【正文】 物保護(hù)； 食物過敏源檢測：甲殼素、某些魚成份、轉(zhuǎn)基因成分：例轉(zhuǎn)基因魚等。2傳統(tǒng)常規(guī)動物檢疫技術(shù)流行病學(xué)檢疫時，對流行病的分析和確診有至關(guān)重要的作用，但是流行病學(xué)的調(diào)查總結(jié)過程中也存在工作量大且繁瑣，耗費(fèi)的人力多等問題。臨床檢疫方法具簡便易行，適合現(xiàn)場操作等優(yōu)點(diǎn)，但是臨床檢疫對發(fā)病初期尚未出現(xiàn)有病證意義的、特征癥狀的病例，或非典型病例，或癥狀相似病例，往往難于做出診斷。病理學(xué)檢疫技術(shù)既可驗證臨床診斷結(jié)果的正確與否，又可為實驗室診斷方法和內(nèi)容的選擇提供參考依據(jù)。在剖解檢疫時，有些病例往往缺乏特征性的病變，特別是急性死亡的病例、非典型病例和早期屠 宰病例，所以在剖解檢疫這些病例時應(yīng)選擇癥狀較典型、病程較長、未經(jīng)治療的自然死亡病例進(jìn)行剖檢。病原學(xué)檢疫時從病料中分離出病原微生物，雖是確診的重要依據(jù)，但健康動物也有帶菌現(xiàn)象，所以病原學(xué)的檢疫結(jié)果還需與流行病學(xué)及臨床診斷癥狀、病理變化聯(lián)合起來綜合分析。而且任何一種病原學(xué)方法都存在有漏檢的可能，所以即使沒有發(fā)現(xiàn)病原體，也不能完全否定該種傳染病的診斷。免疫學(xué)檢疫技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的檢測、操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn)，是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。但酶聯(lián)免疫分析前期工作復(fù)雜，檢測對象針對性太強(qiáng)，開發(fā)免疫檢測試劑盒所需費(fèi)用昂貴。3現(xiàn)代生物技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用是基于分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展起來的分子生物學(xué)檢測技術(shù)。根據(jù)生物大分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與相互作用原理，從分子水平檢測某種特定生物大分子存在與否。分子生物學(xué)檢疫又稱基因檢疫，主要是針對不同病原微生物所具有的特異性核酸序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行測定。自1976年以來，基因檢疫方法取得了巨大進(jìn)展，建立了DNA限制性內(nèi)切酶圖譜分析、核酸電泳圖譜分析、寡核苷酸指紋圖核酸探針、聚合酶鏈反應(yīng)等。在動物檢疫方面，具有代表性的技術(shù)主要有3大類： 核酸擴(kuò)增技術(shù)：蛋白質(zhì)檢測技術(shù)：蛋白質(zhì)電泳與免疫印跡、重組抗原based、單克隆抗體based。新技術(shù)平臺：生物芯片、變性高效液相色譜、生物傳感器。核酸擴(kuò)增技術(shù)是對核酸進(jìn)行體外生成和放大的技術(shù)，只要起始的生物材料里存在微量的特定核酸（如某種病原體的核酸），通過擴(kuò)增反應(yīng)就能得到大量的可檢測到的特定核酸產(chǎn)物，從而可證明檢測對象的存在。主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)，實時熒光PCR，LAMP, NASBA核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析技術(shù)測序、雜交、酶切等。PCR與實時熒光PCR是發(fā)展成熟且主要應(yīng)用的核酸擴(kuò)增技術(shù)。 PCR檢測PCR技術(shù)用于動物檢疫主要是檢測病原，做早期診斷和病原的鑒定。它不僅可以檢測活的病原體，而且還可檢出已滅活的病原體，只要病原體的核酸未降解。因此，當(dāng)由于各種原因無法進(jìn)行病原分離和鑒定時，該技術(shù)將發(fā)揮巨大的作用。常規(guī)PCR檢測過程包括：取樣、樣品前處理與核酸提取PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物電泳檢測，PCR產(chǎn)物的確證分析（測序、酶切等）。 實時熒光PCR檢測實時熒光PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，每經(jīng)過一個擴(kuò)增循環(huán)，產(chǎn)生一個熒光信號，通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最終得到一條熒光擴(kuò)增曲線，也可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析。實時熒光PCR檢測是當(dāng)前實驗室及商業(yè)重點(diǎn)開發(fā)應(yīng)用的快速檢測方法。其優(yōu)點(diǎn)為：特異性好、靈敏度高、更快速；操作簡單、安全、自動化程度高、防污染；可實現(xiàn)定量檢測；設(shè)備、試劑成本較高；快速篩選檢測方法，仍需確證（常規(guī)PCR及序列分析）等。實時熒光PCR技術(shù)應(yīng)用范圍為重大動物疫病及各種傳染病病原快速檢測方法，疫情監(jiān)控重要的技術(shù)依托；供港澳活禽及產(chǎn)品禽流感，新城疫監(jiān)測；進(jìn)境動物產(chǎn)品口蹄疫，豬生殖與呼吸系統(tǒng)綜合癥檢測；動物及產(chǎn)品甲型流感H1N1監(jiān)測；飼料及動物產(chǎn)品中特定動物源成分檢測等。（LAMP)環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)（LAMP)是在鏈置換DNA聚合酶啟動下的鏈置換DNA合成循環(huán)。反應(yīng)起始階段形成DNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)（LAMP循環(huán)的起始結(jié)構(gòu)），以莖環(huán)結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)階段。擴(kuò)增產(chǎn)物是不同長度的DNA混合物，分別具有不同個數(shù)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，產(chǎn)物DNA序列為擴(kuò)增靶序列的交替反向重復(fù)序列，酶切后可得到單一產(chǎn)物。需針對靶基因的6個特異序列設(shè)計4條引物，還可加上2條環(huán)識別引物以提高速度和產(chǎn)量。LAMP優(yōu)點(diǎn)為簡便、成本低、更快速；設(shè)備和試劑成本低，時間短；高特異性、高靈敏度；識別6個區(qū)域的4條引物；敏感性比常規(guī)PCR高；高產(chǎn)量、易檢測；產(chǎn)量可達(dá)數(shù)十微克，可進(jìn)行熒光檢測（熒光核酸染料）或濁度（焦磷酸鎂沉淀）檢測。適合基層實驗室甚至現(xiàn)場檢測。LAMP缺點(diǎn)：更易污染、不方便產(chǎn)物回收及鑒定、設(shè)計空間較受限、擴(kuò)增產(chǎn)度 500時不能進(jìn)行長鏈擴(kuò)增。 核酸檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀核酸檢測技術(shù)直接應(yīng)用于檢測各種動物病原、病原體分型，特定動物源成份、轉(zhuǎn)基因成份等，并已有一批總局明文批準(zhǔn)采用的檢測項目如：禽流感、甲型流感H1N口蹄疫、SARS、鏈球菌、藍(lán)耳病、轉(zhuǎn)基因、動物源成份等。近幾年發(fā)布（或立項）不少檢測標(biāo)準(zhǔn)（PCR/rPCR)，基本覆蓋主要進(jìn)境動物疫病項目。核酸檢測技術(shù)在直屬局實驗室（中心）均已開展應(yīng)用或研發(fā)，設(shè)備和技術(shù)基礎(chǔ)良好。國內(nèi)外均有成熟的核酸檢測技術(shù)平臺和商業(yè)服務(wù)平臺（設(shè)備、試劑、技術(shù)服務(wù)）；常見病原體已有商品化核酸檢測試劑盒；基本上較重要的各種動物病原體均有已發(fā)表的PCR檢測方法，全系統(tǒng)普遍具備自行開發(fā)建立特定病原的核酸檢測方法的能力。 基因工程、單克隆抗體與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)基因工程、單克隆抗體與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)特異抗原（重組抗原）、單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)特異抗體等，該方法的建立基于重組抗原或單克隆抗體的各種血清學(xué)檢測方法：ELISA、膠體金試紙條、生物芯片等?；蚬こ獭慰寺】贵w與蛋白質(zhì)檢測技術(shù)是系統(tǒng)內(nèi)研究開發(fā)檢測方法/檢測試劑盒的熱點(diǎn)方向之一。隨著科技進(jìn)步和學(xué)科的交融，分子生物學(xué)、材料科學(xué)、微電子、激光檢測、計算機(jī)數(shù)字信號處理等多學(xué)科技術(shù)相融合，實現(xiàn)快速、靈敏、高通量（同步檢測多種目標(biāo)，或同時檢測多個樣品）和自動化檢 測和數(shù)據(jù)處理。伴隨著“人類基因組計劃”而衍生的一項重大高新技術(shù)，通過微加工和微電子等技術(shù)在載體表面構(gòu)建微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，實現(xiàn)了對基因、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、組織以及其他生物組分的準(zhǔn)確、快速、高通量的檢測。1992年第一塊生物芯片誕生，在近幾年迅速崛起，全球約有數(shù)百家生物技術(shù)公司和數(shù)千家研究機(jī)構(gòu)從事生物芯片的研究和開發(fā)工作。生物芯片技術(shù)是分子生物學(xué)技術(shù)與芯片技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生的一項高新技術(shù)?；蛐酒苽浼皺z測流程，是利用原位合成法或?qū)⒁押铣珊玫囊幌盗泄押烁仕嵋灶A(yù)先設(shè)定的排列方式固定在固相支持介質(zhì)表面，形成高密度的寡核甘酸的陣列，樣品與探針雜交后，由特殊的裝置檢出信號，并由計算機(jī)進(jìn)行分析得到結(jié)果，其在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及動物產(chǎn)品中的微生物的檢疫有廣泛的運(yùn)用。美國是生物芯片技術(shù)最為領(lǐng)先的國家，目前美國生物技術(shù)公司研制的生物芯片已進(jìn)入實用化、產(chǎn)業(yè)化階段。我國正式進(jìn)入生物芯片的研究領(lǐng)域是在1998年，我國自主研發(fā)的各類生物芯片及其配套產(chǎn)品累計實現(xiàn)的銷售收入已超過億元人民幣。以生物芯片為核心的相關(guān)產(chǎn)業(yè)正在全球崛起!生物芯片主要包括：按檢測目標(biāo)：基因芯片、蛋白芯片（包括藥殘檢測芯片）、組織芯片、細(xì)胞芯片、糖芯片；按載體：固相芯片、液相芯片。在動物間一種生物芯片主要用于：傳染病（同步檢測多種病原體；同時檢測多個樣品）；藥物殘留（同時檢測多種藥物）；轉(zhuǎn)基因成分、特定動物源成分（同時檢測鑒別多種成分）。（xMAP懸浮芯片技術(shù)）21世紀(jì)初誕生、在流式細(xì)胞術(shù)、ELISA技術(shù)和芯片技術(shù)基礎(chǔ)上開發(fā)的新一代分子診斷技術(shù)平臺，有機(jī)整合了微球（Beads）、激光檢測技術(shù)、流體動力學(xué)、高速的數(shù)字信號處理系統(tǒng)和強(qiáng)大的計算機(jī)運(yùn)算功能，具有更強(qiáng)的檢測特異性和靈敏性。液相芯片（xMAP懸浮芯片技術(shù)）核心技術(shù)是乳膠微球包被和熒光色編碼以及液相分子雜交，檢測速度極快，約十幾分鐘可完成檢測。乳膠微球帶有獨(dú)特的色彩編號，每種小球可分別包被抗原、抗體或核酸等特異分子，小球體懸浮于液相體系中構(gòu)成液相芯片系統(tǒng)，可以特異捕獲多達(dá)100種不同的目標(biāo)分子實現(xiàn)同步特異檢測，其結(jié)果可在瞬間經(jīng)激光判定后由電腦以數(shù)據(jù)信息的形式記錄下來，敏感性顯著超越抗原抗體結(jié)合酶聯(lián)信號或常規(guī)核酸雜交信號檢測。該技術(shù)優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)快速、靈敏度高；通量大；可進(jìn)行多元化分析，靈活性好；采用接近生物系統(tǒng)內(nèi)部環(huán)境的完全液相反應(yīng)體系，穩(wěn)定性好；操作簡便，不需洗滌，耗時短等。（DHPLC)技術(shù)變性高效液相色譜（DHPLC)技術(shù)近年來發(fā)展起來的一項高性價比核酸檢測分析技術(shù)，可進(jìn)行核苷酸片段分離分析、分析檢測已知或未知基因突變及SNP。被譽(yù)為“分子生物學(xué)新技術(shù)平臺”、“臨床基因診斷最佳技術(shù)平臺”。設(shè)備依托：Transgenomic公司的WAVE174。核苷酸片段分析系統(tǒng)利用離子對反相液相色譜原理進(jìn)行核酸片段的分離和分析。DNA SepCartridge分離柱采用無孔多苯乙烯二乙烯基苯（PSDVB）共聚物微球 體作為穩(wěn)定基質(zhì)，當(dāng)DNA樣品注入到色譜柱后，通過與緩沖液中的橋分子三乙基胺(TEAA)的相互作用被吸附到固相柱基質(zhì)上，而乙腈可破壞這一相互作用；通過改變流動相中乙腈的濃度實現(xiàn)DNA片段的分離。DHPLC技術(shù)特點(diǎn)是檢測準(zhǔn)確性高，可分辨單個堿基的差異；操作簡單，自動化分析；結(jié)果重復(fù)性高，速度快；樣品通量高；消耗品低價性，性價比高。 生物傳感器（Biosensor）生物傳感器（Biosensor）是將生物體的成份（酶、抗原、抗體、DNA、激素）或生物體本身（細(xì)胞、細(xì)胞器、組織）固定化在一器件上作為敏感元件的傳感器稱為生物傳感器。其工作原理是待測物質(zhì)經(jīng)擴(kuò)散作用進(jìn)入固定生物膜敏感層，經(jīng)分子識別而發(fā)生生物學(xué)作用，產(chǎn)生的信息如光、熱、音等被相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)換器變?yōu)榭啥亢吞幚淼碾娦盘?，再?jīng)二次儀表放大并輸出，以電極測定其電流值或電壓值，從而換算出被測物質(zhì)的量或濃度。根據(jù)生物分子識別元件上的敏感材料可分為：酶傳感器、微生物傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、基因傳感器、細(xì)胞及細(xì)胞器傳感器。生物傳感器可監(jiān)測多種細(xì)菌、病毒、生物毒素。能在10s內(nèi)偵檢出微量級生化戰(zhàn)劑，包括委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、黃熱病毒、炭疽桿菌、流感病毒、鼠疫耶爾森菌、埃博拉出血熱病毒、肉毒桿菌類毒素等；農(nóng)藥、獸藥殘留（農(nóng)產(chǎn)品、食品、環(huán)境監(jiān)測）等方面?？萍歼M(jìn)步使各種用途的自動化實驗室設(shè)備得以被發(fā)明制造并迅速投入市場、加以應(yīng)用。顯著提高了實驗室和臨床診斷工作效率，節(jié)省人力、試劑、更為準(zhǔn)確快速，更為安全。例如，全自動微生物培養(yǎng)、鑒定和藥敏檢測分析系統(tǒng)；全自動酶免工作站；全自動微量移液和PCR工作站；全自動核酸蛋白純化系統(tǒng)等。自動化設(shè)備的配備和使用將是高端實驗室建設(shè)發(fā)展的主要方向，也將帶動實驗室檢驗?zāi)芰退降奶岣摺Ｈ缛詣用该夤ぷ髡?、全自動核酸純化系統(tǒng)、全自動PCR移液工作站的研發(fā)是市場投放將逐步解決檢驗程序復(fù)雜、檢測周期漫長、檢測成本昂貴、檢驗人員專業(yè)素質(zhì)要求較高等問題。4展望隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，動物檢疫的各種技術(shù)也必將不斷地更新、完善和迅速發(fā)展，尤其是速測技術(shù)更能適應(yīng)現(xiàn)代高效、快速的節(jié)奏和滿足社會的要求。它不僅是政府監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)的需要，而且是廣大消費(fèi)者的迫切需要。為了保障消費(fèi)者的安全和健康，增強(qiáng)動物產(chǎn)品的國際競爭力，應(yīng)該靈活選擇各種測試技術(shù)，嚴(yán)把動物產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)。此外還應(yīng)建全動物制品的監(jiān)測技術(shù)，實施從農(nóng)場生產(chǎn)到餐桌食用的全過程監(jiān)控，從源頭抓起，提高動物養(yǎng)殖的科學(xué)管理，完善檢測技術(shù)，提高動物產(chǎn)品質(zhì)量，推動養(yǎng)殖業(yè)和外貿(mào)可持續(xù)發(fā)展。動物檢驗檢疫技術(shù)體系不可或缺的重要組成部分，現(xiàn)代生物技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用將日益常規(guī)化，檢測技術(shù)更細(xì)化、更精準(zhǔn)；新型技術(shù)平臺的建立和應(yīng)用常態(tài)化；自動化設(shè)備的配備使動物檢疫更加 方便；便攜式檢測工具的開發(fā)和應(yīng)用使實現(xiàn)更多現(xiàn)場更加快速檢測。參考文獻(xiàn)：（略）。