實驗十一組織培養(yǎng)與病毒的細胞感染法-華北煤炭醫(yī)學院-資料下載頁
2025-01-01 15:58本頁面
【正文】 酶聯(lián)免疫吸附試驗 ? （ Enzyme Linked immunosorbent assay， ELISA） ? ELISA是當前各實驗檢測抗原抗體最常用的方法之一，也是進行病毒快速診斷的重要手段。它具有靈敏度高（ 10－ 9一10－ 12克），特異性強、操作簡便、易于觀察、便于現(xiàn)場大規(guī)模檢查。 ? ELISA的種類有許多種，但用于病毒快速診斷常用間接法和雙抗體夾心法 （一）間接法（ indirect method） ? 1． 抗原包被 純化抗原用 適當稀釋后 ， 在微量凹孔板上 ， 每孔加 100微升 ， 置濕盒中 4℃ 過液 ， 洗滌三次 。 ? 2． 加待撿血清 每孔加 100微升適當稀釋的待檢血清 ， 置濕盒中 ， 37℃ 2小時 。 洗滌三次 。 ? 3． 加酶結(jié)合物 每孔加 100微升酶標記抗人 Ig，置濕盒中 ， 37℃ 2小時 。 洗滌三次 。 ? 4． 加底物 每孔加底物 100微升 ， 置濕盒 ，37℃ 30分鐘 。 ? 6． 加終止液 100微升 。 ? 6． 讀取結(jié)果 。 （二）雙抗體夾心法（ Double antibody sandwich method） ? 1． 抗體包被 已知抗體用 稀釋至 1— 10微克／毫升 ， 在微量凹孔板上 ，每孔加 100微升包被 ， 置濕盒 4℃ 過夜 。 洗滌三次 。 ? 2． 加待檢標本 每孔中加含抗原的待檢標本 100微升置濕盒 37℃ 小時 。 洗滌三次 。 ? 3． 加酶結(jié)合物 每孔加酶標記的特異性抗體 100微升置濕盒 37℃ 小時 。 洗滌三次 。 ? 4． 加底物 ? 5． 加終止液 ? 6．讀取結(jié)果 ? 【 結(jié)果判讀 】 ? 用酶標測定儀測在 492nm下各標本光密度 OD值 。 ? ELISA的結(jié)果易受到各種因素影響 ， 因此每次試驗 （ 每一塊試驗板 ） 都設(shè)陽性對照 ， 陰性對照 、 稀釋液對照 、 陽性對照 OD值 ≥， 陰性對照 OD值 ≤， 結(jié)果用 P／ N值表示 。 ? P/N值 ? P／ N值 P／ N值 ≥ 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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