20xx年醫(yī)學(xué)專題—第2章-細(xì)胞分離與破碎-資料下載頁(yè)
2024-11-16 00:28本頁(yè)面
【正文】 液體發(fā)生空化作用 破碎程度于細(xì)胞種類、濃度、超聲波聲頻、聲能有關(guān) 強(qiáng)烈的破碎作用，適用于大多數(shù)微生物細(xì)胞 能量(n233。ngli224。ng)利用率低，過程產(chǎn)生大量熱,聲波的傳遞依照正弦曲線縱向傳播，即一層強(qiáng)一層弱，依次傳遞，當(dāng)弱的聲波信號(hào)作用于液體中時(shí)，會(huì)對(duì)液體產(chǎn)生一定的負(fù)壓，即液體體積增加，液體中分子空隙加大，形成許許多多微小的氣泡，而當(dāng)強(qiáng)的聲波信號(hào)作用于液體時(shí)，則會(huì)對(duì)液體產(chǎn)生一定的正壓，即液體體積被壓縮減小，液體中形成的微小氣泡被壓碎。經(jīng)研究證明：超聲波作用于液體中時(shí)，液體中每個(gè)氣泡的破裂會(huì)產(chǎn)生能量(n233。ngli224。ng)極大的沖擊波，相當(dāng)于瞬間產(chǎn)生幾百度的高溫和高達(dá)上千個(gè)大氣壓，這種現(xiàn)象被稱之為”空化作用”，,第三十八頁(yè)，共四十五頁(yè)。,第三十九頁(yè)，共四十五頁(yè)。,2.3.2 化學(xué)和生物化學(xué)(shēnɡ w249。 hu224。 xu233。)滲透,第四十頁(yè)，共四十五頁(yè)。,堿處理法和酶消化法相反，反應(yīng)激烈，不具選擇性，而且較便宜。堿加入細(xì)胞懸浮液中后和細(xì)胞壁進(jìn)行了多種反應(yīng)，包括使磷脂皂化。該操作是細(xì)胞增溶的很好的例子，因?yàn)樗辜?xì)胞壁的成分溶于表面(biǎomi224。n)活性劑，也使蛋白質(zhì)變性。該法不僅破壞了細(xì)胞壁也破壞了產(chǎn)物，因此即便很便宜，堿處理是一種很不常用的方法。,第四十一頁(yè)，共四十五頁(yè)。,滲透壓沖擊(chōngjī)法 高——低滲透壓環(huán)境中轉(zhuǎn)化 凍結(jié)——融化法 1）破壞細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)，增加親水性和通透性； 2）胞內(nèi)水結(jié)晶使胞內(nèi)外產(chǎn)生溶液濃度差，在滲透壓作用 下引起細(xì)胞膨脹破裂,2.3.3 物理(w249。lǐ)滲透法,第四十二頁(yè)，共四十五頁(yè)。,方 法 比 較,第四十三頁(yè)，共四十五頁(yè)。,緊破壞或破碎存在目標(biāo)產(chǎn)物的位置周圍 1）目標(biāo)產(chǎn)物存在于細(xì)胞膜附近時(shí)，采用溫和(wēnh233。)的方法 2）目標(biāo)產(chǎn)物存在于細(xì)胞質(zhì)中時(shí)，采用強(qiáng)烈的機(jī)械破碎法 選擇性溶解目標(biāo)產(chǎn)物 1）使目標(biāo)產(chǎn)物容易溶解釋放 2）其他雜質(zhì)不易溶出 3）多種方法混合使用,2.4 目標(biāo)產(chǎn)物(chǎnw249。)選擇性釋放,第四十四頁(yè)，共四十五頁(yè)。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),本章節(jié)重點(diǎn)：。當(dāng)培養(yǎng)液中含有蛋白質(zhì)時(shí)．可使部分(b249。 fen)蛋白質(zhì)凝聚而同時(shí)過濾除去。其中N為轉(zhuǎn)速，r為離心機(jī)半徑。將 stokes公式中的g用Zg代替，得到離心沉降速度vs公式：。1.2.3.離心分離設(shè)備。破碎效率歲攪拌速度和懸浮液停留時(shí)間增大而增大。高——低滲透壓環(huán)境中轉(zhuǎn)化。凍結(jié)——融化法。2.4 目標(biāo)產(chǎn)物選擇性釋放,第四十五頁(yè)，共四十五頁(yè)。
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