【正文】 zhěndu224。n)技術,體液免疫診斷技術：是利用結核分枝桿菌或其提取物抗原檢測結核病患者血清抗體的方法。目前，通過檢測抗結核桿菌的抗體(IgG)診斷結核病的商品化試劑盒已較多。采用(cǎiy242。ng)的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)和免疫金標記技術的免疫層析法和膠體金標記的滲濾法等，采用(cǎiy242。ng)的抗原也各不相同。,第六十三頁，共七十四頁。,體液(tǐy232。)免疫學診斷技術的意義,在國內(nèi)應用較廣泛，是結核病的輔助診斷方法之一,尤其對肺外結核、菌陰肺結核的診斷具有應用價值。 不足之處：單獨使用時，其檢測的特異性和靈敏度都有些缺點。 目前國際上反對使用該項技術(j236。sh249。)的呼聲在增加。原因主要是特異性問題。,第六十四頁，共七十四頁。,細胞(x236。bāo)免疫學診斷技術,細胞免疫診斷技術應用較少，過去主要應用PPD皮試技術，近年來英國和澳大利亞研制了ELISpot 、TSpot技術和 QFTGold 。 此項技術用于感染情況的檢測(jiǎn c232。)是一項特異性較強、靈敏度較高很有希望的新技術。,第六十五頁，共七十四頁。,酶聯(lián)免疫斑點(ELISpot)技術 是檢測細胞(x236。bāo)分泌細胞(x236。bāo)因子的一種實驗方法，采用可定量的夾心ELISA方法，利用結核分枝桿菌特異性抗原ESAT6 amp。 CFP10刺激和激活免疫活性細胞(x236。bāo)使其產(chǎn)生IFN?，并檢測IFN?的濃度變化進行診斷的方法。通過ELISpot酶聯(lián)斑點分析系統(tǒng)對加底物后形成的斑點分析后得出結果。ELISpot具有較高的特異性和敏感性。,第六十六頁，共七十四頁。,ELISPOT技術(j236。sh249。)原理,細胞免疫主要由T淋巴細胞發(fā)動，T淋巴細胞分成效應T淋巴細胞和記憶T淋巴細胞。記憶T淋巴細胞在首次感染病原體后長期存在免疫系統(tǒng)中。當再次受到感染刺激后。這些記憶T淋巴細胞發(fā)出信號分子(fēnzǐ)并增殖成為效應T淋巴細胞，效應T淋巴細胞分泌細胞因子，如 干擾素(INFγ )。所以無論是否有臨床癥狀，檢測效應T淋巴細胞在血中的水平可作為機體是否被感染的指標。,第六十七頁，共七十四頁。,ELISPOT在結核病診斷(zhěndu224。n)中的應用,在MTB潛伏感染診斷中的應用 早期診斷MTB潛伏感染對控制結核病意義重大。目前(m249。qi225。n)診斷MTB潛伏感染仍沿用100年來使用的 TST，但 TST不能區(qū)分MTB感染患者和接種BCG的健康人以及感染環(huán)境中的分枝桿菌患者。 Lalvani在土耳其檢查了暴露于肺結核家庭環(huán)境中的908名健康兒童。皮試結果表明580名兒童患有潛伏性肺結核,需要進行藥物治療,以免轉化為活動性肺結核。而ELISPOT結果發(fā)現(xiàn)只有380名兒童患有潛伏性肺結核。通過ELISPOT檢測,只需要治療380名兒童,而不是580名,但卻能夠預防同樣數(shù)量的活動性肺結核病例發(fā)生。因此，ELISPOT 比TST篩選結核潛伏感染更有效,而且ELISPOT檢測結果與MTB的接觸程度相關性更強。,第六十八頁，共七十四頁。,ELISPOT早期技術評估 英國Ewer等用ELISpot檢測對結核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反應的T淋巴細胞來診斷早期結核病。這項研究共納入了結核流行區(qū)有不同程度結核病接觸史的535名學生，結果顯示結核菌素皮膚試驗(TST)和ELISpot的一致性達89%(P0.0001)。但ELISpot與研究對象結核病接觸程度之間的正相關性顯著強于TST。在接種過BCG的兒童中，TST假陽性的可能性較大，而BCG接種對ELISpot結果沒有影響。作者認為ELISpot可開始(kāishǐ)替代TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時就可進行預防，而不至于發(fā)展成為嚴重的結核病。,第六十九頁，共七十四頁。,ELISPOT法的優(yōu)點(yōudiǎn),(1)靈敏、特異，能從100萬個細胞中測出1個分泌INF細胞；只有MTB和少數(shù)非結核分枝桿菌才會出現(xiàn)陽性反應，而BCG及多數(shù)非結核分枝桿菌因不分泌ESAT6和CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別BCG接種出現(xiàn)的陽性反應。 (2)快速(ku224。i s249。)：能早期診斷結核感染，檢測全過程2天。 (3)應用面廣：在肺結核、肺外結核及免疫抑制的結核患者均能檢測。 (4)療效評估：當結核菌被消滅后，效應T淋巴細胞即消失，測定效應T淋巴細胞也可檢測機體是否清除了結核菌，進行臨床療效評估 。,第七十頁，共七十四頁。,ELISPOT技術(j236。sh249。)的缺點,細胞培養(yǎng)及抗原刺激時,有發(fā)生細菌污染的可能,以致實驗失敗。 實驗過程步驟較多,實驗人員需有一定的理論(lǐl249。n)基礎并經(jīng)多次操作的培訓方能勝任。 目前試劑價格比較昂貴。,第七十一頁，共七十四頁。,結束語,結核病準確、快速(ku224。i s249。)的診斷是結核病防治人員多年期盼的。隨著科技不斷進步，今天企盼已經(jīng)成為可能。經(jīng)過不斷的對現(xiàn)有技術的優(yōu)化和繼續(xù)努力開發(fā)更新的技術，相信未來的結核病實驗室診斷，一定可以最大限度的滿足臨床和防治工作的需要。,第七十二頁，共七十四頁。,謝謝(xi232。 xie)！,第七十三頁，共七十四頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結,結核病細菌學檢驗的標準化與新診斷技術進展。重復緩慢吸氣動作或平靜呼吸片刻，準備再次咳嗽的動作。如使用的載玻片一端有磨砂面，可使用2B鉛筆在磨砂面上直接書寫)。以現(xiàn)場和非現(xiàn)場督導為主要方式。（1）定性誤差包括高假陽性和高假陰性(yīnx236。ng)。5）重新購置質(zhì)量合格的染料并重新配制染液。與Southern雜交和酶促化學發(fā)光技術檢測的靈敏度相似,但要比酶促比色法提高10倍。固體/液體培養(yǎng)物**。謝謝,第七十四頁，共七十四頁