分子生物學(xué)7-核酸分子雜交-資料下載頁(yè)
2024-12-28 04:58本頁(yè)面
【正文】 的 載玻片 或 尼龍膜 的表面 “樣品 ”： 標(biāo)記了 熒光 或 同位素 待測(cè)靶核酸 —— DNA 、 cDNA或 RNA 在計(jì)算機(jī)控制的點(diǎn)樣及強(qiáng)大的掃描分析硬件及軟件的支持下，可以在很小的載玻片或尼龍膜上固定數(shù)千甚至數(shù)萬(wàn)個(gè) “ 探針 ” ，只需一次實(shí)驗(yàn)，就能夠?qū)⒊汕先f(wàn)要研究的表達(dá)基因記錄下來(lái)。 應(yīng)用： 基因診斷、分析基因組及發(fā)現(xiàn)新基因、基因表達(dá)圖譜的分析、遺傳性疾病的分析、病原微生物的大規(guī)模檢測(cè)等 。 DNA芯片（ DNA chip）colony or phage hybridization 可以篩選大量細(xì)菌或噬菌斑中特異的 DNA序列，也可以在篩選重組 DNA文庫(kù)時(shí)檢測(cè)出現(xiàn)率很低的重組子。含有與探針互補(bǔ)序列的菌落或噬菌斑經(jīng)放射自顯影后，在 X光底片上出現(xiàn)雜交點(diǎn)。將轉(zhuǎn)化后得到的菌落或噬菌斑原位轉(zhuǎn)移到 NC膜上，得到一個(gè)與平板菌落或噬菌斑分布完全一致的復(fù)制品。原位裂解細(xì)胞，堿變性，核酸分子被固定于膜上加入標(biāo)記的 DNA或 RNA探針進(jìn)行 雜交根據(jù)陽(yáng)性反應(yīng)位置，可從保留的母板上挑出所需的 陽(yáng)性克隆 。二、核酸原位雜交（ nucleic acid hybridization in situ） 用標(biāo)記的已知核酸序列為探針，與 細(xì)胞或組織切片 中核酸進(jìn)行雜交檢測(cè)的方法。 每張標(biāo)本所用雜交液較少， 20~100μl，為了避免雜交液蒸發(fā)后造成雜交液濃縮，需使用 密閉的濕盒 。 在組織或細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行 DNA或 RNA精確 定位和定量 。 探針與分裂中期染色體 DNA雜交，研究染色質(zhì)中特定核酸序列在染色體中的精確定位； 探針與細(xì)胞內(nèi) RNA進(jìn)行雜交，觀察該組織細(xì)胞中特定基因的表達(dá)水平 ； 用 特異性的細(xì)菌、病毒的核酸 作為探針對(duì)組織細(xì)胞進(jìn)行雜交，確定有無(wú)該病原體的感染。應(yīng)用： The result of FISH 利用 M13噬菌體體系合成放射性的 ssDNA探針 。 探針與待測(cè) RNA樣品在液相中進(jìn)行雜交，形成DNA/RNA。核酸酶 S1能專一 性地降解未形成雜交的 DNA和 RNA單鏈，不降解 DNA/RNA雙鏈。 酚 /氯仿抽提，乙醇沉淀，在 8 mol/L脲 聚丙烯酰胺凝膠中分離，放射自顯影。三、液相雜交技術(shù)1．核酸酶 S1保護(hù)分析法 （ nuclease S1 protection assay） 探針為 ssRNA，雜交后形成 RNA/RNA， RNA酶 A和T1專一性地降解 ssRNA，而 dsRNA不被降解。 酚 /氯仿抽提，乙醇沉淀，在 8 mol/L脲 聚丙烯酰胺凝膠中分離，放射自顯影。2． RNA酶保護(hù)分析法核 酸 雜 交 分 類 表雜交方法 適 用 范 圍Southern 印跡 檢測(cè)經(jīng)凝膠電泳分開(kāi)的 DNA分子，需轉(zhuǎn)印到膜上Northern 印跡 檢測(cè)經(jīng)凝膠電泳分開(kāi)的 RNA分子，需轉(zhuǎn)印到膜上斑點(diǎn)及狹縫印跡雜交 檢測(cè)未經(jīng)分離的、固定在膜上的 DNA或 RNA分子菌落或噬菌斑雜交 檢測(cè)固定在膜上的、經(jīng)裂解后從細(xì)菌或噬菌體中釋放出的 DNA分子原位雜交 檢測(cè)細(xì)胞或組織中的 DNA或 RNA分子謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1