mtt法檢測細(xì)胞活力精講-資料下載頁
2024-10-04 01:28本頁面
【正文】 面的結(jié)晶顆粒吸掉 ,建議各孔吸棄 150160ul即可 )。 ? 翻轉(zhuǎn)倒扣法：可以直接將板翻轉(zhuǎn)倒扣〔墊幾層濾紙〕 2－ 3次，比用“吸〞的方法更不容易使細(xì)胞脫離出來?？梢暂p拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，但前提是細(xì)胞貼壁要比較牢。 第二十頁，共二十四頁。 參加 DMSO ? 在同一批實(shí)驗(yàn)中最好不要更換 DMSO。加 DMSO前把孔中液體盡量棄干凈如果培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測時(shí)可以盡量去除培養(yǎng)液的影響， DMSO的量也可為 100ul或 150ul. ? 加了 DMSO后用振蕩器輕輕振蕩 5－ 10min, 時(shí)間控制盡量嚴(yán)格一點(diǎn) ,放置時(shí)間長了會(huì)影響結(jié)果 ,值會(huì)偏大 ,且結(jié)果不可信 . ? 參加 DMSO溶解后盡快檢測。 第二十一頁，共二十四頁。 OD值的測定 ? 至于測定波長的選擇是因顯色溶液而異的。對于 DMSO，溶解后呈紫〔紅〕色，490nm有最大吸收值 。 ? ? DMSO溶后 10分鐘內(nèi)測，越放顏色越深，而ＳＤＳ做為溶解液測吸收光值，其值可在三天內(nèi)保持不變。 ? 細(xì)胞密度偏大測出的吸光度也會(huì)偏大，細(xì)胞密度小吸光度也會(huì)偏?。涣硗飧?xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會(huì)低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時(shí)間短， OD值也會(huì)偏低。如果各個(gè)孔的孔間差異性特別明顯的話說明有可能存在污染 ,空白孔的 OD值太高，很可能是細(xì)菌污染。 第二十二頁，共二十四頁。 謝謝觀看 第二十三頁，共二十四頁。 內(nèi)容總結(jié) MTT法檢測細(xì)胞活力。 5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對照孔〔細(xì)胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕。抑制率 % =。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行 MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿 第二十四頁，共二十四頁。
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