dna分子標記用于中藥鑒定-資料下載頁
2025-01-01 05:09本頁面
【正文】 保守區(qū)的序列設計通用引物，使其在靶基因保守區(qū)識別并擴增，這樣可以對不同分類等級生物類群的 DNA 進行擴增，而不需要預先知道靶基因的序列信息，使應用 DNA 測序法鑒別生藥成為可能。? 生藥的 DNA 測序鑒定就是運用 DNA 測序技術建立正品藥材及相關混偽品的原動植物的基因序列數據庫，用同樣的方法對待檢測樣品進行測序，對照數據庫即可鑒定出中藥材的真?zhèn)?。該方法重現性好，鑒定結果準確可靠。但是，實際應用中，采用全序列比對的方法比較麻煩，為此又在序列測定的基礎上發(fā)展了更加簡便的 PCR 擴增的特定片段的限制性位點分析（ PCRRFLP ）和位點特異性鑒別 PCR 方法（ diagnostic PCR ）。 ? PCRRFLP 是在 PCR 和 DNA 序列分析基礎上產生的 RFLP 技術。該方法是通過 PCR 擴增一段 DNA 片段，然后再選擇適當的限制性內切酶，消化 PCR 產物，經電泳，可得到有種屬特異性的電泳譜帶，從而達到品種鑒定的目的。例如該方法在貝母類、人參類和術類藥材鑒定中應用。 ? 自 De Salle R, Birstein VJ 1996 年在 Nature 上發(fā)表了利用人工設計的引物鑒別魚子醬中魚卵所屬鱘魚的種類后，鑒別性 PCR 不斷得到推廣和應用。位點特異性鑒別 PCR （ diagnostic PCR ）方法是根據正品及其混偽品特定區(qū)域的 DNA 序列數據，設計有高度特異性的正品藥材的鑒別引物。 ? 與通用引物不同的是，這對引物在 PCR 擴增時只能對來自正品的藥材的 DNA 模板中的特定的區(qū)域進行有效擴增，而對來自混偽品或其它樣品中該區(qū)域不能進行擴增。高特異性 PCR 鑒別反應條件與普通 PCR 基本一樣，但在 PCR 循環(huán)中復性溫度較高，一般在 60℃ 左右。在這樣的 PCR 條件下，如果引物設計合理，假陽性出現的概率非常之微。 ? 當有樣品鑒定時，從待鑒定的樣品中提取少量 DNA ，以此為模板，用高特異性的鑒別引物在適當的條件下進行 PCR 擴增， PCR 產物用 %~% 的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增結果，如為陽性，則為正品，否則為非正品藥材，以此達到鑒別目的。高特異性鑒別引物設計所依據的 DNA 序列資料，可以通過對相關物種的 DNA 進行測序研究獲得，也可以從 GenBank 或 EMBL 等 DNA 數據庫中直接查得。例如該方法已在貝母類、石斛類、蛇類和龜甲類藥材鑒定中應用。 五、基因芯片技術 ? 基因芯片（ DNA chip ），又稱 DNA 微陣列 (DNA microarray) ?；蛐酒夹g是基于堿基互補原理，在固體表面按一定的陣列集成大量的基因探針，通過與待測基因進行雜交反應，進而對大量基因進行平行瞬時分析檢測的技術。 ? DNA 芯片技術能夠對微量樣本中的核酸序列信息進行快速、高通量和低成本檢測和分析，特別是其大通量并行化采集生物信息的特點，是目前其它分析技術無法相比的。? 藥材鑒別芯片設計的思路是，首先獲取不同中藥樣本的特異性基因序列，將這些特定序列作為探針固定于玻片上制成基因芯片，當一個來自植物或動物的中藥樣本中含有可以與之互補的特定基因片段時，基因芯片即可將其測試出來。如果在單片芯片上固定了足夠多的來自不同中藥樣本的特有基因序列，則此種芯片就可以用于多種中藥樣本的鑒別。謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT
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