20xx年醫(yī)學專題—第七章哺乳動物胚胎干細胞技術-資料下載頁
2024-11-16 00:29本頁面
【正文】 胞或癌細胞做對照，用專用試劑盒檢測。 4.Apase（堿性磷酸酶）：可通過組織化學方法鑒定，細胞經乙醇或病痛甲醛固定后，直接加入底物，即可鑒定Apase的表達水平，都應該為陽性。 5.核型分析：傳到2~5代時需要進行核型分析，分析時先在細胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的秋水酰胺，使細胞同步在M期，然后用低滲溶液處理，經乙醇冰醋酸溶液固定后染色和顯微照相，最后進行核型分析，檢測細胞是否維持在二倍體狀態(tài)。,第五十六頁，共七十頁。,6.發(fā)育分化潛力： （1）體外誘導分化：是把ES細胞培養(yǎng)在無分化抑制物的普通培養(yǎng)液中，如果ES細胞能自動聚合并分化形成胚狀體，可初步確認具有發(fā)育多能性； （2）畸胎瘤實驗：把ES細胞注射到有免疫(miǎny236。)缺陷成年小鼠或遺傳同質動物的皮下或腎臟、睪丸的被膜下，如果能形成畸胎瘤，可初步判定為細胞具有多能性。,第五十七頁，共七十頁。,（3）嵌合體實驗：把培養(yǎng)的ES細胞與早期胚胎的卵裂球聚合，或直接把ES細胞注入囊胚腔，然后讓重組胚在體內繼續(xù)發(fā)育，通過檢測后代的嵌合狀況，分析ES細胞的分化潛力。只有當操作后的胚胎發(fā)育為嵌合體，注入的細胞能分化為內、中和外三胚層細胞，并參與細胞生殖干細胞形成時，才能確認為ES細胞。 目前(m249。qi225。n)，只有小鼠、猴和人能到達以上指標。,第五十八頁，共七十頁。,1 如何維持體外擴增時不分化？ 2 分化細胞的增殖是一個瓶頸問題：數量和純度 3 如何定向誘導干細胞的分化？明確干細胞發(fā)育的調控機制 4 胚胎干細胞真正用于器官克隆與移植仍需要技術上的突破 5 如何克服移植排斥問題？破壞或改變細胞許多基因的可行性，核移植是否激活卵細胞的沉默基因，是否改變染色體結構？ 6 胚胎干細胞的安全性如何？畸胎瘤，腫瘤(zhǒngli)形成？ 7 倫理之爭,七.ES細胞技術目前(m249。qi225。n)存在的問題,第五十九頁，共七十頁。,1.ES細胞系的分裂效率低 主要原因是缺乏理想的分離培養(yǎng)體系(tǐx236。)，目前對于ES干細胞維持多能性的分子機理缺乏了解，不能根據細胞分化特點和維持不分化的營養(yǎng)要求，建立合理的培養(yǎng)體系，是目前存在的主要問題。 2.ES細胞定向誘導分化的理論和技術水平低 目前的技術還無法對ES細胞實施專一的誘導分化，即分化為特定的細胞類型，如神經或心肌細胞等。,第六十頁，共七十頁。,3.ES細胞治療中面臨的免疫排斥和致癌問題 外源的ES細胞移入病人機體后，細胞表面(biǎomi224。n)的組織相容性抗原將激活免疫系統(tǒng)，出現排斥反應，導致移植失敗。 目前關于這方面的機理研究較少，克服排異反應的技術還不具備。,第六十一頁，共七十頁。,4.ES細胞目前無法培育出完整(w225。nzhěng)的器官 5.人ES細胞分離培養(yǎng)面臨的倫理法律問題 獲得ES細胞，必須毀壞人的早期胚胎或胎兒，與宗教的教義和社會倫理相違背，同時還違反國家法律，所以公眾很難接受。,第六十二頁，共七十頁。,八.ES細胞(x236。bāo)技術的發(fā)展方向,1. ES細胞維持自我更新和定向分化的分子機理 2. ES細胞治療技術的研究 用ES細胞修復病變或創(chuàng)傷組織將會引起一場醫(yī)學革命，如何將兩者結合(ji233。h233。)起來非常復雜。,第六十三頁，共七十頁。,3. ES細胞作為工具探討基因功能和個體的發(fā)生發(fā)育 隨著人和其他哺乳動物的基因組計劃完成后，基因的表達調控規(guī)律和在生命活動中的功能研究迫在眉睫。 應用嵌合體技術，以特殊基因標記的ES細胞作為探針，研究未知基因的功能，探討器官的發(fā)生、發(fā)育規(guī)律，將是醫(yī)學、動物科學和發(fā)育生物學研究的前沿(qi225。ny225。n)領域。,第六十四頁，共七十頁。,4. ES細胞治療(zh236。li225。o)中的免疫排斥問題,第六十五頁，共七十頁。,5.治療型克隆技術：用病人的正常細胞作為核供體，通過細胞核移植方法獲得囊胚，然后分離培養(yǎng)ES細胞，再用ES細胞修復衰老或功能異常的器官、組織。但是人細胞核移植技術研究在很多國家(gu243。jiā)是被禁止的，所以這類研究比較困難。,第六十六頁，共七十頁。,第六十七頁，共七十頁。,6.用ES細胞生產轉基因家畜 ES細胞易于(y236。y)基因打靶和基因敲除，用遺傳改良后的ES細胞，通過細胞核移植技術，生產轉基因后代，將是提高轉基因動物生產效率的有效方法。,第六十八頁，共七十頁。,The end,第六十九頁，共七十頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,韓 雪 蕾。用外源基因轉染后，篩選陽性細胞，然后注入到囊胚腔或其他卵裂球聚合獲得嵌合體后代，用轉染的ES細胞分化為生殖干細胞，生產轉基因陽性動物。從胚泡中分離出細胞團的方法主要免疫外科學方法，顯微外科學方法和組織培養(yǎng)法等。其中組織培養(yǎng)法是將胚泡接種在飼養(yǎng)層上，模擬體內胚泡的著床，更接近自然發(fā)育過程，較易獲得胚胎干細胞集落。2.冷凍保存：通過超低溫冷凍保存使細胞的代謝活動完全停止(t237。ngzhǐ)，達到長期保存的目的,第七十頁，共七
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