【正文】 進(jìn)行交換 ,從而達(dá)到分離的目的。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和表面電荷的分布主要影響其離子交換的性能 ,影響蛋白質(zhì)離子交換色譜保留的其他因素 ,還有交換基團(tuán)和交換介質(zhì)的種類、吸附和洗脫的條件等。 ? (2)反相色譜和疏水色譜是根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性的差異來分離純化的。 ? (3)親和色譜是利用固定化配基與目的蛋白質(zhì)之間特異的生物親和力進(jìn)行吸附的 。親和色譜的過程大致分為 3步：第一步配基固定化 。第二步吸附目的產(chǎn)物；第三步樣品解吸。 ? (4)凝膠過濾色譜 ? 凝膠過濾是以具有空隙、大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì) ,小分子能進(jìn)入孔內(nèi) ,在柱中緩慢移動(dòng) ,而大分子不能進(jìn)入孔內(nèi) ,快速移動(dòng) ,利用這種移動(dòng)差別可使大分子與小分子分開。 ? 非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)的去除 ? 非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)不應(yīng)忽視 ,在純化過程中 ,需特別注意3種可能存在的非蛋白類雜質(zhì) ,它們是 DNA、熱原質(zhì)和病毒 ? (1)DNA的去除 ? (2)熱原質(zhì)的去除 ? (3)病毒的去除 ? 四、選擇分離純化方法的依據(jù) ? 根據(jù)產(chǎn)物表達(dá)形式來選擇 ? 根據(jù)分離單元之間的銜接選擇 ? 根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇 第九節(jié) 基因工程藥物的質(zhì)量控制 ? 一、原材料的質(zhì)量控制 ? 原材料的質(zhì)量控制是要確保編碼藥品的 DNA序列的正確性 ,重組微生物來自單一克隆 ,所用質(zhì)粒純而穩(wěn)定 ,以保證產(chǎn)品質(zhì)量的安全性和一致性。 ? 二、培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制 ? 在工程菌菌種貯存中 ,要求種子克隆純而穩(wěn)定；在培養(yǎng)過程中 ,要求工程菌所含的質(zhì)粒穩(wěn)定 ,始終無突變；在重復(fù)發(fā)酵中 ,工程菌表達(dá)穩(wěn)定；始終能排除外源微生物污染。 ? 三、純化工藝過程的質(zhì)量控制 ? 產(chǎn)品要有足夠的生理和生物學(xué)試驗(yàn)數(shù)據(jù) ,確證提純物分子批間保持一致；外源性蛋白質(zhì)、 DNA與熱原都控制在規(guī)定限度下。 ? 四、目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制 ? 基因工程藥物質(zhì)量控制主要包括以下幾項(xiàng)要求：產(chǎn)品的鑒別、純度、活性、安全性、穩(wěn)定性和一致性。 ? 產(chǎn)品的鑒別 ? (1)肽圖分析：肽圖分析是用酶法或化學(xué)法降解目的蛋白質(zhì) ,對(duì)生成的肽段進(jìn)行分離分析。 ? 肽圖分析結(jié)果與氨基酸成分和序列分析結(jié)果合并 ,作為蛋白質(zhì)的精確鑒別。 ? (2)氨基酸成分分析：對(duì)目的產(chǎn)物的純度仍可以提供重要信息。 ? (3)部分氨基酸序列分析：可作為重組蛋白質(zhì)和多肽的重要鑒定指標(biāo)。 ? (4)重組蛋白質(zhì)的濃度測(cè)定和相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定： ? 濃度測(cè)定方法主要有凱氏定氮法、雙縮脲法、染料結(jié)合比色法、福林－酚法和紫外光譜法等。 ? 相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定最常用的方法有凝膠過濾法和 SDS－PAGE法 ,凝膠過濾法是測(cè)定完整的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量 ,而 SDS－ PAGE法測(cè)定的是蛋白質(zhì)亞基的相對(duì)分子質(zhì)量。 ? (5)蛋白質(zhì)二硫鍵分析：方法有對(duì)氯汞苯甲酸法 (pchloromercuribenzoate,PCMB)和 5,5’－二硫雙基－ 2－硝基苯甲酸法 (5,5’－ dithiobis－ 2－nitrobenzoic acid,DTNB)等。 ? 純度分析 ? 純度分析是基因工程藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵項(xiàng)目 ,它包括目的蛋白質(zhì)含量測(cè)定和雜質(zhì)限量分析兩個(gè)方面的內(nèi)容。 ? (1)目的蛋白質(zhì)含量測(cè)定：通常采用的方法有還原性及非還原性 SDS－ PAGE法、等電點(diǎn)聚焦、各種HLPC、毛細(xì)管電泳 (CE)等。 ? (2)雜質(zhì) ? 1)蛋白類雜質(zhì)：主要的是純化過程中殘余的宿主細(xì)蛋白。它的測(cè)定基本上是采用免疫分析的方法 ,其靈敏度可達(dá)百萬分之一。同時(shí)需輔以電泳等其他檢測(cè)手段對(duì)其加以補(bǔ)充和驗(yàn)證。其他的蛋白雜質(zhì)也要嚴(yán)格控制。 ? 2)非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)：主要有病毒和細(xì)菌等微生物、熱原、熱原質(zhì)、內(nèi)毒素、致敏原及 DNA。 ? 生物活性測(cè)定：需要進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)和通過細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行體外效價(jià)測(cè)定。 ? 穩(wěn)定性考察 ? 產(chǎn)品一致性的保證 ? 五、產(chǎn)品的保存 ? 液態(tài)保存 ? (1)低溫保存 ? (2)在穩(wěn)定 pH條件下保存 ? (3)高濃度保存 ? (4)加保護(hù)劑保存 ? 固態(tài)保存 ? 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , March 15, 2023 ? 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 00:12:2900:12:2900:123/15/2023 12:12:29 AM ? 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 :12:2900:12Mar2315Mar23 ? 1故人江海別，幾度隔山川。 00:12:2900:12:2900:12Wednesday, March 15, 2023 ? 1乍見翻疑夢(mèng)，相悲各問年。 :12:2900:12:29March 15, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 3月 15日星期三 上午 12時(shí) 12分 29秒 00:12: ? 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 3月 上午 12時(shí) 12分 :12March 15, 2023 ? 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 2023年 3月 15日星期三 12時(shí) 12分 29秒 00:12:2915 March 2023 ? 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 上午 12時(shí) 12分 29秒 上午 12時(shí) 12分 00:12: ? 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 , March 15, 2023 ? 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 00:12:2900:12:2900:123/15/2023 12:12:29 AM ? 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 :12:2900:12Mar2315Mar23 ? 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 00:12:2900:12:2900:12Wednesday, March 15, 2023 ? 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :12:2900:12:29March 15, 2023 ? 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 3月 15日星期三 上午 12時(shí) 12分 29秒 00:12: ? 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 3月 上午 12時(shí) 12分 :12March 15, 2023 ? 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 2023年 3月 15日星期三 12時(shí) 12分 29秒 00:12:2915 March 2023 ? 1空山新雨后，天氣晚來秋。 上午 12時(shí) 12分 29秒 上午 12時(shí) 12分 00:12: ? 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 , March 15, 2023 ? 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 00:12:2900:12:2900:123/15/2023 12:12:29 AM ? 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :12:2900:12Mar2315Mar23 ? 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 00:12:2900:12:2900:12Wednesday, March 15, 2023 ? 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :12:2900:12:29March 15, 2023 ? 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 3月 15日星期三 上午 12時(shí) 12分 29秒 00:12: ? 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 3月 上午 12時(shí) 12分 :12March 15, 2023 ? 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 3月 15日星期三 12時(shí) 12分 29秒 00:12:2915 March 2023 ? 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 上午 12時(shí) 12分 29秒 上午 12時(shí) 12分 00:12: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感謝您的下載觀看 專家告訴