新藥臨床前藥理毒理學(xué)研究(之五)-資料下載頁
2024-10-09 15:00本頁面
【正文】 基本原理： 將致敏動(dòng)物血清（內(nèi)含豐富 IgE抗體）皮內(nèi)注射于正常動(dòng)物。IgE與皮膚肥大細(xì)胞的 Fcз受體結(jié)合，使之被動(dòng)致敏。當(dāng)致敏抗原激發(fā)時(shí)，引起局部肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)，從而使局部血管通透性增加，注入染料可滲出于皮丘，形成一個(gè)藍(lán)斑。根據(jù)藍(lán)斑范圍或分光光度計(jì)法測定，判定過敏反應(yīng)程度。 2）試驗(yàn)動(dòng)物 ： PCA反應(yīng)常用的動(dòng)物是大鼠，亦用小鼠，有時(shí)根據(jù)試驗(yàn)需要用家兔。因這些動(dòng)物 PCA反應(yīng)是由 IgE介導(dǎo)的。 3）試驗(yàn)分組： 應(yīng)設(shè)立陰性、陽性對照組和受試物不同劑量組。陰性對照組應(yīng)給予同體積的溶媒，陽性對照組給予卵白蛋白或天花粉或已知致敏陽性藥物。每組動(dòng)物數(shù)至少 4只。 4）致敏： 按臨床擬給藥途徑。隔日致敏一次，共 5次。末次致敏后 10天左右采血， 2022轉(zhuǎn) /分離心 10分鐘，分離血清， 20℃ 保存， 2周內(nèi)備用。 5）激發(fā)： 上述各組抗血清用生理鹽水稀釋成 1: 1: 1:32。在背部脫毛3 4cm2動(dòng)物皮內(nèi)注射各組的抗血清 。經(jīng) 24或 48小時(shí)后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的 %伊文思蘭染料共 1mL。 6）測定及結(jié)果評價(jià)： 30分后麻醉處死各組動(dòng)物，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于 5mm者判定為陽性。 ㈡ 過敏性試驗(yàn)方法 ⒉ 全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)（ ASA） 1）基本原理 對致敏動(dòng)物體內(nèi)靜脈注射抗原，觀察抗原與 IgE抗體結(jié)合后導(dǎo)致肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞脫顆粒、釋放活性介質(zhì)而致的全身性過敏反應(yīng)。觀察受試物經(jīng)全身給藥后對動(dòng)物引起的過敏性反應(yīng)。 2）試驗(yàn)方法 ① 動(dòng)物 通常選用體重為 300400克的 Hartley種雄性豚鼠。 ② 劑量組別 陰性、陽性對照組，低、高劑量組。每組動(dòng)物至少 4只。 ③ 致敏 致敏途徑：按臨床給藥途徑；致敏次數(shù)：隔日一次，共 5次；致敏劑量：陰性對照組給予同體積溶解藥物的溶媒；陽性對照組：給予 15mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏陽性物質(zhì)；低劑量組給予臨床最大劑量（ /kg或 m2）；高劑量組給予低劑量的數(shù)倍量。 ④ 激發(fā) 激發(fā)途徑：通常靜脈內(nèi)給藥；激發(fā)次數(shù)：末次注射后第 1014日一次激發(fā)；激發(fā)劑量：通常為致敏劑量的 25倍量；觀察指標(biāo)：致敏期間每日觀察每只動(dòng)物的癥狀，初次和最后一次致敏和激發(fā)當(dāng)日測定每組每只動(dòng)物的體重。靜脈注射后立刻至 30分鐘，按表 5癥狀詳細(xì)觀察每只動(dòng)物的反應(yīng)，癥狀的出現(xiàn)及消失時(shí)間。最長應(yīng)觀察 3小時(shí)。 0 正常 7 呼吸急促 14 步態(tài)不穩(wěn) 1 不安 8 排尿 15 跳躍 2 立毛 9 排糞 16 喘息 3 發(fā)抖 10 流淚 17 痙攣 4 搔鼻 11 呼吸困難 18 橫轉(zhuǎn) 5 噴嚏 12 羅音 19 潮式呼吸 6 咳嗽 13 紫癜 20 死亡 過敏反應(yīng)癥狀 0 過敏反應(yīng)陰性 14癥狀 + 過敏反應(yīng)弱陽性 110癥狀 ++ 過敏反應(yīng)陽性 119癥狀 +++ 過敏反應(yīng)強(qiáng)陽性 20 ++++ 過敏反應(yīng)極強(qiáng)陽性 全身致敏性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 謝謝光臨！ 歡迎討論！
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