPOT 比TST篩選結(jié)核潛伏感染更有效,而且ELISPOT檢測結(jié)果與MTB的接觸程度相關(guān)性更強。,第六十八頁，共七十四頁。,ELISPOT早期技術(shù)評估 英國Ewer等用ELISpot檢測對結(jié)核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反應(yīng)的T淋巴細(xì)胞來診斷早期結(jié)核病。這項研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的535名學(xué)生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(TST)和ELISpot的一致性達(dá)89%(P0.0001)。但ELISpot與研究對象結(jié)核病接觸程度之間的正相關(guān)性顯著強于TST。在接種過BCG的兒童中，TST假陽性的可能性較大，而BCG接種對ELISpot結(jié)果沒有影響。作者認(rèn)為ELISpot可開始(kāishǐ)替代TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時就可進行預(yù)防，而不至于發(fā)展成為嚴(yán)重的結(jié)核病。,第六十九頁，共七十四頁。,ELISPOT法的優(yōu)點(yōudiǎn),(1)靈敏、特異，能從100萬個細(xì)胞中測出1個分泌INF細(xì)胞；只有MTB和少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會出現(xiàn)陽性反應(yīng)，而BCG及多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌因不分泌ESAT6和CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別BCG接種出現(xiàn)的陽性反應(yīng)。 (2)快速(ku224。i s249。)：能早期診斷結(jié)核感染，檢測全過程2天。 (3)應(yīng)用面廣：在肺結(jié)核、肺外結(jié)核及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測。 (4)療效評估：當(dāng)結(jié)核菌被消滅后，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞即消失，測定效應(yīng)T淋巴細(xì)胞也可檢測機體是否清除了結(jié)核菌，進行臨床療效評估 。,第七十頁，共七十四頁。,ELISPOT技術(shù)(j236。sh249。)的缺點,細(xì)胞培養(yǎng)及抗原刺激時,有發(fā)生細(xì)菌污染的可能,以致實驗失敗。 實驗過程步驟較多,實驗人員需有一定的理論(lǐl249。n)基礎(chǔ)并經(jīng)多次操作的培訓(xùn)方能勝任。 目前試劑價格比較昂貴。,第七十一頁，共七十四頁。,結(jié)束語,結(jié)核病準(zhǔn)確、快速(ku224。i s249。)的診斷是結(jié)核病防治人員多年期盼的。隨著科技不斷進步，今天企盼已經(jīng)成為可能。經(jīng)過不斷的對現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和繼續(xù)努力開發(fā)更新的技術(shù)，相信未來的結(jié)核病實驗室診斷，一定可以最大限度的滿足臨床和防治工作的需要。,第七十二頁，共七十四頁。,謝謝(xi232。 xie)！,第七十三頁，共七十四頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗的標(biāo)準(zhǔn)化與新診斷技術(shù)進展。重復(fù)緩慢吸氣動作或平靜呼吸片刻，準(zhǔn)備再次咳嗽的動作。如使用的載玻片一端有磨砂面，可使用2B鉛筆在磨砂面上直接書寫)。以現(xiàn)場和非現(xiàn)場督導(dǎo)為主要方式。（1）定性誤差包括高假陽性和高假陰性(yīnx236。ng)。5）重新購置質(zhì)量合格的染料并重新配制染液。與Southern雜交和酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測的靈敏度相似,但要比酶促比色法提高10倍。固體/液體培養(yǎng)物**。謝謝,第七十四頁，共七十四頁
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