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20xx年醫(yī)學專題—第七章哺乳動物胚胎干細胞技術-資料下載頁

2024-11-16 00:29本頁面
  

【正文】 胞或癌細胞做對照,用專用試劑盒檢測。 4.Apase(堿性磷酸酶):可通過組織化學方法鑒定,細胞經乙醇或病痛甲醛固定后,直接加入底物,即可鑒定Apase的表達水平,都應該為陽性。 5.核型分析:傳到2~5代時需要進行核型分析,分析時先在細胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的秋水酰胺,使細胞同步在M期,然后用低滲溶液處理,經乙醇冰醋酸溶液固定后染色和顯微照相,最后進行核型分析,檢測細胞是否維持在二倍體狀態(tài)。,第五十六頁,共七十頁。,6.發(fā)育分化潛力: (1)體外誘導分化:是把ES細胞培養(yǎng)在無分化抑制物的普通培養(yǎng)液中,如果ES細胞能自動聚合并分化形成胚狀體,可初步確認具有發(fā)育多能性; (2)畸胎瘤實驗:把ES細胞注射到有免疫(miǎny236。)缺陷成年小鼠或遺傳同質動物的皮下或腎臟、睪丸的被膜下,如果能形成畸胎瘤,可初步判定為細胞具有多能性。,第五十七頁,共七十頁。,(3)嵌合體實驗:把培養(yǎng)的ES細胞與早期胚胎的卵裂球聚合,或直接把ES細胞注入囊胚腔,然后讓重組胚在體內繼續(xù)發(fā)育,通過檢測后代的嵌合狀況,分析ES細胞的分化潛力。只有當操作后的胚胎發(fā)育為嵌合體,注入的細胞能分化為內、中和外三胚層細胞,并參與細胞生殖干細胞形成時,才能確認為ES細胞。 目前(m249。qi225。n),只有小鼠、猴和人能到達以上指標。,第五十八頁,共七十頁。,1 如何維持體外擴增時不分化? 2 分化細胞的增殖是一個瓶頸問題:數量和純度 3 如何定向誘導干細胞的分化?明確干細胞發(fā)育的調控機制 4 胚胎干細胞真正用于器官克隆與移植仍需要技術上的突破 5 如何克服移植排斥問題?破壞或改變細胞許多基因的可行性,核移植是否激活卵細胞的沉默基因,是否改變染色體結構? 6 胚胎干細胞的安全性如何?畸胎瘤,腫瘤(zhǒngli)形成? 7 倫理之爭,七.ES細胞技術目前(m249。qi225。n)存在的問題,第五十九頁,共七十頁。,1.ES細胞系的分裂效率低 主要原因是缺乏理想的分離培養(yǎng)體系(tǐx236。),目前對于ES干細胞維持多能性的分子機理缺乏了解,不能根據細胞分化特點和維持不分化的營養(yǎng)要求,建立合理的培養(yǎng)體系,是目前存在的主要問題。 2.ES細胞定向誘導分化的理論和技術水平低 目前的技術還無法對ES細胞實施專一的誘導分化,即分化為特定的細胞類型,如神經或心肌細胞等。,第六十頁,共七十頁。,3.ES細胞治療中面臨的免疫排斥和致癌問題 外源的ES細胞移入病人機體后,細胞表面(biǎomi224。n)的組織相容性抗原將激活免疫系統(tǒng),出現排斥反應,導致移植失敗。 目前關于這方面的機理研究較少,克服排異反應的技術還不具備。,第六十一頁,共七十頁。,4.ES細胞目前無法培育出完整(w225。nzhěng)的器官 5.人ES細胞分離培養(yǎng)面臨的倫理法律問題 獲得ES細胞,必須毀壞人的早期胚胎或胎兒,與宗教的教義和社會倫理相違背,同時還違反國家法律,所以公眾很難接受。,第六十二頁,共七十頁。,八.ES細胞(x236。bāo)技術的發(fā)展方向,1. ES細胞維持自我更新和定向分化的分子機理 2. ES細胞治療技術的研究 用ES細胞修復病變或創(chuàng)傷組織將會引起一場醫(yī)學革命,如何將兩者結合(ji233。h233。)起來非常復雜。,第六十三頁,共七十頁。,3. ES細胞作為工具探討基因功能和個體的發(fā)生發(fā)育 隨著人和其他哺乳動物的基因組計劃完成后,基因的表達調控規(guī)律和在生命活動中的功能研究迫在眉睫。 應用嵌合體技術,以特殊基因標記的ES細胞作為探針,研究未知基因的功能,探討器官的發(fā)生、發(fā)育規(guī)律,將是醫(yī)學、動物科學和發(fā)育生物學研究的前沿(qi225。ny225。n)領域。,第六十四頁,共七十頁。,4. ES細胞治療(zh236。li225。o)中的免疫排斥問題,第六十五頁,共七十頁。,5.治療型克隆技術:用病人的正常細胞作為核供體,通過細胞核移植方法獲得囊胚,然后分離培養(yǎng)ES細胞,再用ES細胞修復衰老或功能異常的器官、組織。但是人細胞核移植技術研究在很多國家(gu243。jiā)是被禁止的,所以這類研究比較困難。,第六十六頁,共七十頁。,第六十七頁,共七十頁。,6.用ES細胞生產轉基因家畜 ES細胞易于(y236。y)基因打靶和基因敲除,用遺傳改良后的ES細胞,通過細胞核移植技術,生產轉基因后代,將是提高轉基因動物生產效率的有效方法。,第六十八頁,共七十頁。,The end,第六十九頁,共七十頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,韓 雪 蕾。用外源基因轉染后,篩選陽性細胞,然后注入到囊胚腔或其他卵裂球聚合獲得嵌合體后代,用轉染的ES細胞分化為生殖干細胞,生產轉基因陽性動物。從胚泡中分離出細胞團的方法主要免疫外科學方法,顯微外科學方法和組織培養(yǎng)法等。其中組織培養(yǎng)法是將胚泡接種在飼養(yǎng)層上,模擬體內胚泡的著床,更接近自然發(fā)育過程,較易獲得胚胎干細胞集落。2.冷凍保存:通過超低溫冷凍保存使細胞的代謝活動完全停止(t237。ngzhǐ),達到長期保存的目的,第七十頁,共七
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