基因的重組與轉(zhuǎn)移-資料下載頁
2025-02-06 19:19本頁面
【正文】 涂于含抗菌素的平板 37℃ 過夜 環(huán)形重組質(zhì)粒 質(zhì)粒自我連接 線性載體或 DNA片段進入細菌會被降解。 ①環(huán)形質(zhì)粒數(shù) （ 1）重組質(zhì)粒 6. 影響轉(zhuǎn)化率的因素 ①生長狀態(tài) 制備感受態(tài)菌必須使用對數(shù)生長期的菌。 ②必須在冰冷的條件下制備。 要充分，使細菌細胞膜失去一些蛋白。 ④儲存感受態(tài)菌要在 70℃ 以下 ③ CaCl2處理 ⑤使用感受態(tài)菌時必須迅速融化 融化后一般不能再次凍存使用。 （ 2）感受態(tài)細胞 （ petent cells) 把重組的噬菌體 ?DNA或 Cosmid質(zhì)粒 DNA包裝成具有感染能力的 ?噬菌體顆粒。 7. 體外包裝的噬菌體的轉(zhuǎn)導 （ 1）體外包裝（ in vitro packaging） （ 2）轉(zhuǎn)導（ transduction） 通過受體菌細胞表面的 ?DNA接受器位點（ receptor site)，使帶有外源基因的重組體 DNA注入受體大腸桿菌進行擴增。 cI857基因是個溫度敏感性阻遏蛋白基因，感染細菌后， 在 32℃ 下培養(yǎng)細菌時能夠保持溶源性。 但當溫度升高到 44℃ — 45℃ 時，就會導致 cI基因編碼的 阻遏蛋白失活 ， ?DNA復制、外殼蛋白合成。便于提取外殼蛋白。 （ 3） cI857基因突變的 ?噬菌體 但由于該噬菌體的 S基因上有一個突變，所以細菌還不裂解。 cI857 其它基因 溶源狀態(tài)（ ?DNA不轉(zhuǎn)錄、不翻譯） ?DNA 阻遏 蛋白 阻遏 蛋白 44℃ — 45℃ ?DNA轉(zhuǎn)錄、翻譯合成外殼蛋白 32℃ ?噬菌體 1 外殼蛋白基因 E發(fā)生了無義突變， 不能合成頭部蛋白 ，但能合成其它外殼蛋白（尾部蛋白）。 在 cI857基因突變的 ?噬菌體的基礎(chǔ)上，選擇兩種外殼蛋白的突變型 ?噬菌體。 （ 4） 互補型噬菌體 外殼蛋白基因 D發(fā)生了無義突變， 不能合成頭部的包裝識別蛋白 ，但能合成其它外殼蛋白（頭部、尾部蛋白）。 ?噬菌體 2 (5) 體外包裝過程 體外包裝好的重組噬菌體感染受體菌，使受體菌發(fā)生溶菌，形成噬菌斑。（每 ?g ?DNA能形成 106噬菌斑）。 （ 6） 轉(zhuǎn)導 葉盤 消毒 切取 土壤農(nóng)桿菌浸泡 看護培養(yǎng)基 愈傷組織 分化幼苗 1. 葉盤法（ leaf disk） 第三節(jié) 外源基因?qū)胫参锛毎? 植物細胞 原生質(zhì)體 纖維素酶和果膠酶 DNA 混合入電擊緩沖液 12kV, 325?F電擊 愈傷組織 幼苗 分化 2. 電擊法（ electroporation) 又稱 高速微型子彈射擊法（ Highvelocity microprojectiles) DNA ?m金或鎢彈頭 吸附 特制手槍 射擊植物 裝入 （ gene gun） 演講完畢，謝謝觀看！
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