ch09遺傳重組-資料下載頁(yè)
2025-02-18 01:35本頁(yè)面
【正文】 。 ? λ噬菌體的附著位點(diǎn)稱(chēng) attP， 由 P、 O和 P ’三個(gè)序列組成。 ? 其中 O 序列是 attB 和 attP 所共有的，序列完全一致，稱(chēng)核心序列 （ core sequence） .是位點(diǎn)特異性重組發(fā)生的地方。 ? 整合反應(yīng)由 λ噬菌體 int基因 的產(chǎn)物 整合酶（ integrase, Int）催化。 Int是一種 DNA結(jié)合蛋白，對(duì) POP ’ 序列有強(qiáng)的親和力。 ? 整合反應(yīng)還需要一種有大腸桿菌編碼的一種細(xì)菌蛋白，稱(chēng)為 整合宿主因子 IHF (integration host factor, IHF) 。 ? Int和 IHF可以在體外進(jìn)行位點(diǎn)特異性重組。 ? 切除反應(yīng)發(fā)生在原噬菌體兩端的 attL和 attR之間，產(chǎn)物為 λ噬菌體環(huán)狀 DNA和細(xì)菌染色體 DNA。催化切除反應(yīng)的除了 Int和 IHF外，還需要一種叫做 切除酶 （ exicisionase, Xis）的蛋白參加，該酶由 λ噬菌體的 xis基因 編碼。 ? Xis對(duì) 控制反應(yīng)方向 起重要作用，它是切除反應(yīng)所需要的，但卻抑制整合反應(yīng)。 ? 整合和切除反應(yīng)所需要識(shí)別的序列對(duì)不相同 。整合要求對(duì) attB 和 attP之間進(jìn)行識(shí)別，但切除要求對(duì) attL和 attR識(shí)別。因此位點(diǎn)特異性重組的方向性特征由 重組位點(diǎn)的特征所控制。 ? 整合和切除反應(yīng)皆需 Int和 IHF蛋白 。 λ噬菌體 DNA的整合機(jī)制 ? λDNA的整合涉及到 attB 和 attP的 核心序列DNA鏈的割裂和重接。 ? 首先在 attB 和 attP位點(diǎn)上產(chǎn)生同樣的交錯(cuò)切口，形成了 5’OH和 3’P的末端。 5’單鏈區(qū)全長(zhǎng) 7個(gè)堿基。兩個(gè)核心區(qū)的斷裂完全相同，連接過(guò)程不需要任何新 DNA的合成。 ? 在整合反應(yīng)中，互補(bǔ)的 單鏈末端交互雜和 ，連接 并完成整合過(guò)程。 ? 整個(gè)反應(yīng)中沒(méi)有可以自由旋轉(zhuǎn)的中間體。 ? 斷裂和重新結(jié)合反應(yīng)與 拓?fù)洚悩?gòu)酶 I催化的反應(yīng)機(jī)制相類(lèi)似，不同的是相互連接的兩條鏈不是來(lái)自于同一雙螺旋，而是來(lái)自于不同的雙螺旋 。 演講完畢，謝謝觀看！
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